专利名称：风疹、巨细胞、单疱病毒及弓形虫抗体酶免联检试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域。
酶免检测方法以其快速、简便和灵敏度高等特性，已在全世界范围内的诊断检测中得到日益广泛的应用，并且逐步取代固相放射免疫分析方法。
弓形虫(Toxoplasma)，风疹病毒(Rubella virus)，巨细胞病毒(Cytomegalovirus)，单纯疱疹病毒I型、II型(Herpes simplex virus I、II)，缩写为ToRCH，《全国临床检验操作规程》(第二版)已有规定，以下即运用此缩写。
现有技术检测ToRCH感染的酶免试剂都是一次检测只能测一个指标，这样在实际检测中不仅浪费试剂，效率也不能提高，使用起来不方便，其它方法也有此弊病。
本发明涉及了临床医学诊断ToRCH早期感染的过程中，通过单次实验，即可全部筛除ToRCH·IgM阴性标本，使ToRCH·IgM抗体的联合检测得以实现的一种酶免诊断试剂盒，主要解决诊断ToRCH早期感染过程中，通常需要对一份标本逐一检测单项抗体，既费时又费力，又增加试剂成本的问题。
本发明的特征是在一般酶免诊断试剂的生产条件下，完成ToRCH·IgM抗体酶免联检试剂盒的组配，采用酶免捕获法，试剂盒组成为抗人IgM抗体包被板，ToRCH多项组合抗原，多项组合酶标记物，底物液A(TMB)，底物液B(H2O2)，反应终止液(H2SO4)，洗涤液(PBST)，阴、阳性对照血清，通过对二到五种特异性抗原及相应的二到五种特异性酶标抗体，按适当比例及浓度进行组配，使得单项ToRCH指标均为阴性的标本，联检结果仍为阴性，单项指标如有阳性的标本联检结果则为阳性；这样临床标本中占90％比例的阴性标本即可确定为阴性，10％左右比例的阳性标本再用单项酶免试剂盒进行逐一检定，以确定具体阳性指标。
本发明涉及ToRCH五项联检试剂盒、四项联检试剂盒、三项联检试剂盒、二项联检试剂盒，均能一次区分阴性或阳性IgM抗体。
以下结合实施例说明本发明。
以刚地弓形虫(Toxo)、风疹病毒(RV)、巨细胞病毒(CMV)、单纯疱疹病毒I型、II型(HSV-I)、(HSV-II)五项IgM抗体联检试剂盒为例。
本试剂盒采用酶免捕获法，本试剂是通过以下技术方案来实现的1、用最适浓度的抗人IgM抗体(μ链)包被反应板微孔并加以洗涤、封板。
2、组配ToRCH组合抗原，通过滴定确定组配的最佳比例和浓度。(普通的单项酶免试剂为单项抗原，联检试剂中我们使用了ToRCH的二到五项联检抗原，实施例为五项联检，因此此处的组合抗原为Toxo、RV、CMV、HSV-I、HSV-II五项组合抗原。)3、配制Toxo、RV、CMV、HSV-I、HSV-II五项联检所需酶标记物溶液，所用各项抗体均需达到一定的纯度，用辣根过氧化物酶(HRP)进行标记，通过滴定反应，确定最终酶标记物溶液的浓度。
4、底物溶液的配制，选用四甲基联苯胺(TMB)为底物液A，过氧化氢(H2O2)为底物液B。
5、阴性血清制备，采用正常人血清，多份混合并进行防腐处理。
6、阳性血清的制备，采用ToRCH·IgM抗体检测阳性的血清，多份混合并进行灭活及防腐处理后采用。
7、洗涤液及终止液选用常规ELISA法所要求的通用方法配制，洗涤液为PBST，终止液为2MH2SO4。
8、该组成的试剂盒按照ELISA方法进行操作检测，10例临床标本结果列举如下表 P/N＞5试剂有效，N值＜0.05时，以N为0.05计，样本OD值＞2.1N，判为阳性。
其中，联检结果3号、9号为阳性，其余均为阴性；单项试剂盒结果为3号CMV·IgM阳性9号Toxo·IgM、RV·IgM阳性本发明可简单方便地应用于临床医学诊断，尤其是大大降低了检测工作量和试剂成本，为大规模操作提供更为简便有效的方法。
权利要求
1.风疹、巨细胞、单疱病毒及弓形虫抗体(ToRCH·IgM)酶免联检试剂盒，其特征在于该试剂盒在诊断ToRCH早期感染的过程中，通过单次实验，即可全部筛除ToRCH·IgM阴性标本，使ToRCH·IgM抗体联合检测得以实现，试剂盒基本组成为阴、阳性对照血清，抗人IgM抗体包被板，ToRCH多项组合抗原，ToRCH多项组合酶标记物，底物液A(TMB)，底物液B(H2O2)，终止液(H2SO4)，洗涤液(PBST)。
2.如权利要求1所述的联检试剂盒，其特征在于可实现ToRCH·IgM抗体的二到五项任意联检。
3.如权利要求1所述的联检试剂盒，其特征在于调配适宜的中和用组合抗原与特异性组合酶标记物，其比例与浓度应使得联检结果同单项检测相一致。
全文摘要
本发明涉及的联检试剂盒,在诊断ToRCH早期感染的过程中,通过单次实验,可全部筛除ToRCH·IgM阴性标本,解决了单项试剂需要对一份标本逐一检测单项抗体的缺陷。本发明生产组配的ToRCH·IgM抗体酶免联检试剂盒组成为抗人IgM抗体包被板,ToRCH组合抗原,组合酶标记物,底物液,反应终止液,洗涤液,阴、阳性对照血清。本发明应用于临床医学诊断,可大大降低检测工作量和试剂成本,为大规模操作提供更为简便有效的方法。
文档编号G01N33/571GK1340712SQ00123730
公开日2002年3月20日 申请日期2000年9月1日 优先权日2000年9月1日
发明者许宏艳 申请人:许宏艳