专利名称：硝基苯、苯胺快速复合降解菌剂及制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种处理受污染地下水的菌剂、菌剂制备方法与应用
背景技术：
硝基苯是制备苯胺的过程中最主要的原料，在制备苯胺的过程中所产生废水的主
要成分是苯胺、硝基苯，并对地下水、土壤、地表水造成严重的污染。苯胺类化合物是致癌物
质，它对环境造成的污染随着它的广泛应用而日趋严重。美国、日本等国把苯胺类化合物列
入主要监测项目或优先监测的污染物黑名单。硝基苯类化合物是高毒性的物质，可以通过
呼吸道及皮肤侵入人体后，致使人体引起抽搐、嘴唇和指甲发蓝，或皮肤发蓝、腹痛、腹泻、
头痛、轻度头昏、气促及肢体发冷、神经系统症状，严重时会对人产生致突或致癌。
目前的研究多集中在常温下(25°C )单菌对苯胺或硝基苯的降解上，对苯胺、硝基
苯的降解单菌、影响降解的因素、代谢机理及相关的代谢产物、酶、基因等进行了深入的研
究。但是由于纯菌的局限性，当其应用到低温的(12°C ±3)地下环境中时，单菌对环境中的
影响因素比较敏感，很容易造成所投加菌种不能表现出降解效果甚至消亡。而混合菌种是
多菌种共同存在的一个系统，对外界环境的变化具有一定的缓冲能力，筛选混合降解菌具
有更重要的生态学意义。目前应用混菌降解BTEX、原油、多环芳烃等污染物已经取得了一定
的成果，但是能同时降解苯胺、硝基苯复合降解菌剂的相关研究成果较少，特别是快速降解
苯胺、硝基苯复合降解剂更为少见。
发明内容
本发明的目的就是针对上述现有技术的不足，提供一种处理受污染地下水的菌 剂； 本发明的另一 目的是提供一种处理受污染地下水菌剂的制备方法；
本发明的还一 目的是提供一种处理受污染地下水菌剂的保存及活化方法；
本发明的再一 目的是提供一种处理受污染地下水菌剂的应用。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的 硝基苯、苯胺快速复合降解菌剂的筛选和驯化，包括以下顺序和步骤 a、菌种的筛选，取化工厂排污口底泥10ml，置于装有玻璃珠和90ml蒸馏水的
250ml三角瓶中，在l(TC恒温振荡器中振荡曝气24小时后，接种于含有硝基苯、苯胺各
100mg/L的种子培养液中，再培养5天，即为硝基苯、苯胺的降解菌群；b、取上述菌液5ml， 8000rpm离心5min，用灭菌的无机盐培养基洗涤2次，再接种到
新鲜含有硝基苯、苯胺各100mg/L的种子培养液中，在1(TC，120rpm摇床里培养7天，重新
传代，共驯化5次； c、待驯化结束后，将所得驯化菌群应用传统的分离纯化手段进行分离纯化，共得
到5株单菌，4t:冰箱保存； d、经对5株单菌进行鉴定，分别为皱纹假单胞菌(pseudomonas corrugata)、荧光假单胞菌(pseudomonas fluorescens) 、^U禾口食酸菌(Acidovorax temperans)、腊状芽 包
杆菌(Bacillus cereus)、铁角蕨假单胞菌(Pseudomonas asplenii) 硝基苯、苯胺复合降解菌剂的制备方法，包括以下顺序和步骤 e、将降解菌剂在含有硝基苯100mg/L和苯胺100mg/L的无机盐培养基中活化，并
传代2次； f、将活化后的降解菌剂重新接种于含有硝基苯100mg/L和苯胺100mg/L的无机盐 培养基中，振荡培养至对数生长期； g、将培养至对数生长期的菌种按照5% _8%的接种量接入种子罐，培养至对数生 长期； h、将培养至对数生长期的种子培养液按照5% _8%的接种量接入生产罐进行扩 大化培养，经离心得到菌液，菌液立即加入保护剂，分装后利用真空冷冻干燥机制备成固体 菌剂。 硝基苯、苯胺快速复合降解菌剂的保存及活化方法，采用砂土管保存，包括以下顺 序和步骤 i、制备砂土管将沙、土按质量比2 : l混合，混匀的砂土分装入保藏管中，i2rc 湿热灭菌30min ; j、制备菌悬液向培养好的斜面培养物中倒入2-3ml无菌水，洗下细胞制成菌悬
液，均匀滴入保藏管中，用冷冻真空干燥器将水分抽干； k、将砂土管用火焰熔封后，在低温4 6t:干燥处保藏； 1、恢复培养无菌条件下打开砂土管，取部分沙土粒于斜面培养基，待菌落形成后 再传代一次。 硝基苯、苯胺快速复合降解菌剂的应用，皱纹假单胞菌、荧光假单胞菌、铁角蕨假
单胞菌、腊状芽孢杆菌、温和食酸菌五种细菌按4 :3:i:i: i的比例混合用于地下水 受硝基苯、苯胺、苯、甲苯、氯苯污染严重地区地下水的污染治理。 本发明的目的还可以通过以下技术方案实现 无机盐培养基为Na2HP04 12H20 3. 8g/L、 KH2P04 1. 0g/L、 KC1 3. 0g/L和 MgS04 7H20 0. 2g/L混合构成。 种子培养液为:Na2HP04 12H20 3. 8g/L、KH2P04 1. 0g/L、KCl 3. 0g/L和MgS04 *7H20 0. 2g/L混合构成。 扩大化培养液为淀粉1. 88g/L，乙醇1. 56g/L，麦芽糖2. 08g/L，硝酸铵0. 24g/L，
亚硝酸钠0. 47g/L，尿素0. 18g/L和无机盐8g/L混合构成。 扩大化培养温度为10°C ，通气量为50-60L/min，培养时间为36_70h。 保护剂为糖蜜和麸皮，按质量分数每100ml菌液加入灭菌后的0. 49糖蜜和0. 2g
的麸皮。 有益效果硝基苯、苯胺快速复合降解菌剂在配水中对AN和NB的降解范围在 0. 7-550mg/L之间，降解率在75-100X之间，对苯胺、硝基苯在第3天降解率为95X以上。在 吉化双苯厂爆炸场地取回的地下水样品中有机物24种，该地下水受有机物污染严重，都为 含苯环类物质，其中硝基苯、苯胺、苯、甲苯、氯苯浓度分别为194. 40、92. 72、 104. 30、4. 86、 5. 62mg/L，应用本发明的硝基苯、苯胺快速复合降解菌剂，在160h内降解菌群能将硝基苯、苯胺降解基本完全。具有高效、快速的特点，适用于突发环境污染事件的应急修复。菌种分类命名分类命名皱纹假单胞菌拉丁文名Pseudomonas corrugate保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心地址北京市朝阳区大屯路保藏日期2009年10月12日保藏编号GMCC3319分类命名荧光假单胞菌拉丁文名Pseudomonas fluorescens保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心地址北京市朝阳区大屯路保藏日期2009年10月12日保藏编号CGMCC3320分类命名温和食酸菌拉丁文名Acidovorax temperans保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心地址北京市朝阳区大屯路保藏日期2009年10月12日保藏编号CGMCC3321分类命名腊状芽孢杆菌拉丁文名Bacillus cereus保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心地址北京市朝阳区大屯路保藏日期2007年7月24日保藏编号CGMCC No. 2118分类命名铁角蕨假单胞菌拉丁文名Pseudomonas asplenii保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心地址北京市朝阳区大屯路保藏日期2007年7月24日保藏编号CGMCC No. 2119
具体实施方式
下面具体结合实施例作进一步的详细说明实施例1 硝基苯、苯胺快速复合降解菌剂的筛选和驯化，包括以下顺序和步骤 a、菌种的筛选，取化工厂排污口底泥1 Oml ，置于装有玻璃珠和90ml蒸馏水的
250ml三角瓶中，在l(TC恒温振荡器中振荡曝气24小时后，接种于含有硝基苯、苯胺各100mg/L、 Na2HP04 12H20 3. 8g/L、 KH2P04 1. 0g/L、 KC1 3. 0g/L和MgS04 7H20 0. 2g/L混合 构成的种子培养液中，再培养5天，即为硝基苯、苯胺的降解菌群； b、取上述菌液5ml，8000rpm离心5min，用灭菌的无机盐培养基洗涤2次，再接种 到新鲜含有硝基苯、苯胺各100mg/L、Na2HP04 12H20 3. 8g/L、 KH2P041. Og/L、KCl 3. Og/L禾口 MgS04 *7H20 0. 2g/L混合构成的种子培养液中，在l(TC， 120rpm摇床里培养7天，重新传代， 共驯化5次； c、待驯化结束后，将所得驯化菌群应用传统的分离纯化手段进行分离纯化，共得
到5株单菌，4t:冰箱保存； d、经对5株单菌进行鉴定，分别为皱纹假单胞菌(pseudomonas corrugata)、荧 光假单胞菌(pseudomonas fluorescens) 、^U禾口食酸菌(Acidovorax temperans)、腊状芽 包 杆菌(Bacillus cereus)、铁角蕨假单胞菌(Pseudomonas asplenii)
硝基苯、苯胺复合降解菌剂的制备方法，包括以下顺序和步骤
e、将降解菌剂在含有硝基苯、苯胺各100mg/L、 Na2HP04 12H20 3. 8g/L、 KH2P04 1. Og/L、KCl 3. Og/L和MgS04 7H20 0. 2g/L混合构成的无机盐培养基中活化，并传代2次；
f、将活化后的降解菌剂重新接种于含有硝基苯、苯胺各100mg/L、 Na2HP04 12H20 3. 8g/L、KH2P04 1.0g/L、KCl 3. Og/L和MgS04 7H20 0. 2g/L混合构成的无机盐培养基中，振 荡培养至对数生长期； g、将培养至对数生长期的菌种按照5X的接种量接入种子罐，培养至对数生长 期； h、将培养至对数生长期的种子培养液按照5X的接种量接入生产罐进行扩大化培 养，培养温度为l(TC，通气量为50-60L/min，培养时间为36_70h。经离心得到菌液，菌液立 即加入按质量分数每100ml菌液加入灭菌后的0. 4g糖蜜和0. 2g麸皮的保护剂，分装后利 用真空冷冻干燥机制备成固体菌剂。 硝基苯、苯胺快速复合降解菌剂的保存及活化方法，采用砂土管保存，包括以下顺 序和步骤 i、制备砂土管将沙、土按质量比2 : l混合，混匀的砂土分装入保藏管中，i2rc 湿热灭菌30min ; j、制备菌悬液向培养好的斜面培养物中倒入2ml无菌水，洗下细胞制成菌悬液，
均匀滴入保藏管中，用冷冻真空干燥器将水分抽干；k、将砂土管用火焰熔封后，在低温4t:干燥处保藏； 1、恢复培养无菌条件下打开砂土管，取部分沙土粒于斜面培养基，待菌落形成后 再传代一次。 硝基苯、苯胺快速复合降解菌剂的应用，皱纹假单胞菌、荧光假单胞菌、铁角蕨假
单胞菌、腊状芽孢杆菌、温和食酸菌五种细菌按4 :3:i:i: i的比例混合用于地下水
受硝基苯、苯胺、苯、甲苯、氯苯污染严重地区地下水的污染治理。实施例2 硝基苯、苯胺快速复合降解菌剂的筛选和驯化，包括以下顺序和步骤 a、菌种的筛选，取化工厂排污口底泥10ml，置于装有玻璃珠和90ml蒸馏水的
250ml三角瓶中，在10C°恒温振荡器中振荡曝气24小时后，接种于含有硝基苯、苯胺各
100mg/L、Na2HP04 12H20 3. 8g/L、KH2P04l. Og/L、KCl 3. Og/L和MgS04 7H20 0. 2g/L混合构
7成的种子培养液中，再培养5天，即为硝基苯、苯胺的降解菌群； b、取上述菌液5ml，8000rpm离心5min，用灭菌的无机盐培养基洗涤2次，再接种 到新鲜含有硝基苯、苯胺各100mg/L、Na2HP04 12H20 3. 8g/L、 KH2P041. Og/L、KCl 3. Og/L禾口 MgS04 *7H20 0. 2g/L混合构成的种子培养液中，在l(TC， 120rpm摇床里培养7天，重新传代， 共驯化5次； c、待驯化结束后，将所得驯化菌群应用传统的分离纯化手段进行分离纯化，共得
到5株单菌，4t:冰箱保存； d、经对5株单菌进行鉴定，分别为皱纹假单胞菌(pseudomonas corrugata)、荧 光假单胞菌(pseudomonas fluorescens) 、^U禾口食酸菌(Acidovorax temperans)、腊状芽 包 杆菌(Bacillus cereus)、铁角蕨假单胞菌(Pseudomonas asplenii)
硝基苯、苯胺复合降解菌剂的制备方法，包括以下顺序和步骤
e、将降解菌剂在含有硝基苯、苯胺各100mg/L、 Na2HP04 12H20 3. 8g/L、 KH2P04 1. Og/L、KCl 3. Og/L和MgS04 7H20 0. 2g/L混合构成的无机盐培养基中活化，并传代2次；
f、将活化后的降解菌剂重新接种于含有硝基苯、苯胺各100mg/L、 Na2HP04 12H20 3. 8g/L、KH2P04 1.0g/L、KCl 3. Og/L和MgS04 7H20 0. 2g/L混合构成的无机盐培养基中，振 荡培养至对数生长期； g、将培养至对数生长期的菌种按照7X的接种量接入种子罐，培养至对数生长 期； h、将培养至对数生长期的种子培养液按照6X的接种量接入生产罐进行扩大化培 养，培养温度为l(TC，通气量为50-60L/min，培养时间为36_70h。经离心得到菌液，菌液立 即加入按质量分数每100ml菌液加入灭菌后的0. 4g糖蜜和0. 2g麸皮的保护剂，分装后利 用真空冷冻干燥机制备成固体菌剂。 硝基苯、苯胺快速复合降解菌剂的保存及活化方法，采用砂土管保存，包括以下顺 序和步骤 i、制备砂土管将沙、土按质量比2 : l混合，混匀的砂土分装入保藏管中，i2rc 湿热灭菌30min ; j、制备菌悬液向培养好的斜面培养物中倒入2. 5ml无菌水，洗下细胞制成菌悬 液，均匀滴入保藏管中，用冷冻真空干燥器将水分抽干；
k、将砂土管用火焰熔封后，在低温5t:干燥处保藏； 1、恢复培养无菌条件下打开砂土管，取部分沙土粒于斜面培养基，待菌落形成后 再传代一次。 硝基苯、苯胺快速复合降解菌剂的应用，皱纹假单胞菌、荧光假单胞菌、铁角蕨假
单胞菌、腊状芽孢杆菌、温和食酸菌五种细菌按4 :3:i:i: i的比例混合用于地下水 受硝基苯、苯胺、苯、甲苯、氯苯污染严重地区地下水的污染治理。 实施例3 硝基苯、苯胺快速复合降解菌剂的筛选和驯化，包括以下顺序和步骤
a、菌种的筛选，取化工厂排污口底泥1 Oml ，置于装有玻璃珠和90ml蒸馏水的 250ml三角瓶中，在10C°恒温振荡器中振荡曝气24小时后，接种于含有硝基苯、苯胺各 100mg/L、 Na2HP04 12H20 3. 8g/L、 KH2P04 1. Og/L、 KC1 3. Og/L和MgS04 7H20 0. 2g/L混合构成的种子培养液中，再培养5天，即为硝基苯、苯胺的降解菌群； b、取上述菌液5ml，8000rpm离心5min，用灭菌的无机盐培养基洗涤2次，再接种到新鲜含有硝基苯、苯胺各100mg/L、Na2HP04 12H20 3. 8g/L、 KH2P041. Og/L、KCl 3. Og/L禾口MgS04 *7H20 0. 2g/L混合构成的种子培养液中，在l(TC， 120rpm摇床里培养7天，重新传代，共驯化5次； c、待驯化结束后，将所得驯化菌群应用传统的分离纯化手段进行分离纯化，共得
到5株单菌，4t:冰箱保存； d、经对5株单菌进行鉴定，分别为皱纹假单胞菌(pseudomonas corrugata)、荧光假单胞菌(pseudomonas fluorescens) 、^U禾口食酸菌(Acidovorax temperans)、腊状芽 包杆菌(Bacillus cereus)、铁角蕨假单胞菌(Pseudomonas asplenii)
硝基苯、苯胺复合降解菌剂的制备方法，包括以下顺序和步骤
e、将降解菌剂在含有硝基苯、苯胺各100mg/L、 Na2HP04 12H20 3. 8g/L、 KH2P041. Og/L、KCl 3. Og/L和MgS04 7H20 0. 2g/L混合构成的无机盐培养基中活化，并传代2次；
f、将活化后的降解菌剂重新接种于含有硝基苯、苯胺各100mg/L、 Na2HP04 12H203. 8g/L、KH2P04 1.0g/L、KCl 3. Og/L和MgS04 7H20 0. 2g/L混合构成的无机盐培养基中，振荡培养至对数生长期； g、将培养至对数生长期的菌种按照8X的接种量接入种子罐，培养至对数生长期； h、将培养至对数生长期的种子培养液按照8X的接种量接入生产罐进行扩大化培养，培养温度为l(TC，通气量为50-60L/min，培养时间为36_70h。经离心得到菌液，菌液立即加入按质量分数每100ml菌液加入灭菌后的0. 4g糖蜜和0. 2g麸皮的保护剂，分装后利用真空冷冻干燥机制备成固体菌剂。 硝基苯、苯胺快速复合降解菌剂的保存及活化方法，采用砂土管保存，包括以下顺序和步骤 i、制备砂土管将沙、土按质量比2 : l混合，混匀的砂土分装入保藏管中，i2rc湿热灭菌30min ; j、制备菌悬液向培养好的斜面培养物中倒入3ml无菌水，洗下细胞制成菌悬液，均匀滴入保藏管中，用冷冻真空干燥器将水分抽干；k、将砂土管用火焰熔封后，在低温6t:干燥处保藏； 1、恢复培养无菌条件下打开砂土管，取部分沙土粒于斜面培养基，待菌落形成后再传代一次。 硝基苯、苯胺快速复合降解菌剂的应用，皱纹假单胞菌、荧光假单胞菌、铁角蕨假
单胞菌、腊状芽孢杆菌、温和食酸菌五种细菌按4 :3:i:i: i的比例混合用于地下水受硝基苯、苯胺、苯、甲苯、氯苯污染严重地区地下水的污染治理。
权利要求
一种硝基苯、苯胺快速复合降解菌剂，其特征在于，活性成分为皱纹假单胞菌(pseudomonas corrugata)、荧光假单胞菌(pseudomonas fluorescens)、温和食酸菌(Acidovorax temperans)、腊状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、铁角蕨假单胞菌(Pseudomonas asplenii)。
2. 按照权利要求1所述的硝基苯、苯胺快速复合降解菌剂，其特征在于，硝基苯、苯胺降解菌群的筛选和驯化，包括以下顺序和步骤a、 菌种的筛选，取化工厂排污口底泥10ml，置于装有玻璃珠和90ml蒸馏水的250ml三 角瓶中，在1(TC恒温振荡器中振荡曝气24小时后，接种于含有硝基苯、苯胺各100mg/L的种 子培养液中，再培养5天，即为硝基苯、苯胺的降解菌群；b、 取上述菌液5ml， 8000rpm离心5min，用灭菌的无机盐培养基洗涤2次，再接种到新鲜 含有硝基苯、苯胺各100mg/L的种子培养液中，在l(TC， 120rpm摇床里培养7天，重新传代， 共驯化5次；c、 待驯化结束后，将所得驯化菌群应用传统的分离纯化手段进行分离纯化，共得到5株单菌，4t:冰箱保存；d、 经对5株单菌进行鉴定，分别为皱纹假单胞菌(pseudomonas corrugata)、荧光假 单胞菌(pseudomonas fluorescens)、温禾口食酸菌(Acidovorax temperans)、腊状芽孢杆菌 (Bacillus cereus)、铁角蕨假单胞菌(Pseudomonas asplenii)
3. 按照权利要求1所述的硝基苯、苯胺复合降解菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下顺序和步骤e、 将降解菌剂在含有硝基苯100mg/L和苯胺100mg/L的无机盐培养基中活化，并传代 2次；f 、将活化后的降解菌剂重新接种于含有硝基苯100mg/L和苯胺100mg/L的无机盐培养 基中，振荡培养至对数生长期；g、 将培养至对数生长期的菌种按照5% _8%的接种量接入种子罐，培养至对数生长期；h、 将培养至对数生长期的种子培养液按照5% _8%的接种量接入生产罐进行扩大化 培养，经离心得到菌液，菌液立即加入保护剂，分装后利用真空冷冻干燥机制备成固体菌 剂。
4. 按照权利要求1所述硝基苯、苯胺快速复合降解菌剂的保存及活化方法，其特征在 于，采用砂土管保存，包括以下顺序和步骤i、 制备砂土管将沙、土按质量比2 : l混合，混匀的砂土分装入保藏管中，i2rc湿热灭菌30min ;j、制备菌悬液向培养好的斜面培养物中倒入2-3ml无菌水，洗下细胞制成菌悬液，均 匀滴入保藏管中，用冷冻真空干燥器将水分抽干；k、将砂土管用火焰熔封后，在低温4 6t:干燥处保藏；1、恢复培养无菌条件下打开砂土管，取部分沙土粒于斜面培养基，待菌落形成后再传代一次。
5. 按照权利要求3所述的硝基苯、苯胺复合降解菌剂的制备方法，其特征在于，步骤e、 f和权利要求4所述的无机盐培养基为Na2HP04 12H20 3. 8g/L、 KH2P041. 0g/L、 KC1 3. 0g/L和MgS04 7H20 0. 2g/L混合构成。
6. 按照权利要求2所述的硝基苯、苯胺复合降解菌剂的制备方法，其特征在于，步骤 a、 b和权利要求3步骤h所述的种子培养液为Na2HP04 12H20 3. 8g/L、 KH2P041. 0g/L、 KC1 3. 0g/L和MgS04 7H20 0. 2g/L混合构成。
7. 按照权利要求3所述的硝基苯、苯胺复合降解菌剂的制备方法，其特征在于，扩大化 培养液为淀粉1. 88g/L，乙醇1. 56g/L，麦芽糖2. 08g/L，硝酸铵0. 24g/L，亚硝酸钠0. 47g/ L，尿素0. 18g/L和无机盐8g/L混合构成。
8. 根据权利要求3所述的硝基苯、苯胺复合降解菌剂的制备方法，其特征在于，扩大化 培养温度为10。C，通气量为50-60L/min，培养时间为36_70h。
9. 按照权利要求3所述的硝基苯、苯胺复合降解菌剂的制备方法，其特征在于，步骤i 中的保护剂为糖蜜和麸皮，按质量分数每100ml菌液加入灭菌后的0. 4g糖蜜和0. 2g的麸 皮。
10. 按照权利要求1所述硝基苯、苯胺快速复合降解菌剂的应用，其特征在于，皱 纹假单胞菌、荧光假单胞菌、铁角蕨假单胞菌、腊状芽孢杆菌、温和食酸菌五种细菌按4:3:i:i: i的比例混合用于地下水受硝基苯、苯胺污染严重地区地下水的污染治理。
全文摘要
本发明涉及一种硝基苯、苯胺快速复合降解菌剂及制备方法与应用。包括复合降解菌剂的筛选和驯化、复合降解菌剂的制备方法、保存及活化方法和复合降解菌剂的应用。本发明的硝基苯、苯胺快速复合降解菌剂在配水中对AN和NB的降解范围0.7-550mg/L，降解率75-100％，对苯胺、硝基苯在第3天降解率为95％以上。在吉化双苯厂爆炸场地取回的地下水样品中有机物24种，该地下水受有机物污染严重，都为含苯环类物质，其中硝基苯、苯胺、苯、甲苯、氯苯浓度分别为194.40、92.72、104.30、4.86、5.62mg/L，应用本发明的硝基苯、苯胺快速复合降解菌剂，在160h内降解菌群能将硝基苯、苯胺降解基本完全。具有高效、快速的特点，适用于突发环境污染事件的应急修复。
文档编号C02F3/34GK101781024SQ20091025289
公开日2010年7月21日 申请日期2009年12月1日 优先权日2009年12月1日
发明者任何军, 刘娜, 刘鹏, 张兰英, 赵勇胜, 高松 申请人:吉林大学