专利名称：冰冻芯片模具的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及制作新鲜组织和细胞芯片的装置，具体是一种冰冻芯片模具。
背景技术：
为了改进传统组织化学和原位聚合酶链式反应(PCR)工作量大、检测效率低、易于受多种实验条件影响、结果可比性差等缺点，在基因芯片的启发下，出现了组织芯片。组织芯片(tissue chip)，又称组织微阵列(tissue microarray，TMA)，是继基因芯片、蛋白芯片之后出现的又一种重要的生物芯片技术。这一技术使以免疫组织化学和原位PCR为代表的分子病理学研究进一步迈向规范化、科学化和高技术化。
组织芯片包括石蜡组织芯片和冰冻组织芯片。目前，国内外研究及其相关应用最多的组织芯片是石蜡组织芯片，具有组织用量少，获取信息量大，实验条件均一，减少试剂消耗等优点。
虽然组织芯片制作器具国外已经商品化，但价格昂贵。
《癌症》，2003；22(7)778-781公开了“一种制作组织芯片的方法”。它是用普通光学显微镜改装的石蜡芯片制作模具。在普通光学显微镜上加装特制的打孔针和取样针，在显微镜载物台上安置特制的石蜡块固定盒，利用显微镜精密的机械控制功能，进行受体和供体石蜡组织的取样、点样，并借助显微镜体视镜进行精确的取样部位观察与定位。
中国专利2420636公开了“一种制作组织芯片的包埋器”，由底座和以规则的阵列方式固定于其上的多根相同长度且相互平行的阵列柱组成。使用这一器械可十分方便地将多种(个)组织样本以规则的阵列方式包埋于同一蜡块，可切出包含有多种(个)以规则的阵列方式排列的组织样本的组织切片，即组织芯片，可一次同时对其进行相同检测指标的实验研究，明显减少试验误差，显著节约时间、人力、物力和试剂。
也曾有用改进的不同孔径的骨髓穿刺活检针作为手工制作组织芯片的模具，用于基层医院组织芯片的研制，但此方法操作比较繁琐。
石蜡包埋组织芯片有其自身的优点，同样也有其局限性，它不能同时检测DNA、mRNA和蛋白质的改变，因为三者的最佳固定条件不一样，同时石蜡组织芯片制作过程中还存在DNA、RNA的丢失和蛋白质抗原形成交联等问题。而冰冻组织芯片可以克服上述缺憾。
关于冰冻细胞芯片，目前国内外尚无完备的制作器具。
发明内容
本实用新型就是为了解决现有技术中存在的问题，而提供一种操作简便，经济实用，点阵均匀的冰冻芯片模具。
本实用新型是按以下技术方案实现的一种冰冻芯片模具包括底座和以阵列方式固定于一侧面的阵列柱，其正方形底座一侧面以7纵7横阵列方式设置49支阵列柱，其底座另一侧面固设有把手。
所述的冰冻芯片模具，其冰冻组织芯片模具底座是3cm×3cm×0.5cm；阵列柱长1.5cm，直径1.5mm，柱间距2.0mm。
所述的冰冻芯片模具，其细胞芯片模具底座为2.4cm×2.4cm×0.3cm；阵列柱长0.8cm，直径0.8mm，柱间距1.8mm。
这样，应用本实用新型制作的点阵，点与点之间均匀统一，而且操作简便，技术可靠，费用低廉，具有广阔的应用前景和实用价值。
应用冰冻组织和细胞芯片模具将新鲜组织和细胞(脱落细胞和培养细胞)制成的冰冻组织芯片和冰冻细胞芯片可同时对DNA、mRNA、蛋白质进行原位检测，解决了石蜡组织芯片制作过程中DNA、mRNA的丢失和蛋白质抗原形成交联等问题。具有组织用量少，获取信息量大，试验条件均一；减少试剂消耗；以及在完全相同的试验条件下，能够比石蜡组织芯片更高效而准确地原位分析大量新鲜标本的组织学和细胞/分子遗传学特点，从而大大提高了研究的科学性和可信性。采用本实用新型制备的冰冻芯片通过进行组织化学、免疫组化、荧光染色、原位杂交、FISH染色及原位PCR实验应用光学显微镜、激光共聚焦显微镜及荧光显微镜等进行DNA、RNA和蛋白质的研究，在肿瘤相关基因表达及其功能的分析中有着十分广泛的应用前景和实用价值。
图1是本实用新型外观结构示意图图2是本实用新型倒置的外观结构示意图。
图中1.底座 2.阵列柱3.把手。
具体实施方式
以下结合附图及实施针对本实用新型进行详细的描述一种冰冻芯片模具，包括板状底座和以阵列方式固定于一侧面的阵列柱，其正方形板状底座一侧面以7纵7横阵列方式设置49支阵列柱，底座另一侧面固设把手。
所述的冰冻芯片模具，其正方形板状底座上等间距垂直设置的阵列柱直径0.8mm-1.5mm；长度0.8cm-1.5cm；柱间距1.8mm-2.0mm。
所述的冰冻芯片模具，其特征在于正方形底座的厚度为0.3cm-0.5cm，正方形边长为2.4cm-3.0cm。
所述的冰冻芯片模具，其底座一侧面垂直设置的阵列柱是等径的49根实体柱。
所述的冰冻芯片模具，其铝合金底座一侧面设置的阵列柱是在底座一侧面等间距钻孔后，采用金属粘合剂粘接的。
所述的冰冻芯片模具，其底座另一侧面固设的把手呈“∏”式或柱状。
所述的冰冻芯片模具，其冰冻组织芯片模具底座是3cm×3cm×0.5cm；阵列柱长1.5cm，直径1.5mm，柱间距2.0mm；所述的冰冻芯片模具，其细胞芯片模具底座为2.4cm×2.4cm×0.3cm；阵列柱长0.8cm，直径0.8mm，柱间距1.8mm。
阵列柱采用实体等径不锈钢材料，在底座上用专用器械打出均匀排布好的49个孔，孔直径稍大于不锈钢体直径。正方形边长的大小是根据冰冻切片机金属底座的大小而确定的，力求最大限度地利用切片机所能切取的范围，铝合金正方形底座的厚度可以在适当的范围内变化，太薄不利于固定不锈钢针，太厚又不利于操作。
将上下均匀的较长的不锈钢实心体截短为截面平滑的实心柱，用金属粘接剂将一端垂直粘入铝合金正方形底座的孔中。不锈钢实心柱直径为0.6mm-2.0mm，直径太小每一点阵中所包含组织或细胞没有代表性，直径太大，又达不到足够的点阵数；长度可以在0.8cm-4.0cm之间，这样方便于操作；针间距为1.0mm-2.0mm，针间距太窄组织芯之间相互挤压，切片时容易扭曲、移位；针间距太宽，又达不到足够的点阵数。
底座另一侧面固设的把手便于使用者握持，克服了因板状底座小而薄不便取出的缺陷。
模具的应用及冰冻组织芯片制作过程①操作在冷冻切片机的恒冷室中进行，首先制作一个正方形纸环，放于冷冻切片金属托上。②轻轻将OCT(最佳切割温度复合物optional cutting temperature compound)，倒入纸环。③将模具轻轻插入OCT中，待OCT固化后撕去纸环，拔出模具，即形成了7×7点阵的孔。④-25℃条件下，对各冰冻标本做厚度为6μm的切片，HE染色后镜下观察确定靶区，对照HE染色切片上所选部位，用特制的套管针(内径1.2mm)，钻取组织块上相应位点长度约3-4mm的组织柱，入液氮冻结数秒钟后迅速填入孔中，然后编号登记。上述操作重复进行，直至阵列各孔全部填满为止，并置-70℃备用。
采用如同上述的结构也可制作成冰冻细胞芯片模具，该模具底座2.4cm×2.4cm×0.3cm；阵列柱长0.8cm，直径0.8mm，柱间距1.8mm。
制备冰冻细胞芯片时，如将恶性肿瘤体液或培养的细胞离心、弃上清，留下层沉淀物备用；冰冻细胞芯片OCT托制作操作在冷冻切片机的恒冷室中进行，在冷冻切片金属托上放置自制的稍大于模具的正方形纸环，轻轻将OCT注入纸环，其上放置冰冻细胞芯片模具，冷冻成形后，拔出模具，去掉纸环；注入细胞混悬液点样；在-25℃下6-12μm连续切片，完成后依试验目的不同进行适当的固定。
权利要求1.一种冰冻芯片模具，包括板状底座和以阵列方式固定于一侧面的阵列柱，其特征在于正方形板状底座一侧面以7纵7横阵列方式设置49支阵列柱，底座另一侧面固设把手。
2.根据权利要求1所述的冰冻芯片模具，其特征在于正方形板状底座上等间距垂直设置的阵列柱直径0.6mm-2.0mm；长度0.8cm-4.0cm；柱间距1.0mm-2.0mm。
3.根据权利要求1所述的冰冻芯片模具，其特征在于正方形底座的厚度为0.3cm-0.5cm，正方形边长为2.4cm-3.0cm。
4.根据权利要求1所述的冰冻芯片模具，其底座一侧面垂直设置的阵列柱是等径的49根实体柱。
5.根据权利要求1所述的冰冻芯片模具，其铝合金底座一侧面设置的阵列柱是在底座一侧面等间距钻孔后，采用金属粘合剂粘接的。
6.根据权利要求1所述的冰冻芯片模具，其底座另一侧面固设的把手呈“Π”式或柱状。
7.根据权利要求1所述的冰冻芯片模具，其冰冻组织芯片模具底座是3cm×3cm×0.5cm；阵列柱长1.5cm，直径1.5mm，柱间距2.0mm。
8.根据权利要求1所述的冰冻芯片模具，其细胞芯片模具底座为2.4cm×2.4cm×0.3cm；阵列柱长0.8cm，直径0.8mm，柱间距1.8mm。
专利摘要本实用新型公开了一种冰冻芯片模片，属于用于制作新鲜组织和细胞芯片的装置。冰冻芯片模具包括板状底座和以阵列方式固定于一侧面的阵列柱，其正方形板状底座一侧面以7纵7横阵列方式设置49支阵列柱，底座另一侧面固设把手。制作的冰冻组织芯片模具底座是3cm×3cm×0.5cm；阵列柱长1.5cm，直径1.5mm，柱间距2.0mm；制作的细胞芯片模具底座为2.4cm×2.4cm×0.3cm；阵列柱长0.8cm，直径0.8mm，柱间距1.8mm。这样，应用本实用新型打出的点阵，其点与点之间均匀统一，而且操作简便，技术可靠，费用低廉，经济实用；制作出的冰冻芯片，适用于用多种方法对DNA、mRNA及蛋白质进行原位检测，具有广阔的应用前景和实用价值。
文档编号G01N1/42GK2791634SQ200520025689
公开日2006年6月28日 申请日期2005年4月26日 优先权日2005年4月26日
发明者王新允, 姚智, 郑海燕, 刘婷, 孙翠云, 赵凤云, 赵天茹, 孙锐, 朱丛中, 李艳, 王爱香, 赵敏, 吴兴业, 王安, 宋文静, 秦全红 申请人:天津医科大学