一种生活垃圾除臭灭害复合菌剂及其制备方法

一种生活垃圾除臭灭害复合菌剂及其制备方法
【专利摘要】本发明属于环境环保【技术领域】，特别涉及一种用于垃圾除臭灭害的复合微生物制剂及其制备方法，其含有球孢白僵菌(Beauveriabassiana)、啤酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、植物乳杆菌（Lactobacillusplantar）、沼泽红假单胞菌(RhodopseudomonasPalustris)和苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)。本发明提供了一种能够去除垃圾异味和消灭垃圾蚊蝇、蟑螂等害虫的具有综合功能的除臭灭害复合菌剂，可以在垃圾中转站、化粪池、公共厕所和垃圾填埋场等场所进行去除异味和消灭害虫，在五种微生物协同作用下，可以迅速降级垃圾的恶臭气体，抑制腐败细菌的繁殖，消灭垃圾堆的蚊蝇、蟑螂害虫，改善垃圾堆的微生态环境，具有重大的经济意义和环保意义。
【专利说明】一种生活垃圾除臭灭害复合菌剂及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于环境环保【技术领域】，特别涉及一种用于垃圾除臭灭害的复合微生物制剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002]随着我国城市化进程的加快和人口数量增加，城市生活垃圾的产生和其带来的环境污染已经引起人们的重视，特别是在城市中心垃圾收集点和城市垃圾中转站，生活垃圾所引发的恶臭散发，蚊蝇孳生，病虫害传播等问题，已经对居民生活质量和当地生态环境造成一定的影响。城市生活垃圾收集和中转的管理不规范，会严重破坏城市的生态，造成人们心理不快。
[0003]当前，城市生活垃圾处理过程存在以下问题:
(I)堆放的垃圾中的有机质腐烂分解，不可避免会产生大量的恶臭气体，使人恶心、头晕和呕吐，严重会引起人们呼吸道疾病。
[0004](2).生活垃圾是病害微生物的集源地，这些病原微生物不仅是产生恶臭气体当地主力军，他们也可以通过空气、污水，虫害，工作活动等各种途径繁殖和传播，严重时，会威胁到环境卫生和人的健康。
[0005](3).垃圾堆中有大量的有机物质，必然为蚊、蝇、蟑螂等有害生物提供场所，而垃圾堆放过程中所产生的垃圾渗滤液是蚊虫产卵、孵化的场所，这些害虫是病原菌传播媒介，时刻威胁到人们健康。另外，垃圾的收集与堆放，不仅会产生大量的恶臭气体，也会影响到土壤的生态环境及地下水的质量。
[0006]然而，城市生活垃圾是人类活动不可避免的产物，随着社会文化、经济的发展，城市人口密度增大、需求食品原料量大和多样性、排泄物和生活垃圾不断增加，人们对城市生活垃圾处理强度要求不断提高，对生活垃圾中所产生的病源微生物，恶臭气体及蚊蝇虫害的去除压力不断增大。
[0007]目前，国内外生活垃圾处理技术主要集中对垃圾的恶臭气体去除，对病源虫害的综合治理技术研究较少。常用方法分为物理法、化学法和生物法。其中，(I)物理法主要包括吸附和掩蔽等，具有操作简单、见效快等优点，但该法仅适合处理低浓度、小范围的垃圾，无法从源头解决垃圾存在问题。(2)化学方法主要包括消毒、喷洒化学药剂，具有效率高、适用范围广，但该方法存在严重的二次污染。(3)生物治理法是主要采用微生物菌群对垃圾的生态位的改变而改善垃圾环境，环保无污染，是目前最为理想的垃圾处理方法，但目前已知的微生物制剂主要针对去除垃圾臭味而开发的，不能治理生活垃圾存在的病菌及病虫害的传播。
[0008]所以， 针对上述问题，城市垃圾处理单位急需一种能够对抑制有害细菌生长，改善垃圾生态环境，消除恶臭气体的产生，杀灭蚊蝇、蟑螂等害虫的综合性垃圾处理微生物制剂。
【发明内容】

[0009]本发明要解决的技术问题就是，针对现有的目前环保生物制剂不能全面解决垃圾存放或中转过程出现异味和蚊蝇病虫害的问题，提供一种高效的生活垃圾除臭灭害的复合菌剂，该复合微生物菌剂不仅能够迅速去除垃圾异味的产生，还能有效抑制有害微生物的生长和消灭蟑螂蚊蝇，加速垃圾的有氧分解，本发明的另一目的是提供该复合微生物菌剂的其制备方法。
[0010]为了实现上述目的，本发明的技术方案是:一种生活垃圾除臭灭害的复合菌剂，由下述以重量份计的原料制成:球孢白僵菌培养液10~20份、啤酒酵母培养液10~17份、植物乳杆菌培养液5~10份、沼泽红假单胞菌培养液30~39份、苏云金芽孢杆菌24~33份。
[0011]其中，所述的球孢白僵菌是属于白僵菌属的真菌，优选菌种为球孢白僵菌ACCC30765, ACCC30878, ACCC30704中的一种或两种。球孢白僵菌是一种昆虫病原真菌，对700多种有害昆虫都能寄生，致病性强，适应性强，无污染环境，不产生抗药性，药效期长，其主要用在农林业害虫的防治，把其用在生活垃圾害虫治理尚属于首次。球孢白僵菌主要通过其分生孢子在害虫表皮、气孔、消化道上，遇到适宜条件开发萌发并生出芽管，同时产生脂肪酶、蛋白酶和几丁质酶溶解害虫表皮，再由芽管进入害虫体内进行大量生长与繁殖，消耗害虫体内营养成分，并产生毒素白僵素和卵孢白僵素，感染死掉的害虫会产生大量的分生孢子进而感染其他害虫。 [0012]其中，所述的啤酒酵母是属于酵母菌，优选菌种为啤酒酵母ACCC20165，ACCC21135中的一种或两种。啤酒酵母可以分解利用环境中的糖类、硫化氢、氨气等，代谢工程中产生促进细胞分裂的活性物质，能够促进复合菌群中其他有效微生物(乳酸菌、沼泽红假单胞菌、苏云金芽孢杆菌和球孢白僵菌)增殖，有利于复合菌群的快速增殖。
[0013]其中，所述的植物乳杆菌是属于乳酸菌，优选菌种为植物乳杆菌ACCC11118，ACCC11016中的一种或者两种。植物乳杆菌以摄取光合细菌、酵母菌产生的糖类等物质为基础，在厌氧状态发酵条件下产生乳酸，能有效抑制有害微生物的活动，降低有机物腐败分解过程。乳酸菌还能够使常态下不易分解的木质素和纤维素等变得容易分解，并且消除未分解有机物产生的种种弊端，它也能够将未腐熟的有机物质转化成对生物的营养成分，促进有益微生物的生长，改善环境中的微生物群落。
[0014]其中，所述的沼泽红假单胞菌优选菌种为沼泽红假单胞菌ACCC10649。沼泽红假单胞菌属于光合细菌(英文缩写PSB)的一种，是地球上最古老的微生物之一。光合细菌在光合作用过程中，以H2S作为供氢体，把硫化氢分解为无害的H2和H20 ;沼泽红假单胞菌能以垃圾中的有机物、痕量有害气体(硫化氢等)及二氧化碳、氮等为基质，合成糖类、氨基酸类、维生素类、氮素化合物、抗病毒物质和生理活性物质等。另外光合细菌代谢的物质可以为其他有益微生物生长提供养分，促进有益生物群的增殖。
[0015]其中，所述的苏云金芽孢杆菌是属于芽孢杆菌属的细菌，优选菌种为苏云金芽孢杆菌ACCC01480，CICC23650中的一种或者两种。苏云金芽孢杆菌是当前生产量最大，应用最为广泛的细菌杀虫剂，能够在对3000多类昆虫和原生动物产生毒性，特别在对蚊蝇消灭一直受到科研者的研究。苏云金芽孢杆菌主要通过胃毒作用，其可以产生大量的芽孢和毒蛋白，芽孢被昆虫吞食后，可以再昆虫肠道大量繁殖进入血腔，进而引起昆虫败血症。苏云金产生的毒素可以分为内毒素和外毒素，内毒素即为δ-内毒素,也称伴孢晶体,其可以在昆虫肠道分解大量的小分子毒素而杀死昆虫，外毒素即为α-毒素和β-毒素,其中α-毒素是昆虫肠道破坏酶，β_毒素是热稳定外毒素，对蚊蝇有特异治病作用。然而，苏云金芽孢杆菌单独使用效果并不佳，但与球孢白僵菌组合使用具有良好的杀虫效果，能够弥补球孢白僵菌受环境影响，药效慢的不足，因此，发展复合微生物菌剂是不仅是克服单一菌剂存在的缺陷，也是未来环境治理生物制剂发展的方向。
[0016]本发明所述的除臭灭害复合菌剂中，微生物的总菌数较佳的为2.0X IO9个/mL以上。
[0017]本发明含有的球抱白僵菌(Beauveria bassiana)、啤酒酵母{^3ccharomycescerevisiae)、植物乳杆菌{Lactobacillus沼泽红假单胞菌{Rhodop seudomonasPalustris)和苏云金芽孢杆菌{Bacillus,都是现有常规菌种,均可在中国农业微生物菌种保藏管理中心及中国工业微生物菌种保藏管理中心购买。
[0018]所用的菌种斜面菌种保藏培养基为微生物研究常用的培养基，球孢白僵菌和啤酒酵母斜面活化培养基PDA培养基，苏云金芽孢杆菌斜面活化培养基牛肉膏培养基，植物乳杆菌斜面活化培养基为MRS培养基，沼泽红假单胞菌斜面活化培养基YP培养基。
[0019]本发明所述的除臭灭害复合菌剂中，有益微生物菌种所用的种子培养基配方和原料是实验室常用的。球孢白僵菌孢子悬浮液采用PDA培养基，啤酒酵母种子液培养基为液体PDA培养基，苏云金芽孢杆菌种子液培养基为YG培养基，植物乳杆菌种子液培养基为MRS培养基，沼泽红假单胞菌种子液培养基配方为研究光合细菌常用的配方，具体配方为:醋酸钠0.5 wt%,氯化钠0.1 wt%,硫酸铵0.03 wt%,磷酸二氢钾0.05 wt%,磷酸氢二钾0.04 wt%,硫酸镁0.04 wt%,氯化钙0.0 05 wt%,硫酸锰0.05 wt%,硫酸亚铁0.0005 wt%,酵母膏0.05 wt%,蛋白胨0.05 wt%，其余为水，pH值为7.6~7.8，121。。，灭菌20min。
[0020]本发明所述的除臭灭害复合菌剂中，第一发酵培养基配方为第一发酵培养基由蛋白腺0.4~0.8wt%,糖蜜15~25wt%,葡萄糖0.8~1.5wt%,憐酸二氢钠0.6~1.2wt%,硫酸镁0.04~0.06wt%，硫酸锰0.01~0.03wt%以及余量为水，pH为6.8~7.2 ;所述的第二发酵培养基由糖蜜10~18wt%,玉米浸提液1.0~1.5wt%,磷酸二氢钾1.0~1.7wt%,硫酸镁0.4~0.8wt%，氯化钙0.01~0.03wt%,吐温-80 1.0~1.5wt%，以及余量为水，pH为
6.8 ~7.5。
[0021 ] 本发明的除臭灭害复合菌剂中含有的有益微生物之间存在良好的协同作用，其能够把生活垃圾中腐败生物的腐败降解向发酵分解转变，对已经产生的恶臭气体硫化氢和氨气吸收降解，消除垃圾和垃圾渗滤液的恶臭。同时有益菌植物乳杆菌能够产生乳酸抑制腐败细菌的生长，从根本解决恶臭气体的产生，球孢白僵菌和苏云金芽孢杆菌代谢的毒素能够杀死对携带病害的蚊子、苍蝇和蟑螂等害虫,并建立起害虫之间相互传播,形成一个能够消除臭味和无病害传播垃圾堆放环境。
[0022]本发明还涉及本发明的除臭灭害复合菌剂的制备方法:按照本领域常规方法，分别将啤酒酵母、植物乳杆菌、苏云金芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌进行放大液体培养，按照发酵液体积的比例接入第一发酵培养基中培养；按照本领域常规方法将球孢白僵菌按照接种比例接入到第二发酵培养基培养，然后按所需比例混合，装桶或瓶，即可制得成品。
[0023]具体操作可以依照如下方法进行:步骤1:制得啤酒酵母、植物乳杆菌、苏云金芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌复合培养液:分别将琼脂斜面活化好的啤酒酵母菌、苏云金芽孢杆菌、植物乳杆菌和沼泽红假单胞菌接种到121°c高温灭菌后的三角瓶液体种子培养基，放大培养，制得各有益菌2.0X IO9个/mL的种子液；将啤酒酵母菌和苏云金芽孢杆菌接种于经过121°C高温灭菌的第一发酵培养基中，接种量分别为第一发酵液的2.0~5.0%和6.0~8.0%，在28~32°C下，转速100~250rpm,恒压通气培养6~IOh后,然后将植物乳杆菌和沼泽红假单胞菌接种于该发酵液中，接种量的分别为第一发酵液的1.0~3.0%和7.0~10.0%，在28~35°C下静止厌氧培养72~96h。
[0024]步骤2:制得球孢白僵菌液体发酵液:
将琼脂活化的球孢白僵菌接种PDA平板上，在20~26°C下培养7~14d，然后再在无菌条件下加入含0.05~0.2%吐温80的无菌水，在无菌条件下打散孢子，制得2.0X IO9个/mL白僵菌孢子悬浮液；将制的球孢白僵菌的孢子悬浮液接种于121°C高温灭菌的第二发酵培养基中，接种量为2.0~5.0%，在20~26°C下，转速100~200rpm，培养84~108h。
[0025]步骤3:制得除臭灭害复合菌剂:
发酵培养结束后，在无菌条件下，将所述步骤I和步骤2所得菌液按照80~90%和10~20%比例混合，按活菌计数，有益菌总数达到2.0X IO9个/mL以上，灌装，制得所述生活垃圾除臭灭害复合菌剂。
[0026]步骤I和步骤2中所述的有益微生物液体培养发酵的操作按本领域常规操作，其中各个有益菌种的种子液培养基均采用本领域常用配方。其中球孢白僵菌孢子悬浮液制备采用为PDA培养基，在22°C下培养9d，然后再在无菌条件下加入含0.1%吐温-80无菌水，在无菌条件下打散孢子，制得2.0X IO9个/mL白僵菌孢子悬浮液；啤酒酵母菌种子液培养基为液体PDA培养基，在28°C下，转速180rpm培养48h ;苏云金芽孢杆菌种子液培养基为YG培养基，在30°C下，转速180rpm培养72h ;植物乳杆菌种子液培养基为MRS培养基，在28°C下，密封静止培养48h;沼泽红假单胞菌种子液培养基为光合细菌培养常用的配方，具体配方为:醋酸钠0.5 wt%，氯化钠0.1 wt%，硫酸铵0.03 wt%，磷酸二氢钾0.05 wt%，磷酸氢二钾
0.04 wt%,硫酸镁0.04 wt%,氯化钙0.005 wt%,硫酸锰0.05 wt%,硫酸亚铁0.0005 wt%,酵母膏0.05 wt%，蛋白胨0.05 wt%，其余为水，pH值为7.8，121°C灭菌20min，在光照30001x下，30°C下，密封静止培养72h。
[0027]所述的第一发酵培养基配方最佳为:蛋白胨0.5wt%,糖蜜20wt%,葡萄糖1.0wt%,磷酸二氢钠1.0wt%，硫酸镁0.06wt%，硫酸锰0.01wt%以及余量为水，pH为7.0。
[0028]所述的第二发酵培养基最佳配方为:由糖蜜10wt%，玉米浸提液1.0wt%,磷酸二氢钾1.5wt%，硫酸镁0.5wt%，氯化钙0.01wt%,吐温-80 1.0wt%,以及余量为水，pH为6.8。
[0029]一种所述除臭灭害复合菌剂的使用方法，将所述除臭灭害复合菌剂与洁净的水按1:10~1:15的比例稀释，均匀喷洒在垃圾的底部和表面，每天喷洒一次，连续喷洒3d~5d。
[0030]本发明所述的复合微生物制剂主要用于生活垃圾中转站、公共厕所、垃圾填埋场等地方恶臭气体去除和蚊蝇和蟑螂等有害生物消灭。可以将本发明的除臭灭害复合菌剂按照1: 10~1: 50比例(重量比)与水混合喷洒在垃圾堆或垃圾渗滤液上，使用量也可以根据恶臭气体或者害虫多少调整使用量。除臭灭害复合菌剂的功效不仅可以有效去除垃圾的异味，抑制腐败细菌的恶性繁殖，减少恶臭气味再生，还能够杀死蚊蝇、蟑螂等害虫，在很大程度降低疾病的传播，改善垃圾发酵的生态环境。
[0031]本发明所用的原料或试剂除特别说明之外，均市售可得。
本发明的有益效果是:相比于现有技术，本发明提供了一种能够去除垃圾异味和消灭垃圾蚊蝇、蟑螂等害虫的具有综合功能的除臭灭害复合菌剂，弥补现有垃圾处理生物制剂仅去除垃圾异味，而不能对垃圾害虫灭害的缺陷，避免垃圾物理剂和化学处理制剂在垃圾使用除臭灭害带来的二次污染风险。其可以在垃圾中转站、化粪池、公共厕所和垃圾填埋场等场所进行去除异味和消灭害虫，在五种微生物协同作用下，可以迅速降级垃圾的恶臭气体，抑制腐败细菌的繁殖，消灭垃圾堆的蚊蝇、蟑螂害虫，改善垃圾堆的微生态环境，具有重大的经济意义和环保意义。本产品用于垃圾除臭灭害，综合治理垃圾恶臭气体产生和病虫害的传播，生态环保，使用方便，生产成本低，对环境无二次污染，具有广阔的应用前景。
[0032]【专利附图】

【附图说明】
下面参照附图结合实施例对本发明作进一步的描述。
图1为本发明对垃圾处理效果的对比图。
【具体实施方式】
[0033]下面用实施例来进一步说明本发明，但并不因此把本发明限制实施例的范围之中。实施例中，所述的球孢白僵菌、啤酒酵母、植物乳杆菌、沼泽红假单胞菌和苏云金芽孢杆菌都是现有常规菌种，均可在中国农业微生物菌种保藏管理中心，中国工业微生物菌种保藏管理中心购买。
[0034]实施例1
步骤1:制得啤酒酵母、植物乳杆菌、苏云金芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌复合培养液。
[0035]分别将琼脂斜面活化好的啤酒酵母、苏云金芽孢杆菌、植物乳杆菌和沼泽红假单胞菌接种到121°C高温灭菌后的三角瓶液体种子培养基(啤酒酵母:PDA培养基，在28°C下，转速180rpm培养48h ;苏云金芽孢杆菌:YG培养基，在30°C下，转速180rpm培养72h ；植物乳杆菌=MRS培养基，在28°C下，密封静止培养48h ;沼泽红假单胞菌:在光照30001x下，30°C下，密封静止培养72h，培养基配方:醋酸钠0.5 wt%,氯化钠0.1 wt%,硫酸铵0.03wt%,磷酸二氢钾0.05 wt%,磷酸氢二钾0.04 wt%,硫酸镁0.04 wt%,氯化钙0.005 wt%,硫酸锰0.05 wt%jt酸亚铁0.0005 wt%，酵母膏0.05 wt%，蛋白胨0.05 wt%，其余为水，pH值为7.6-7.8，121°C灭菌20min)，制得各有益菌2.0 X IO9个/mL的种子液；将啤酒酵母菌和苏云金芽孢杆菌接种于经过121°C高温灭菌的第一发酵培养基(蛋白胨0.6wt%，糖蜜20wt%，葡萄糖1.2wt%，磷酸二氢钠1.2wt%，硫酸镁0.05wt%，硫酸锰0.02wt%以及余量为水，pH为7.0)中，接种量分别为第一发酵液的2.0%和8.0%，在30°C下，转速200rpm，恒压通气培养8h后，然后将植物乳杆菌和沼泽红假单胞菌接种于该发酵液中，接种量的分别为第一发酵液的1.5%和10.0%，在30°C下静止厌氧培养72h。
[0036]步骤2:制得球孢 白僵菌液体发酵液
将琼脂活化的球孢白僵菌接种PDA平板上，在22°C下培养10d，然后再在无菌条件下加入含0.1%吐温-80无菌水，在无菌条件下打散孢子，制得2.0X IO9个/mL白僵菌孢子悬浮液。将制的球孢白僵菌的孢子悬浮液接种于121°C高温灭菌的第二发酵培养基(糖蜜15wt%,玉米浸提液1.2wt%,磷酸二氢钾1.2wt%,硫酸镁0.6wt%,氯化钙0.02wt%,吐温-801.2wt%，以及余量为水，pH为7.0)中，接种量为2.0%，在22°C下，转速150rpm，培养96h。
[0037]步骤3:制得除臭灭害复合菌剂
发酵培养结束后，在无菌条件下，将步骤I和步骤2所述的2组发酵罐中的菌液按照80%和20%比例混合，活菌计数，有益菌总数达到2.0 X IO9个/mL以上，灌装，制得生活垃圾除臭灭害复合菌剂。
[0038]实施例2
步骤1:制得啤酒酵母、植物乳杆菌、苏云金芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌复合培养液。
[0039]分别将琼脂斜面活化好的啤酒酵母、苏云金芽孢杆菌、植物乳杆菌和沼泽红假单胞菌接种到121°C高温灭菌后的三角瓶液体种子培养基(啤酒酵母:PDA培养基，在28°C下，转速180rpm培养48h ;苏云金芽孢杆菌:YG培养基，在30°C下，转速180rpm培养72h ；植物乳杆菌=MRS培养基，在28°C下，密封静止培养48h ;沼泽红假单胞菌:在光照30001x下，30°C下，密封静止培养72h，培养基配方:醋酸钠0.5 wt%，氯化钠0.1 wt%，硫酸铵0.03wt%,磷酸二氢钾0.05 wt%,磷酸氢二钾0.04 wt%,硫酸镁0.04 wt%,氯化钙0.005 wt%,硫酸锰0.05 wt%jt酸亚铁0.0005 wt%，酵母膏0.05 wt%，蛋白胨0.05 wt%，其余为水，pH值为7.6-7.8，121°C灭菌20min)，制得各有益菌2.0 X IO9个/mL的种子液；将啤酒酵母菌和苏云金芽孢杆菌接种于经过121°C高温灭菌的第一发酵培养基(蛋白胨0.5wt%，糖蜜20wt%，葡萄糖1.0wt%,磷酸二氢钠1.0wt%,硫酸镁0.06wt%,硫酸猛0.01wt%以及余量为水，pH为7.2)中，接种量分别为第一发酵液的5.0%和6.0%，在28°C下，转速180rpm，恒压通气培养IOh后，然后将植物乳杆菌 和沼泽红假单胞菌接种于该发酵液中，接种量的分别为第一发酵液的1.0%和9.0%，在28°C下静止厌氧培养96h。
[0040]步骤2:制得球孢白僵菌液体发酵液
将琼脂活化的球孢白僵菌接种PDA平板上，在20°C下培养14d，然后再在无菌条件下加入含0.2%吐温-80无菌水，在无菌条件下打散孢子，制得2.0X IO9个/mL白僵菌孢子悬浮液。将制的球孢白僵菌的孢子悬浮液接种于121°C高温灭菌的第二发酵培养基(糖蜜10wt%,玉米浸提液1.0wt%,磷酸二氢钾1.5wt%,硫酸镁0.5wt%,氯化钙0.01wt%,吐温-801.0wt%，以及余量为水，pH为6.8)中，接种量为5%，在22°C下，转速200rpm，培养108h。
[0041]步骤3:制得除臭灭害复合菌剂
发酵培养结束后，在无菌条件下，将步骤I和步骤2所述的2组发酵罐中的菌液按照85%和15%比例混合，活菌计数，有益菌总数达到2.0 X IO9个/mL以上，灌装，制得生活垃圾除臭灭害复合菌剂。
[0042]实施例3
步骤1:制得啤酒酵母、植物乳杆菌、苏云金芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌复合培养液。
[0043]分别将琼脂斜面活化好的啤酒酵母、苏云金芽孢杆菌、植物乳杆菌和沼泽红假单胞菌接种到121°C高温灭菌后的三角瓶液体种子培养基(啤酒酵母:PDA培养基，在28°C下，转速180rpm培养48h ;苏云金芽孢杆菌:YG培养基，在30°C下，转速180rpm培养72h ；植物乳杆菌=MRS培养基，在28°C下，密封静止培养48h ;沼泽红假单胞菌:在光照30001x下，30°C下，密封静止培养72h，培养基配方:醋酸钠0.5 wt%,氯化钠0.1 wt%,硫酸铵0.03wt%,磷酸二氢钾0.05 wt%,磷酸氢二钾0.04 wt%,硫酸镁0.04 wt%,氯化钙0.005 wt%,硫酸锰0.05 Wt%jt酸亚铁0.0005 wt%，酵母膏0.05 wt%，蛋白胨0.05 wt%，其余为水，pH值为7.6-7.8，121°C灭菌20min)，制得各有益菌2.0X109f/mL的种子液；将啤酒酵母菌和苏云金芽孢杆菌接种于经过121°C高温灭菌的第一发酵培养基(蛋白胨0.8wt%，糖蜜15wt%，葡萄糖1.5wt%,磷酸二氢钠0.8wt%,硫酸镁0.04wt%,硫酸猛0.03wt%以及余量为水，pH为
6.8)中，接种量分别为第一发酵液的4.0%和7.0%，在32°C下，转速250rpm，恒压通气培养6h后，然后将植物乳杆菌和沼泽红假单胞菌接种于该发酵液中，接种量的分别为第一发酵液的3.0%和7.0%，在32 °C下静止厌氧培养72h。
[0044]步骤2:制得球孢白僵菌液体发酵液
将琼脂活化的球孢白僵菌接种PDA平板上，在26°C下培养12d，然后再在无菌条件下加入含0.15%吐温-80无菌水，在无菌条件下打散孢子，制得2.0X IO9个/mL白僵菌孢子悬浮液。将制的球孢白僵菌的孢子悬浮液接种于121°C高温灭菌的第二发酵培养基(糖蜜18wt%,玉米浸提液1.5wt%,磷酸二氢钾1.7wt%,硫酸镁0.8wt%,氯化钙0.03wt%吐温-80
1.3wt%，以及余量为水，pH为7.5)中，接种量为3.0%，在26°C下，转速180rpm，培养84h。
[0045]步骤3:制得除臭灭害复合菌剂
发酵培养结束后，在无菌条件下，将步骤I和步骤2所述的2组发酵罐中的菌液按照90%和10%比例混合，活菌计数，有益菌总数达到2.0 X IO9个/mL以上，灌装，制得生活垃圾除臭灭害复合菌剂。
[0046]实施例4
步骤1:制得啤酒酵母、植物乳杆菌、苏云金芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌复合培养液。
[0047]分别将琼脂斜面活化好的啤酒酵母、苏云金芽孢杆菌、植物乳杆菌和沼泽红假单胞菌接种到121°C高温灭菌后的三角瓶液体种子培养基(啤酒酵母:PDA培养基，在28°C下，转速180rpm培养48h ;苏云金芽孢杆菌:YG培养基，在30°C下，转速180rpm培养72h ；植物乳杆菌=MRS培养基，在28°C下，密封静止培养48h ;沼泽红假单胞菌:在光照30001x下，30°C下，密封静止培养72h，培养基配方:醋酸钠0.5 wt%,氯化钠0.1 wt%,硫酸铵0.03wt%,磷酸二氢钾0.05 wt%,磷酸氢二钾0.04 wt%,硫酸镁0.04 wt%,氯化钙0.005 wt%,硫酸锰0.05 wt%jt酸亚铁0.0005 wt%，酵母膏0.05 wt%，蛋白胨0.05 wt%，其余为水，pH值为
7.6-7.8，121°C灭菌20min)，制得各有益菌2.0X109f/mL的种子液；将啤酒酵母菌和苏云金芽孢杆菌接种于经过121°C高温灭菌的第一发酵培养基(蛋白胨0.4wt%，糖蜜25wt%，葡萄糖0.8wt%,磷酸二氢钠0.6wt%,硫酸镁0.04wt%,硫酸猛0.01wt%以及余量为水，pH为
7.1)中，接种量分别为第一发酵液的3.0%和7.0%，在30°C下，转速150rpm，恒压通气培养9h后，然后将植物乳杆菌和沼泽红假单胞菌接种于该发酵液中，接种量的分别为第一发酵液的2.5%和7.5%，在35 °C下静止厌氧培养84h。
[0048]步骤2:制得球孢白僵菌液体发酵液
将琼脂活化的球孢白僵菌接种PDA平板上，在24°C下培养7d，然后再在无菌条件下加入含0.05%吐温-80无菌水，在无菌条件下打散孢子，制得2.0X IO9个/mL白僵菌孢子悬浮液。将制的球孢白僵菌的孢子悬浮液接种于121°C高温灭菌的第二发酵培养基(糖蜜12wt%,玉米浸提液1.3wt%,磷酸二氢钾1.0wt%,硫酸镁0.4wt%,氯化钙0.02wt%吐温-80
1.0wt%，以及余量为水，pH为7.2)中，接种量为4.0%，在22°C下，转速lOOrpm，培养108h。
[0049]步骤3:制得除臭灭害复合菌剂发酵培养结束后，在无菌条件下，将步骤I和步骤2所述的2组发酵罐中的菌液按照80%和20%比例混合，活菌计数，有益菌总数达到2.0 X IO9个/mL以上，灌装，制得生活垃圾除臭灭害复合菌剂。
[0050]下面通过效果实施例来进一步说明本发明的有益效果。
[0051]效果实施例1
本发明与常用的生物杀虫剂和除臭灭蝇剂对垃圾除臭灭害效果对比。
[0052]选用市场销售的生物杀虫剂，生物除臭灭蝇剂，生物除臭剂与本发明(实施例2)在垃圾中转除臭效果对比分析实验。选用的除臭灭蝇剂为命名为生物制剂A，主要成分为沼泽红假单胞菌、枯草芽孢杆菌、德氏乳酸菌和中草药混合的生物制剂；选用的生物杀虫剂命名为生物制剂B，主要成分为:球孢白僵菌、放线菌、沼泽红假单胞菌、枯草芽孢杆菌、酵母菌等发酵液与中草药、大蒜、蜜糖混合发酵的生物制剂。选用的生物除臭剂命名为生物制剂C，主要成分为光合细菌、酵母菌、乳酸菌、硝化细菌、放线菌混合发酵的生物除臭剂。选择大学城4个高校食堂垃圾收集点作为除臭灭害对象，未使用前对各个收集点NH3、H2S、臭气浓度、苍蝇数量、蟑螂数量等做好测定和调查，将本品和对照品按照与水1:10的比例稀释，均匀喷洒垃圾收集点的底部和垃圾表面，每天喷洒一次，连续5d，检测恶臭和害虫去除情况，如图1所示。
[0053]由图1可以看出，本发明(实施例2)在生活垃圾使用5d后的除臭灭害综合效果优于其他对比的三组生物制剂，对氨气的去除率为78.56%，对硫化氢去除率为56.85%，恶臭去除率为72.38%，苍蝇去除率达72.4%，蟑螂的去除率为54.32%。在除臭综合效果方面，本发明最佳，略优于生物制剂C，主要由于本发明不仅降解掉垃圾中的恶臭有机物，抑制腐败抑菌的生长，还能够控制苍蝇蟑螂的繁殖，减少有害生物的传播，改变生活垃圾的整个生态环境。在消灭苍蝇和蟑螂方面，本发明的效果优于生物制剂B，主要由于本发明所选用的球孢白僵菌ACCC30765，ACCC30878, ACCC30704在杀灭苍蝇和蟑螂方面效果突出，特别是配合使用苏云金芽孢杆菌，能够弥补球孢白僵菌的杀虫药效慢的缺陷。
[0054]效果实施例2
本发明在合肥蜀山区某垃圾中转站除臭灭害实际应用效果。
[0055]将本产品(实施例3制备)与自来水(阳光暴晒去除水中氯离子)按照1:15的比例混合，均匀喷洒在垃圾中转站部底部垃圾渗滤液和垃圾上，每次倾倒垃圾后喷洒一次。使用2d后已经无明显臭味，5d后在垃圾中转站角落处发现死的蟑螂和苍蝇，对死的蟑螂和苍蝇体内病源微生物检测，发现有苏云金芽孢杆菌和球孢白僵菌，环卫工人的工作环境得到明显改善。
[0056]效果实施例3
本发明在合肥市大杨镇农贸集市公共厕所除臭灭害应用效果。
[0057]将本产品(实施例4制备)与自来水(阳光暴晒去除水中氯离子)按照1:10的比例混合，每天均匀喷洒厕所内各个角落，每天下午喷洒一次。连续使用2d后已经厕所内异味消除，可以明显感觉到无恶臭异味，使用4d后在公共厕所内发现死的蟑螂和苍蝇，对死的蟑螂和苍蝇体内病源微生物检测，发现有苏云金芽孢杆菌和球孢白僵菌，公共厕所的周边环境得到明显改善。
[0058]尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
【权利要求】
1.一种生活垃圾除臭灭害复合菌剂，其特征在于:该复合菌剂由下述以重量份计的原料制成:球孢白僵菌培养液10~20份、啤酒酵母培养液10~17份、植物乳杆菌培养液5~10份、沼泽红假单胞菌培养液30~39份、苏云金芽孢杆菌24~33份。
2.根据权利要求1所述一种生活垃圾除臭灭害复合菌剂，其特征在于:所述球孢白僵菌培养液所用菌种为球孢白僵菌、Beauveria bassiana) ACCC30765, ACCC30878, ACCC30704中的一种或两种。
3.根据权利要求1所述一种生活垃圾除臭灭害复合菌剂，其特征在于:所述啤酒酵母培养液所用菌种为啤酒酵母iSacclmromyces cerevisiae)ACCC20165,ACCC21135中的一种或两种。
4.根据权利要求1所述一种生活垃圾除臭灭害复合菌剂，其特征在于:所述的植物乳杆菌培养液所用菌种植物乳杆菌(Zacio如&77狀plantar) kCCCllllS, ACCC11016中的一种或者两种。
5.根据权利要求1所述一种生活垃圾除臭灭害复合菌剂，其特征在于:所述的沼泽红假单胞菌培养液所用菌种为沼泽红假单胞菌{Rhodop seudomonasACCC10649。
6.根据权利要求1所述一种生活垃圾除臭灭害复合菌剂，其特征在于:所述的苏云金芽孢杆菌培养液所用菌种为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis) ACCCO1480,CICC23650中的一种或者两种。
7.一种制备权I所述复合菌剂的方法，其特征在于包括以下步骤:.步骤1:分别将琼脂斜面活化好的啤酒酵母菌、苏云金芽孢杆菌、植物乳杆菌和沼泽红假单胞菌接种到121°C高温灭菌后的三角瓶液体种子培养基，放大培养，制得各有益菌.2.0 X IO9个/mL的种子液；将啤酒酵母菌和苏云金芽孢杆菌接种于经过121 °C高温灭菌的第一发酵培养基中，接种量分别为第一发酵液的2.0~5.0%和6.0~8.0%，在28~32°C下，转速100~250rpm,恒压通气培养6~IOh后,然后将植物乳杆菌和沼泽红假单胞菌接种于该发酵液中，接种量的分别为第一发酵液的1.0~3.0%和7.0~10.0%，在28~35°C下静止厌氧培养72~96h ； 步骤2:将琼脂活化的球孢白僵菌接种PDA平板上，在20~26°C下培养7~14d，然后再在无菌条件下加入含0.05~0.2%吐温-80的无菌水，在无菌条件下打散孢子，制得2.0X IO9个/mL白僵菌孢子悬浮液；将制得的球孢白僵菌的孢子悬浮液接种于121°C高温灭菌的第二发酵培养基中，接种量为2.0~5.0%，在20~26°C下，转速100~200rpm，培养84 ~108h ； 步骤3:发酵培养结束后，在无菌条件下，将所述步骤I和所述步骤2所得菌液按照80~90%和10~20%比例混合，按活菌计数，有益菌总数达到2.0 X IO9个/mL以上，灌装，制得权I所述的生活垃圾除臭灭害复合菌剂。
8.根据权利要求7所述一种生活垃圾除臭灭害复合菌剂，其特征在于:所述步骤I所用的第一发酵培养基，以重量百分比计算，包括以下组分:蛋白胨0.4~0.8wt%，糖蜜15~25wt%,葡萄糖0.8~1.5wt%，磷酸二氢钠0.6~1.2wt%，硫酸镁0.04~0.06wt%,硫酸锰0.01 ~0.03wt%，余量为水，pH 为 6.8 ~7.2。
9.根据权利要求7所述一种生活垃圾除臭灭害复合菌剂，其特征在于:所述步骤I所用的第二发酵培养基，以重量百分比计算，包括以下组分:糖蜜10~18wt%，玉米浸提液.1.0 ~1.5wt%,磷酸二氢钾 1.0 ~1.7wt%,硫酸镁 0.4 ~0.8wt%,氯化钙 0.01 ~0.03wt%,吐温-80 1.0~1.5wt%，余量为水，pH为6.8~7.5。
10.一种权I所述除臭灭害复合菌剂的使用方法，其特征在于:将权I所述除臭灭害复合菌剂与洁净的水按1:10~1:15的比例稀释，均匀喷洒在垃圾的底部和表面，每天喷洒一次，连续喷洒3d~ 5d。
【文档编号】B09B3/00GK103992968SQ201410160437
【公开日】2014年8月20日 申请日期:2014年4月22日 优先权日:2014年4月22日
【发明者】赵海泉, 胡子全, 柴化建, 田春, 周理君, 曾苏 申请人:安徽清明环保科技有限公司