专利名称：一种检测肉制品中红曲色素含量的方法
技术领域：
本发明涉及一种检测肉制品中红曲色素含量的方法，特别是一种定性或定量检测肉制品中红曲色素含量的方法，属于食品安全检测领域。
背景技术：
肉制品(meat products),是指用畜禽肉为主要原料，经调味制作的熟肉制成品或半成品，如香肠、火腿、培根、酱卤肉、烧烤肉等。肉制品中添加食品着色剂可以改进其颜色， 能更好的吸引消费者的注意。食用色素通常分为两类食用合成色素和食用天然色素。合成色素由于着色力强、色泽鲜艳、稳定性好、易于溶解和拼色以及成本低廉等一系列优点， 曾一度被广泛应用。但随着毒理学和分析技术的不断发展，合成色素的安全性日益受到挑战，合成色素的数量已大大减少，天然色素引起了世界范围的广泛注意。开发天然色素，改善食品加工品质，是我国食品添加剂工业“十五“期间的发展重点。红曲色素是目前世界上最成功利用发酵工程法大规模生产的天然食用色素。红曲色素属纯天然食用色素，有着色、防腐、保健和药用等价值，作为食品着色剂已经列入GB 2760-2011食品添加剂使用卫生标准，按正常需要量加入。红曲色素具有较强耐热性，对酸、碱、氧化剂、还原剂均较稳定，但光稳定性差。有不少不法分子用某些禁用色素(如苏丹红)代替红曲色素，还有不少生产厂家用红曲色素直接调制红酒，为了提高食品的品质，保护消费者身心健康、规范市场秩序和突破国外贸易壁垒，加强对其在食品中的检测非常重要。目前，目前国内外对红曲色素检测的相关文献多有报道，我国已相继制定了三项有关红曲色素的国家标准《GB/T5009. 150-2003食品中红曲色素的测定》、《GB4^6_2008 食品添加剂红曲米》和《GB 15961-2005食品添加剂红曲红》。目前为止，没有相关文献针对肉制品中红曲色素测定的报道。日本也已建立了红曲色素产品的标准，但在国际上尚无认可的统一标准。欧美国家没有红曲产品的生产，因此对这一类产品没有标准。其中， ((GB4926-2008食品添加剂红曲米》和《GB 15961-2005食品添加剂红曲红》为可见光分光光度计法，只能测定食品中红曲色素的色价，而色价只是反应食品中红曲色素颜色深浅的指标；《GB/T5009. 150-2003食品中红曲色素的测定》为薄层层析法，方法只对样品中红曲色素粗略定性。以上方法只是规定红曲色素混合物能达到一定标准即为合格，没有对红曲色素各组分进行定性定量分析，当样品中添加某一种或几种色素时就无法检测其浓度，因此，急需要对食品中红曲色素各组分进行准确定性定量分析。然而，迄今为止，未见关于食品中红曲色素各组分定量定性方法的研究。
发明内容
本发明的目的在于提供一种简便、快速、灵敏、准确且经济、对红曲色素各组分进行定性定量分析的检测肉制品中红曲色素的方法。
本发明所述检测肉制品中红曲色素含量的方法包括下列步骤 a.取适量待测肉制品试样，绞碎并均质；
b.称取制备好的试样；
c.用甲醇+乙酸乙酯溶液提取，加入无水硫酸钠脱水，并加入抗坏血酸防止样品中的红曲色素被氧化；
d.提取液吹至近干，用乙酸乙酯+环己烷溶液定容，待净化处理；
e.待净化液由试样环注入凝胶渗透色谱柱；
f.设定高效液相色谱条件；
g.净化液供高效液相色谱测定；
h.数据处理与分析。本发明所述步骤c中加入无水硫酸钠脱水后再加入抗坏血酸以防止样品中的红曲色素被氧化。本发明所述提取液于40°C下氮气吹至近干。本发明所述提取剂甲醇+乙酸乙酯溶液配比为0+8 V/V)。本发明所述采用乙酸乙酯+环己烷溶液定容时其配比为(1+1 V/V)。本发明方法中单点校正按式(1)计算
Ax Cs xVxlOOO
X=............................... (1)
AsXmXlOOO
式中
A—样液色谱图中红曲色素各组分的峰面积；
Cs—标准工作液中红曲色素各组分的浓度，单位为微克每毫升；
As_标准工作液色谱图中红曲色素各组分的峰面积；
V—样液最终定容体积，单位为毫升；
m—试样质量，单位为克；
多点校正按式(2)计算
Cx xVxlOOO
X=............................... (2)
mxlOOO
Cx—标准曲线上查得的试样中红曲色素各组分的浓度，单位为微克每毫升； V—样液最终定容体积，单位为毫升； m—试样质量，单位为克。本发明采用凝胶渗透色谱来净化提取液。本发明采用高效液相色谱法测定时使用二极管阵列检测器。本发明利用高效液相色谱法实现了对红曲色素各组分定性定量的分析。高效液相色谱法的优点是
高压液相色谱法以液体为流动相(称为载液)，液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压如Agilentl200高效液相色谱压力可达400bar。高速流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1 lOml/min。高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于lh。高效近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。高灵敏度高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。另外，用样量小，一般几个微升。适应范围宽气相色谱法与高效液相色谱法的比较气相色谱法虽具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。而高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大 (大于400以上)的有机物(这些物质几乎占有机物总数的75% 80%)原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。据统计，在已知化合物中，能用气相色谱分析的约占20%， 而能用液相色谱分析的约占70 80%。本发明的有益效果本发明采用高效液相色谱法测定肉制品中红曲色素各组分的含量，方法前处理步骤简单明了，所用液相色谱柱分离效果好，灵敏度、精确度和准确度高， 适用于熏煮火腿类、灌肠类、熏烤鸡鸭类、酱鸭类和腌腊类肉制品中红曲色素各组分定性定量分析。本发明的优点本发明采用甲醇+乙酸乙酯混合试剂作为肉制品中红曲色素含量测定的提取试剂，对红曲色素中极性不同的各组分提取效果好；针对红曲色素中橙色素组分易氧化的性质，本发明前处理中加入抗坏血酸(抗氧化剂)能有效地减少橙色素的氧化 红曲色素为脂溶性色素，而肉制品中油脂含量普遍较高，本发明采用凝胶渗透色谱除油脂， 净化效果好，试样回收率高；已有标准或文献均未对红曲色素中各组分分离分析，本发明采用液相色谱柱C18，5mm，25cm X 4. 6mm(i. d.)，分离度高，从而能对红曲色素中各组分进行准确的定性定量分析。
图1是红曲色素各组分标准溶液的液相色谱图2是本发明具体实施例1中空白香肠中添加红曲色素各组分标准溶液(lmg/kg)的液相色谱图3是本发明具体实施例2中空白烤鸡中添加红曲色素各组分标准溶液(lmg/kg)的液相色谱图4是本发明具体实施例3中空白火腿中添加红曲色素各组分标准溶液(lmg/kg)的液相色谱其中，横坐标为红曲色素各组分的保留时间，纵坐标为红曲色素各组分的峰高。
具体实施例方式高效液相色谱常用的检测器有二极管阵列检测器、示差折光检测器和荧光检测器三种。本发明使用二极管阵列检测器，适用于对紫外光(或可见光)有吸收性能样品的检测。其特点使用面广(如蛋白质、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用);灵敏度高； 线性范围宽；对温度和流速变化不敏感；可检测梯度溶液洗脱的样品。高效液相色谱系统一般由储液器、输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部件。输液泵将流动相以稳定的流速(或压力)输送至分析体系，在色谱柱之前通过进样器将样品导入，流动相将样品带入色谱柱， 在色谱柱中各组分因在固定相中的分配系数或吸附力大小的不同而被分离，并依次随流动相流至检测器，检测到的信号送至数据系统记录、处理或保存。本发明以高效液相色谱法作为检测的基本原理，现代高效液相色谱系统配置有化学工作站、计算机和软件系统在内的数据采集与处理系统，可检测出待测样品中红曲色素的含量。高效液相色谱法分为两个步骤数据采集与数据处理。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相)内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。红曲色素是一种混合物，有六种主要成分，分别为橙色素(红斑红曲素、 红曲玉红素)、黄色素(红曲素、黄红曲素)、红色素(红斑红曲胺和红曲玉红胺)。因为黄红曲素始终没办法购买到标准品，本发明中只检测其中五种主要成分红斑红曲素、红曲玉红素、红曲素、红斑红曲胺和红曲玉红胺，这五种主要成分的出峰顺序为红斑红曲胺、红曲玉红胺、红曲素、红斑红曲素和红曲玉红素。此法根据保留时间定性，外标法定量。在设定的色谱条件下，红曲色素五种标准品的液相色谱图参见图1。将红曲色素五种标准品配成标准系列工作液依次按下述色谱条件上机测定，记录色谱峰面积。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。当线性范围在0.20mg/ L 15. Omg/L，所得红曲色素各组分浓度与峰面积呈线性关系，其线性方程和相关系数分别为
红斑红曲胺:Y=30. 3Χ+1. 98, R2 =0.99964 ； 红曲玉红胺:Υ=18. 1Χ+1. 63, R2 =0.99967 ； 红曲素 Υ=53. 6Χ-0. 24，R2 =0.99979 ； 红斑红曲素:Υ=41. 5Χ+11. 3, R2 =0.99910 ； 红曲玉红素:Υ=40. 1Χ-0. 49, R2 =0.99960。结果计算采用单点校正和多点校正两种
试样中红曲色素各组分含量以质量分数X计，数值以毫克每千克(mg/kg)表示，单点校正按式(1)计算
权利要求
1.一种检测肉制品中红曲色素含量的方法，其特征在于包括以下步骤a.取适量待测肉制品试样，绞碎并均质；b.称取制备好的试样；c.用甲醇+乙酸乙酯溶液提取，加入无水硫酸钠脱水，并加入抗坏血酸防止样品中的红曲色素被氧化；d.提取液吹至近干，用乙酸乙酯+环己烷溶液定容，待净化处理；e.待净化液由试样环注入凝胶渗透色谱柱；f.设定高效液相色谱条件；g.净化液供高效液相色谱测定；h.数据处理与分析。
2.根据权利要求1所述的检测肉制品中红曲色素含量的方法，其特征在于步骤c中加入无水硫酸钠脱水后再加入抗坏血酸以防止样品中的红曲色素被氧化。
3.根据权利要求1或2所述检测肉制品中红曲色素含量的方法，其特征在于提取液于40°C下氮气吹至近干。
4.根据权利要求1或2所述检测肉制品中红曲色素含量的方法，其特征在于提取剂甲醇+乙酸乙酯溶液配比为0+8 V/V)。
5.根据权利要求1或2所述检测肉制品中红曲色素含量的方法，其特征在于采用乙酸乙酯+环己烷溶液定容时其配比为(1+1 V/V)。
6.根据权利要求1或2所述检测肉制品中红曲色素含量的方法，其特征在于单点校正按式(1)计算
7.根据权利要求1或2所述检测肉制品中红曲色素含量的方法，其特征在于 采用凝胶渗透色谱来净化提取液。
8.根据权利要求1或2所述检测肉制品中红曲色素含量的方法，其特征在于 高效液相色谱法测定时使用二极管阵列检测器。
全文摘要
本发明提供一种检测肉制品中红曲色素含量的方法，包括以下步骤取适量待测肉制品试样，绞碎并均质；称取制备好的试样；用甲醇+乙酸乙酯溶液提取，加入无水硫酸钠脱水，并加入抗坏血酸防止样品中的红曲色素被氧化；提取液吹至近干，用乙酸乙酯+环己烷溶液定容，待净化处理；待净化液由试样环注入凝胶渗透色谱柱；设定高效液相色谱条件；净化液供高效液相色谱测定；数据处理与分析。本发明方法简便、快速、灵敏、准确、经济，可对红曲色素各组分进行定性定量分析的检测肉制品中红曲色素。
文档编号G01N30/06GK102565227SQ201110456559
公开日2012年7月11日 申请日期2011年12月31日 优先权日2011年12月31日
发明者储怡士, 卢普滨, 周瑶敏, 廖且根, 戴廷灿, 李伟红, 罗林广, 胡丽芳 申请人:江西省农业科学院农产品质量安全与标准研究所