聚碳酸酯材料制成，可以方便的观察储液池和内腔液面的高度；该装置总高度为10cm，除端盖部16外，内空圆柱形的直径为8cm，总容积约为500ml。
[0030]端盖部16内设有立方体的中空空间15，且中空空间15与肝组织固定装置6吻合，端盖部16的内部下端设有第一筛网17，第一筛网17为20目，其孔径0.8_，可滤过较大块的肝组织碎肩及筋膜等，而允许小的肝细胞团块通过；端盖部16的下端还设有端盖部螺纹18，中间部20的顶端设有与端盖部螺纹18衔接的上端螺纹19，端盖部螺纹18与上端螺纹19形成第一螺纹连接处30 ;中间部20的内部设有第二筛网21，第二筛网21为300目，其孔径50 μ m，允许单细胞大小及更小的物质通过；第一筛网17与第二筛网21形成的空间为细胞团容纳腔体31。
[0031]第二筛网21上放置有第一磁珠23，磁力搅拌器34工作时，第一磁珠23旋转带动液体涡旋样运动，以防止第二筛网21阻塞以及促进胶原酶对肝细胞团的充分作用，使其变为单个原代肝细胞；中间部20的下端设有下端螺纹22，底部25的顶端设有与下端螺纹22衔接的底部螺纹24，下端螺纹22和底部螺纹24形成第二螺纹连接处32。
[0032]底部25的内部设有第三筛网26，第三筛网26为1250目，其孔径10 μ m，单细胞不能通过；第二筛网21与第三筛网26形成的空间为细胞富集腔体33，第三筛网26上放置有第二磁珠29，第二磁珠29旋转带动液体涡旋样运动，以防止第二筛网26阻塞；位于第三筛网26的底部25内空间为灌流液暂储腔体28，底部的侧壁上设有液体出口 27。
[0033]上述包含肝组织固定及多层滤过装置的原代肝细胞分离系统用于分离肝组织细胞的具体步骤如下:
[0034](I)肝组织固定
[0035]先对反应器各部件进行灭菌处理，分离肝细胞的各步骤均在无菌的超净台或者百级实验室中进行，将肝组织放置在三个固定板围成的空间内；安装第二活动板8，沿着第一滑轮轨道11滑动第二活动板8直至压紧肝组织，然后锁闭第一滑轮4 ;安装第一活动板9，使得第二活动板8在合适位置穿过交叉缝10，沿着第二滑轮轨道2滑动第一活动板9直至压紧肝组织，然后锁闭第二滑轮12 ;在第二活动板8及第二固定板5上的固定孔2中贯通插入固定片，由此形成六个面的立方体固定装置用于固定用于细胞分离的的肝组织；
[0036](2)系统的组装
[0037]将端盖部16、中间部20和底部25通过相应的螺旋组装好，并放置第一磁珠23和第二磁珠29，以形成多层滤过装置36 ;将固定有肝组织的肝组织固定装置6放置在中空空间15内，并液体管路连接好蠕动栗、磁力搅拌器34和储液容器39 ；
[0038](3 )肝组织胶原酶灌流液灌流
[0039]灌流喷头通过筛孔13插入肝组织脉管中，或通过穿刺针多点位刺入肝组织中，打开第二蠕动栗40，将储液容器39中胶原酶灌流液灌流至肝组织中，在胶原酶的作用下肝组织中的肝细胞逐渐分离，并随灌流液往下流，当多层滤过装置36液面超过第一网筛17高度时，打开磁力搅拌器34调节转速，使第一磁珠23和第二磁珠29缓慢旋转，并立即打开第一蠕动栗38，以相应第一蠕动栗38相应的速度将灌流液暂储腔体28中的灌流液通过液体出口 27排出并回流至储液容器39中；灌流过程中，可去除固定片14，并通过刀片切割帮助肝细胞充分解离；
[0040](4)原代肝细胞收集
[0041]灌流结束时停止第二蠕动栗40，第一蠕动栗38继续工作，抽吸多层滤过装置36中的灌流液，当灌流液液面低于第二螺纹连接处32高度时停止抽吸，并停止磁力搅拌器34工作，按螺纹拧开分离中间部20和底部25，用移液器转移原代肝细胞悬液至相应的容器内，以进一步离心获得原代肝细胞。
[0042]对于本领域技术人员而言，显然本实用新型不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本实用新型的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本实用新型。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本实用新型的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本实用新型内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。
【主权项】
1.包含肝组织固定及多层滤过装置的原代肝细胞分离系统，由肝组织固定装置(6)、多层滤过装置(36)、磁力搅拌器(34)、第一蠕动栗(38)、储液容器(39)和第二蠕动栗(40)组成，其特征在于，所述肝组织固定装置(6 )设置在多层滤过装置(36 )内，肝组织固定装置(6 )和多层滤过装置(36 )之间通过管道依次连接第一蠕动栗(38 )、储液容器(39 )和第二蠕动栗(40); 所述肝组织固定装置(6)是由多个固定板和活动板组成的中空正方体结构，所述固定板和活动板上均开有筛孔(13)，所述固定板包括紧密衔接的第一固定板(1)、第二固定板(5)和第三固定板(7)均不能活动，第一固定板(I)、第二固定板(5)和第三固定板(7)共同构成立方体的三个固定面；所述活动板包括第一活动板(9)和第二活动板(8)，第一活动板(9)通过第一滑轮(4)在第二滑轮轨道(3)上滑动，第二活动板(8)通过第二滑轮(12)在第一滑轮轨道(11)上滑动，第一活动板(9)上设有多个间隔相等的交叉缝(10)，交叉缝(10)的一端封闭且与第一活动板(9)主体相连，交叉缝(10)的另一端开放且容纳第二活动板(8)穿过，第一活动板(9)和第二活动板(8)构成立方体的两个活动面；第二固定板(5)和第二活动板(8)上均开设有位于筛孔(13)之间的固定孔(2)，固定孔(2)中穿设有固定片(14)，多个固定片穿入固定孔(2)中后形成立方体的一个面；所述第一滑轮(4)和第二滑轮(12)上均设有滑轮开关； 所述多层过滤装置(36)由中空圆柱形的端盖部(16)、中间部(20)和底部(25)三部分组成，所述端盖部(16)内设有立方体的中空空间(15)，且中空空间(15)与肝组织固定装置(6)吻合，端盖部(16)的内部下端设有第一筛网(17)，端盖部(16)的下端还设有端盖部螺纹(18)，所述中间部(20)的顶端设有与端盖部螺纹(18)衔接的上端螺纹(19)，端盖部螺纹(18)与上端螺纹(19)形成第一螺纹连接处(30);所述中间部(20)的内部设有第二筛网(21)，第一筛网(17)与第二筛网(21)形成的空间为细胞团容纳腔体(31)，所述第二筛网(21)上放置有第一磁珠(23)，所述中间部(20)的下端设有下端螺纹(22)，所述底部(25)的顶端设有与下端螺纹(22)衔接的底部螺纹(24)，下端螺纹(22)和底部螺纹(24)形成第二螺纹连接处(32)，所述底部(25)的内部设有第三筛网(26)，第二筛网(21)与第三筛网(26)形成的空间为细胞富集腔体(33)，所述第三筛网(26)上放置有第二磁珠(29)，位于第三筛网(26 )的底部(25 )内空间为灌流液暂储腔体(28 )，所述底部的侧壁上设有液体出口( 27 )。2.根据权利要求1所述的包含肝组织固定及多层滤过装置的原代肝细胞分离系统，其特征在于，所述第一筛网(17)、第二筛网(21)和第三筛网(26)的孔径依次减小。
【专利摘要】本实用新型公开了包含肝组织固定及多层滤过装置的原代肝细胞分离系统，由肝组织固定装置、多层滤过装置、磁力搅拌器、储液容器和蠕动泵组成，肝组织固定装置和多层滤过装置之间通过管道依次连接第一蠕动泵、储液容器和第二蠕动泵，肝组织固定装置为中空立方体构型，其中空立方形大小可调节；多层过滤装置分为端盖部、中间部、底部，通过螺纹相衔接，各部内有不同孔径的筛网，并配备防堵塞磁珠，通过对含细胞灌流液的逐层过滤，可获得纯度较高的原代肝细胞，并且可实现灌流液的重复利用。本实用新型提供一整套结构完善的从肝组织中分离原代肝细胞的装置系统，简便、快捷、经济的获得纯度较高的原代肝细胞。
【IPC分类】C12M1/02, C12M1/12, C12M1/00, C12M1/40
【公开号】CN204918596
【申请号】CN201520519168
【发明人】范学工, 周鹏程, 李宁, 郑宜翔, 肖银宗
【申请人】中南大学湘雅医院
【公开日】2015年12月30日
【申请日】2015年7月16日