专利名称：：一种治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂的质量检测方法
技术领域：
：本发明涉及一种质量检测方法，特别是涉及一种中药六类复方制剂的质量检测方法，属于中药领域。
背景技术：
：芪明颗粒是具有益气生津、滋养肝肾、通络明目的中药现代制剂，用于治疗糖尿病视网膜病变，属气阴亏虛、肝肾不足、瘀血阻络者，证见视物昏花、目睛干涩、神疲乏力、腰膝酸软、五心烦热、盗汗、口渴喜饮、头晕耳鸣、便秘等。该中药中黄芪功能补中益气，是古今治疗消渴病的要药；葛根功能解热生津、除烦止渴，还可升举阳气，推动津液上达明目；枸杞子养阴补血、益精明目，辅助葛根滋养肝肾之阴；地黄滋阴养血，为历代治疗阴虚血热及出血，消渴等的要药；决明子清肝明目，辅助葛根益阴泻热，兼能滋养肝肾；茺蔚子明目益精，能辅佐葛根润肺生津止渴，助黄芪补中益气；蒲黄能活血止血，水蛭主治诸淤血之症。诸药合用，紧扣糖尿病视网膜病变肝肾亏虚、目失濡养的病机，共行益气生津、滋养肝肾、通络明目之功，是糖尿病视网膜病变的有效药物。为促进中药制剂现代化，中药制剂不断研究质量检测方法是必要的。
发明内容本发明目的在于提供一种中药六类复方制剂质量检测方法。本发明目的是通过如下技术方案实现的。本发明复方制剂的质量检测方法包括如下鉴别和/或质量测定的一种或几种鉴别a、取固体制剂1.5-3g,加乙醇20-60ml，超声处理10-40分钟，滤过，滤液加氢氧化钾0.5-1.5g使溶解，水浴回流1-3小时，蒸干，残渣加水10-40ml使溶解,用正丁醇10-30ml提取,提取液蒸干，加水l-5ml溶解后上已处理好的D101大孔树脂柱，依次用水50-120ml、1(m乙醇30-80ml、30%乙醇30-80ml洗脱，洗脱7液弃去，再用70%乙醇30-100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5-3ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲甙对照品加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VIB)试验，吸取上述两溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水=45-65:20-40:5-15于1(TC以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。喷以5%-10%硫酸乙醇溶液，105。C烘至显色清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点；b、取固体制剂3-5g，加乙醚30-60ml或甲醇10-40ml，超声处理10-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇O.5-1.5ml制成供试品溶液A;或加水5-15ml溶解，上己处理好的大孔树脂和阴离子交换树脂，分别用不同浓度的乙醇和水洗脱，收集洗脱液，减压蒸干，加乙醇5-15ml溶解作为供试品溶液B;另取地黄对照药材，加甲醇制备成每lml含0.5fflg的溶液，作为对照品溶液A;或取梓醇对照品，加甲醇制备成0.5mg/ml的溶液，作为对照品溶液B。照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VIB)试验，吸取对照品溶液A和供试品溶液A各10ixl，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条状，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水=10-20:30-50:18-25:5-15或氯仿-甲醇-浓氨二12-20:3-6:0.5-1.51(TC以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾千，喷以Goden试液或茴香醛-浓硫酸试液，在105'C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点；C、取固体制剂0.5-1.5g，加水20-40ml，加热煮沸15分钟，放冷，滤过，滤液用醋酸乙酯10-30ml振摇提取，提取液浓縮至约0.5-1.5ml，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材O.5g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VIB)试验，吸取上述两溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-氯仿-甲酸=1-5:1-5:0.5-1.5或乙醚-冰醋酸-甲醇=3-8:0.5-1.5:0.5-1.5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365mn)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光主斑点；d、取固体制剂1-3g，加甲醇10-30ml，超声处理20-50分钟，滤过，滤液盐酸0.5-L5ml加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚提取两次，每次10-30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇0.5-1.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取决明子对照药材lg，同法制备，作为决明子对照药材溶液，取大黄素对照品加甲醇制成每lml含lrag的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法，吸取上述三溶液各1-2u1，分别点于同一硅胶H-O.5%CMC薄层板上，以石油醚(30-6CTC)-甲酸乙酯-甲酸=10-20:3-8:0.5-L5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品与对照药材色谱相应位置上显相同的橙色荧光斑点；置氨蒸汽中熏后，斑点变为红色；e、称取固体制剂2-5g，加入10-50ml提取液，提取液包括酸性蛋白提取液、碱性蛋白提取液、中性蛋白提取液、0.9柳aCl提取液中的一种或几种，提取20-60min，提取方法为超声或研磨中的一种或两种，静置，上清液经2000-5000r/min离心分离20-50min，用O.45um微孔滤膜过滤后，作为供试品溶液。另取水蛭对照药材0.5g，同法制成对照品溶液。照毛细管电泳法(中国药典2005版一部附录VIF)测定，电泳缓冲液为硼酸-氯化钠-硼砂系统、磷酸二氢钠-柠檬酸系统、硼酸-碳酸钠系统、甘氨酸+氯化钠-盐酸系统、酒石酸-酒石酸钠系统中的一种或多种，缓冲系统的pH值为8.0-9.5，电泳分离时间为10-40分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，出现相同的HPCE峰，各主成分的相对有效时间相同；含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005版一部附录VID)测定;色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.1%枸橼酸溶液二20-30:70-80或甲醇-水-氯仿=20-30:70-80:0.5-1.5或甲醇-水-磷酸=270-290:710-730:0.10-0.20为流动相;检测波长为240-250nra，理论板数按葛根素计算应不低于4000;对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品适量，加30"/。乙醇制成每lml含80yg的溶液，既得；供试品溶液的制备取固体制剂0.卜0.3，研细，加入10%-50%的甲醇或乙醇提取液，超声20-50分钟，提取液上已经处理好的中性氧化铝柱，30-70%乙醇洗脱，收集洗脱液蒸干，溶于10-80ml的30%乙醇溶液中，即得；测定法分别精密吸取对照品与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，即得。本发明复方中药的质量检测方法优选如下鉴别和、或质量测定中的一种或几种。鉴别a、取本品3g，加乙醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液加氢氧化钾lg使溶解，水浴回流2小时，蒸干，残渣加水20ml使溶解，用正丁醇20ml提取，提取液蒸干，加水2ml溶解后上已处理好的D101大孔树脂柱，依次用水100ml、10。/。乙醇60ml、30%乙醇60ml洗脱，洗脱液弃去，再用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲甙对照品加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VIB)试验，吸取上述两溶液各10yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水=65:30:IO于KTC以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。喷以10%硫酸乙醇溶液，105。C烘至显色清晰，H光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点。b、取本品4.5g，加乙醚50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取地黄对照药材，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VIB)试验，吸取上述两溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条状，以氯仿-乙酸乙酉旨-甲醇-水=15:40:22:10l(TC以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，在105'C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点。C、取本品0.5g，加水35ml，加热煮沸15分钟，放冷，滤过，滤液用醋酸乙酯15ml振摇提取，提取液浓縮至约lml，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VIB)试验，吸取上述两溶液各lOiil，分别点同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-氯仿-甲酸(3:2:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光主斑点。d、取本品2g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml及盐酸lml加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚提取两次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取决明子对照药材lg，同法制备，作为决明子对照药材溶液，取大黄素对照品加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VIB)试验，吸取上述三溶液各l-2iU，分别点于同一硅胶H-0.5%CMC薄层板上，以石油醚(30-6crc)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:i)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品与对照药材色谱相应位置上显相同的橙色荧光斑点；置氨蒸汽中熏后，斑点变为红色。e、取本品3g，加入30ml0.9。/。NaCl提取液中，超声提取30min，静置，上清液经2000-5000r/min离心分离25min，用O.45um微孔滤膜过滤后，作为供试品溶液。另取水蛭对照药材0.5g，同法制成对照品溶液。照毛细管电泳法(中国药典2005版一部附录VIF)测定，以硼酸-氯化钠-硼砂系统为电泳缓冲液，缓冲系统的pH调节为8.98，电泳分离时间为30分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，出现相同的HPCE峰，各主成分的相对有效时间相同；含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005版一部附录VID)测定，色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.1%枸橼酸溶液=25-75为流动相；检测波长为250nm,理论板数按葛根素计算应不低于4000;对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品适量，力卩30n/。乙醇制成每lml含80ixg的溶液，即得；供试品溶液的制备取固体制剂O.lg，研细，加入10ml30%乙醇提取液，超声30分钟，提取液上已经处理好的中性氧化铝柱，50%乙醇洗脱，收集洗脱液蒸干，溶于20ml的30。/。乙醇溶液中，摇匀、滤过，取续滤液，即得;测定法分别精密吸取对照品与供试品溶液10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。固体制剂中单位制剂含葛根素含量不得少于O.64%。本发明的有益效果本发明通过多次试验在该品种的质量标准中制订了多味药材的鉴别项目及葛根素的含量测定项目。通过建立明确专属性强的鉴别及重现性、稳定性及精密度良好的含量测定方法，能有效控制产品的质量，使该制剂达到稳定、可控、高效及安全，是对产品的投料要求及质量的严格控制，是保证产品疗效，更好地满足患者需要的有效方法。具体实施例方式1黄疾的鉴别供试品溶液的制备取本品3g，研细，加乙醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液加氢氧化钾lg使溶解，水浴回流2小时，蒸干，残渣加水20ml使溶解，用正丁醇20ml提取，提取液蒸干，加水2ml溶解后上已处理好的D101大孔树脂柱(内径1.5cm，长12cra)，依次用水100ml、10。/。乙醇60ml、30%乙醇60ml洗脱，洗脱液弃去，再用7Cm乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液.阴性样品溶液的制备按制剂工艺制备不含黄芪的样品，同供试品溶液的制备方法同样制备，作为阴性样品溶液。对照品溶液的制备取黄芪甲甙对照品加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(65:30:10)于1(TC以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。喷以10%硫酸乙醇溶液，105。C烘至显色清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点。2地黄的鉴别供试品溶液制备取本品4.5g，加乙醚50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。地黄对照药材溶液制备取地黄对照药材2g，加乙醚50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为地黄对照药材溶液。12地黄阴性样品制备取缺地黄的制剂4.5g，按供试品溶液制备方法同样制备，即得阴性样品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两溶液各IOU1，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条状，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)1(TC以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，在105'C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点。3枸杞子的鉴别供试品溶液制备取本品0.5g,加水35ml，加热煮沸15分钟，放冷，滤过，滤液用醋酸乙酯15ml振摇提取，提取液浓縮至约lml，作为供试品溶液枸杞子对照药材溶液制备取枸杞子对照药材0.5g，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液枸杞子阴性样品溶液制备取缺枸杞子的制剂2g，按供试品溶液制备方法同法制备，即得阴性样品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两溶液各lOul,分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-氯仿-甲酸(3:2:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光主斑点4决明子的薄层鉴别供试品溶液制备取本品2g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ral及盐酸lml加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚提取两次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液对照品溶液制备取大黄素对照品加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液决明子对照药材溶液制备取决明子对照药材适量，研细，称取lg，按供试品溶液制备方法制备。决明子阴性对照液取缺决明子的制剂2g,按供试品溶液制备方法制同法备，即得。照薄层色谱法试验，吸取上述三溶液各1-2ul，分别点于同一硅胶H-0.5%CMC薄层板上，以石油醚(30-60°C)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365ran)下检视。供试品色谱中，在与对照品与对照药材色谱相应位置上显相同的橙色荧光斑点；置氨蒸汽中熏后，斑点变为红色。5水蛭的鉴别供试品溶液的制备取本品3g，加入30ml0.9%NaCl提取液中，超声提取30min，静置，上清液经2000-5000r/min离心分离25min，用0.45um微孔滤膜过滤后，作为供试品溶液。水蛭对照药材溶液的制备称取水蛭对照药材0.5g，按供试品溶液制备方法同法制备，作为供试品溶液。照毛细管电泳法(中国药典2005版一部附录VIF)测定，以硼酸-氯化钠-硼砂系统为电泳缓冲液，缓冲系统的pH调节为8.98，电泳分离时间为30分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，出现相同的HPCE峰，各主成分的相对有效时间相同。6HPLC测定葛根素的含量(1)色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅垸键合硅胶为填充剂；甲醇-O.1%枸橼酸溶液(25:75)为流动相；检测波长为250nm。理论板数按葛根素峰计算应不低于4000。(2)对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品100mg，置25ml量瓶中，加30%乙醇至刻度，摇匀，精密量取2ml，置10ml量瓶中，力[]30%乙醇至刻度，摇匀，即得(每lml中含葛根素80ug)。(3)供试品溶液提取条件的选择据文献报道，葛根素提取方法主要有超声和回流两种。加热回流法耗时长，提取杂质较多；超声提取法是利用超声波的波效应、机械粉碎和空化作用，提取杂质较少，并且耗时短，操作简便，而加热回流法和超声提取法的提取率无明显差异。因而，我们决定采用超声提取法处理样品。A供试品提取溶剂的选择本复方制剂根据葛根素的性质，选择甲醇、50%甲醇、30%乙醇、95%乙醇、无水乙醇作为提取溶剂进行比较，结果见表l。表1供试品提取溶剂的选择结果表溶剂甲醇50%甲醇30%乙醇95%乙醇无水乙醇含量(％)0.4810.6800.7380.2170.211由此可知，采用30%乙醇作为提取溶剂葛根素的含量为最高，故本试验采用30%乙醇作为样品的提取溶剂B提取时间的确定提取溶剂确定后，进一步考察提取时间，结果见表2。表2供试品提取时间选择结果表时间(min)10203040含量(％)0.5590.6880.7230.627由此可见，30分钟和40分钟的提取效果相当，所以选择30分钟为提取时间即可。根据"提取溶剂的选择"和"提取时间的确定"试验，我们确定最佳提取条件为加30%乙醇，超声波提取30分钟。C供试品溶液的制备取本品4.5g，研细，取0.3g,精密称定，加入3(B乙醇30ni1，置具塞锥形瓶中，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，以30%乙醇补足减失的重量，摇匀。精密量取5ml，置10ml量瓶中，，加30%乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。(4)方法学考察A线形关系考察精密吸取对照品溶液l.Oml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.Oml、6.0ml、7.Oml置10ml量瓶中，加30%乙醇稀释至刻度，摇匀，得质量浓度分别为8.0、16.0、24.0、32.0、40.0、48.0、56.Oug/ml的对照品溶液，各精密吸取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图。以对照品浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程为A=71327C-11860r=0.9997，结果见表3.表3线形关系考察编号进样浓度(ug/ml)峰面积<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>结果表明在8.056.Oug/ml范围内葛根素的浓度与峰面积呈良好的显性关系。B精密度试验精密吸取供试品溶液20ul，重复进样6次测定葛根素含量，计算相对标准偏差为RSD=0.80%，结果见表4。表4精密度试验结果编号峰面积含量(％)平均含量(％)RSD%1<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>C稳定性试验分别取同一份供试品溶液20ul，按上述色谱条件每隔一定时间测定其含量，考察样品溶液的稳定性，计算相对标准偏差，结果见表5。表5样品稳定性试验结果时间(h)峰面积RSD%02943378.512981144.822954811.342966691.81.2563014370.382904428.8以上实验表明，供试品溶液中葛根素的含量在8小时内基本稳定。D重现性试验精密称取样品6份，按上述方法制成供试品溶液，按以拟定的色谱条件测定峰面积，计算相对标准偏差为0.91%，见表6表6重现性试验结果编号称重(g)峰面积含量(%)平均含量(%)RSD%10.11911183972.10.84520.11601158695.20.84930.11021117996.50.8630.8520.9140.11541148345.40.84650.11521161981.90.857E回收率试验采用加样回收法，取已知含量的中药制剂五份,分别添加葛根素对照品适量，制成供试品溶液，按上述色谱条件测定，以下式计算回收率，结果见表7，结果表明，本法具有良好的回收率。实测葛根素量-样品中葛根素量回收率％_已知葛根素量X100%17表7回收率测定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>(5)五批中药复方制剂样品的含量测定结果分别精密吸取对照品溶液20W，依上述色谱条件测定，记录峰面积，计算含量。样品测定见表8。表8样品测定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>根据五批样品中葛根素含量，并以测定结果平均值的75%作为本复方制剂的含量下限，即中药制剂中含葛根素含量不得低于O.64%。权利要求1、一种治疗糖尿病视网膜病变的中成药的质量检测方法，其特征在于所描述的制剂是由葛根、黄芪、地黄、决明子、茺蔚子、蒲黄、枸杞子和水蛭等八味药材的醇水双提物经浓缩干燥所得，该质量检测方法包括鉴别和/或质量测定的一种或几种。鉴别a、取固体制剂1.5-3g，加乙醇20-60ml，超声处理10-40分钟，滤过，滤液加氢氧化钾0.5-1.5g使溶解，水浴回流1-3小时，蒸干，残渣加水10-40ml使溶解，用正丁醇10-30ml提取，提取液蒸干，加水1-5ml溶解后上已处理好的D101大孔树脂柱，依次用水50-120ml、10％乙醇30-80ml、30％乙醇30-80ml洗脱，洗脱液弃去，再用70％乙醇30-100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5-3ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲甙对照品加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水＝45-65∶20-40∶5-15于10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。喷以5％-10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至显色清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点；b、取固体制剂3-5g，加乙醚30-60ml或甲醇10-40ml，超声处理10-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5-1.5ml制成供试品溶液A；或加水5-15ml溶解，上已处理好的大孔树脂和阴离子交换树脂，分别用不同浓度的乙醇和水洗脱，收集洗脱液，减压蒸干，加乙醇5-15ml溶解作为供试品溶液B；另取地黄对照药材，加甲醇制备成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液A；或取梓醇对照品，加甲醇制备成0.5mg/ml的溶液，作为对照品溶液B。照薄层色谱法试验，吸取对照品溶液A和供试品溶液A各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条状，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水＝10-20∶30-50∶18-25∶5-15或氯仿-甲醇-浓氨＝12-20∶3-6∶0.5-1.510℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以Goden试液或茴香醛-浓硫酸试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点；C、取固体制剂0.5-1.5g，加水20-40ml，加热煮沸15分钟，放冷，滤过，滤液用醋酸乙酯10-30ml振摇提取，提取液浓缩至约0.5-1.5ml，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-氯仿-甲酸＝1-5∶1-5∶0.5-1.5或乙醚-冰醋酸-甲醇＝3-8∶0.5-1.5∶0.5-1.5为展开剂展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光主斑点；d、取固体制剂1-3g，加甲醇10-30ml，超声处理20-50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5-15ml及盐酸0.5-1.5ml加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚提取两次，每次10-30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇0.5-1.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取决明子对照药材1g，同法制备，作为决明子对照药材溶液，取大黄素对照品加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法，吸取上述三溶液各1-2μl，分别点于同一硅胶H-0.5％CMC薄层板上，以石油醚(30-60℃)-甲酸乙酯-甲酸＝10-20∶3-8∶0.5-1.5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品与对照药材色谱相应位置上显相同的橙色荧光斑点；置氨蒸汽中熏后，斑点变为红色；e、称取固体制剂2-5g，加入10-50ml提取液，提取液包括酸性蛋白提取液、碱性蛋白提取液、中性蛋白提取液、0.9％NaCl提取液中的一种或几种，提取20-60min，提取方法为超声或研磨中的一种或两种，静置，上清液经2000-5000r/min离心分离20-50min，用0.45μm微孔滤膜过滤后，作为供试品溶液。另取水蛭对照药材0.5g，同法制成对照品溶液。照毛细管电泳法测定，电泳缓冲液为硼酸-氯化钠-硼砂系统、磷酸二氢钠-柠檬酸系统、硼酸-碳酸钠系统、甘氨酸+氯化钠-盐酸系统、酒石酸-酒石酸钠系统中的一种或多种，缓冲系统的pH值为8.0-9.5，电泳分离时间为10-40分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，出现相同的HPCE峰，各主成分的相对有效时间相同；含量测定照高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.1％枸橼酸溶液＝20-30∶70-80或甲醇-水-氯仿＝20-30∶70-80∶0.5-1.5或甲醇-水-磷酸＝270-290∶710-730∶0.10-0.20为流动相；检测波长为240-250nm，理论塔板数按葛根素计算应不低于4000；对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品适量，加30％乙醇制成每1ml含80μg的溶液，既得；供试品溶液的制备取固体制剂0.1-0.3g，研细，加入10％-50％的甲醇或乙醇提取液，超声20-50分钟，提取液上已经处理好的中性氧化铝柱，30-70％乙醇洗脱，收集洗脱液蒸干，溶于10-80ml的30％乙醇溶液中，即得；测定法分别精密吸取对照品与供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。2、如权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于该方法中包括如下鉴别和/或含量测定中的一种或几种鉴别a、取本品3g，加乙醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液加氢氧化钾lg使溶解，水浴回流2小时，蒸干，残渣加水20ml使溶解，用正丁醇20ml提取，提取液蒸干，加水2ml溶解后上已处理好的D101大孔树脂柱，依次用水100ml、10。/。乙醇60ml、30%乙醇60ml洗脱，洗脱液弃去，再用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲甙对照品加甲醇制成每lml含l呢的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两溶液各10nl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇_水=65:30:IO于l(TC以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。喷以10%硫酸乙醇溶液，105。C烘至显色清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点。b、取本品4.5g，加乙醚50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取地黄对照药材，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条状，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水=15:40:22:101(TC以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，在105t:加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点。C、取本品O.5g，加水35ml，加热煮沸15分钟，放冷，滤过，滤液用醋酸乙酯15ml振摇提取，提取液浓缩至约lml，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-氯仿-甲酸(3:2:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光主斑点。d、取本品2g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml及盐酸lml加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚提取两次，每次20ral，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取决明子对照药材lg，同法制备，作为决明子对照药材溶液,取大黄素对照品加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三溶液各l-2u1，分别点于同一硅胶H-0.5%CMC薄层板上，以石油醚(30-60°C)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nrn)下检视。供试品色谱中，在与对照品与对照药材色谱相应位置上显相同的橙色荧光斑点；置氨蒸汽中熏后，斑点变为红色；e、取本品3g，加入30ml0.9y。NaCl提取液中，超声提取30min，静置，上清液经2000-5000r/min离心分离25min，用O.45Pm微孔滤膜过滤后，作为供试品溶液。另取水蛭对照药材0.5g，同法制成对照品溶液。照毛细管电泳法测定，以硼酸-氯化钠-硼砂系统为电泳缓冲液，缓冲系统的pH调节为8.98,电泳分离时间为30分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，出现相同的HPCE峰，各主成分的相对有效时间相同；含量测定照高效液相色谱法测定，色谱条件与系统适用性试验，以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.1%枸橼酸溶液=25-75为流动相；检测波长为250rnn，理论板数按葛根素计算应不低于4000;对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品适量，力B30y。乙醇制成每lml含80iig的溶液，即得；供试品溶液的制备取固体制剂O.lg，研细，加入10ml30%乙醇提取液，超声30分钟，提取液上己经处理好的中性氧化铝柱，50%乙醇洗脱，收集洗脱液蒸干，溶于20ml的30M乙醇溶液中，摇匀、滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品与供试品溶液lOiil，注入液相色谱仪，测定，即得。固体制剂中单位制剂含葛根素含量不得少于O.64%。全文摘要本发明涉及一种治疗糖尿病视网膜病变的中成药的质量检测方法。利用甲醇、乙醇、乙醚、醋酸乙酯等试剂对样品采取了提取、浓缩、过滤、除脂等前处理后，对样品中的黄芪、地黄、枸杞子、决明子等多味药材进行了薄层鉴别，特别是利用高效毛细管电泳指纹图谱对水蛭进行了鉴别，并利用HPLC法测定了制剂中有效成分葛根素的含量，为产品的质量稳定可控，疗效稳定确切提供了可靠保证。文档编号G01N30/00GK101672834SQ200810183368公开日2010年3月17日申请日期2008年12月1日优先权日2008年12月1日发明者敏何,张德生,章林慧申请人:浙江万马药业有限公司