专利名称：非酒精性脂肪性肝炎检测和/或鉴别用标记物、检测和/或鉴别非酒精性脂肪性肝炎的方 ...的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种非酒精性脂肪性肝炎检测和/或鉴别用标记物、检测和/或鉴别非酒精性脂肪性肝炎的方法以及用于它们的试剂盒。详细地说，本发明涉及一种非酒精性脂肪性肝炎检测和/或鉴别用标记物、检测和/或鉴别非酒精性脂肪性肝炎的方法以及用于它们的试剂盒，所述非酒精性脂肪性肝炎检测和/或鉴别用标记物适于目前除了采用肝脏活组织检查以外诊断困难的非酒精性脂肪性肝炎的检测以及与脂肪肝之间的鉴别诊断。
背景技术：
近年来，随着饮食生活的改变，患有脂肪性肝炎的患者剧增，这些患者被发现即使不饮酒但是患有在肝脏病理组织学检查上显示类似于脂肪肝或酒精性肝炎的伴随炎症的脂肪肝。这种新类型的疾病统称为非酒精性脂肪性肝病(Non-alcoholic fatty liver·disease :NAFLD)。非酒精性脂肪性肝病包括非酒精性脂肪肝(单纯性脂肪肝)和伴有肝纤维化的肝硬化、发展成肝癌的非酒精性脂肪性肝炎(Non-alcoholicsteatohepatitis,以下有时称为NASH)。NASH是进入十九世纪80年代以后由Ludwig等人所提倡的比较新的疾病概念(非专利文献I)。目前，单纯性脂肪肝被认为是预后良好的疾病。另一方面，已经报道，在351例的没有酒精摄取史的捐体的死后解剖分析中非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的存在频度为
6.3%，在NAFLD中，明显存在NASH (非专利文献2)。NASH在美国是最一般的慢性肝脏疾病。在日本也是同样情况，进入十九世纪90年代，肥胖和糖尿病增加，尽管没有饮酒史或肝炎病毒为阴性，也发生显示出肝脂肪蓄积或肝损伤晚期的该疾病。该疾病在肥胖者中较多，与胰岛素抵抗性的关联也强，近年来，被认为是与糖尿病等其他生活习惯病明显独立发展的肝病。NASH是导致从肝炎发展成肝硬化的进行性疾病，需要在发展成缺乏可逆性的肝硬化之前的更早期的阶段介入医疗。另一方面，占NAFLD大部分的单纯性脂肪肝富有可逆性，被认为是良性的。NAFLD可能可以通过一般的临床检查，例如血中肝脏相关酶的测定、腹部超声波、腹部CT等检查的组合来诊断。但是，NASH与NAFLD不同，被认为是难以通过这样的方法检测的疾病。在其他肝病，例如病毒性肝炎的情况中，可以通过患者检体内病毒抗原和/或抗病毒抗体的有无来检测或鉴别，确立诊断标准。与此相比，在NASH的情况中，目前，仅以肝脏活组织检查为基础进行评价的肝脏病理组织学检查是在确诊NASH时唯一明确的检查且是临床上可接受的方法。但是，肝脏活组织检查由于需要切除肝脏本身的一部分来进行检查，因此，通常必须住院，对患者而言，不论是经济上的负担还是出血等身体负担均较高，不易常规实施。另一方面，必须与NASH相鉴别诊断的单纯性脂肪肝是非常常见的疾病，而且为良性，其通常只是随时间进行监测。但是，目前，实际情况是，在日常的临床设定中，在医生诊断为NAFLD、进而怀疑为NASH的情况下，对应该何时进行肝脏活组织检查，还未出现明确的教导。可以说是医学上的必要性和界限的缘故，在进行至肝脏活组织检查又诊断为单纯性脂肪肝的情况下，有时患者将会感到极大的负担感，而医生经常难以判断是否应该进行肝脏活组织检查。另一方面，为了减轻患者的负担，作为NASH的检测或鉴别法，也尝试了各种肝脏活组织检查以外的方法。但是，以往的使用血清氨基转移酶等肝脏相关酶的上升的诊断方法不足以区别NASH和单纯性脂肪肝等NASH以外的肝脏疾病。具体地说，这是因为，作为NASH指标的丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)等氨基转移酶的检查值几乎与其他生活习惯病、肝病、血液疾病、恶性肿瘤等许多疾病的异常检查值重叠，因此，即使为高灵敏度也不是特有的，另外，即使在这些酶为正常范围的情况下，也常常发现NASH。 另一方面，还研究了组合以往的诊断标记物(血液诊断标记物ALT、AST,以及人种和/或糖尿病的有无等)来进行评分以诊断NASH的方法(非专利文献3)。但是，在该方法中，即使组合各种标记物进行评分，在判定为风险(Risk) “高(High)”的组中，基本上一半不是NASH0另外，在判定为“中间(intermediate)”、“低(low)”风险的组中，非NASH的比例更高，另一方面，不利的是，在这些判定中也包括近30%的NASH患者等，NASH诊断的精度存在问题。另外，还研究了利用超声波诊断鉴别NASH的方法(非专利文献4)。此时，介绍了以下例子；在被认为患有脂肪肝的34个病例中有9个病例的现有的血液诊断标记物(除ALT、AST以外，还包括Y-谷氨酰转肽酶(YGTP)、碱性磷酸酶(ALP))为正常范围，但进行肝脏活组织检查的结果，该9个病例中的7个病例患有NASH，显示难以利用以往的诊断标记物进行NASH诊断。如上所述，尽管需要在早期发现NASH患者并在早期进行治疗，但实际情况是，在NASH的检测和鉴别中，除了对患者有较大负担的肝脏活组织检查以外，不存在其他明确的诊断方法。因此，强烈期望可通过血液这样的容易采集的检体来检测或鉴别该疾病的方法。现有技术文献非专利文献非专利文献I:Mayo Clin. Proc. ,55 =434-438,1980非专利文献2:Gastroenterology，121,710-723 (2001)非专利文献3:H印atology，47，1916-1923 (2008)非专利文献4:World J. Gastroenterol. , 15 (15)，1863-1868 (2009)
发明内容
发明要解决的课题本发明基于这样的情况，提供一种目前除采用肝脏活组织检查以外难以鉴别的非酒精性脂肪性肝炎的检测和/或鉴别用标记物、检测和/或鉴别非酒精性脂肪性肝炎的方法以及用于它们的试剂盒。解决课题的手段本发明人为了解决上述课题进行了深入研究，结果发现，在源自非酒精性脂肪性肝炎患者的血清中，丙氨酸乙醒酸氨基转移酶(Alanine-glyoxylate aminotransferase)(在本说明书中，有时也简称为AGXT)与源自健康人的血清相比，其水平显著增高，因此，丙氨酸乙醛酸氨基转移酶可成为非酒精性脂肪性肝炎的检测和/或鉴别的标记物，从而完成了本发明。SP，本发明涉及[I] 一种非酒精性脂肪性肝炎检测和/或鉴别用标记物，其包括丙氨酸乙醛酸氨基转移酶。[2] 一种方法，其通过测定检体中的丙氨酸乙醛酸氨基转移酶来检测和/或鉴别非酒精性脂肪性肝炎。[3] 一种检测和/或鉴别非酒精性脂肪性肝炎的方法，其中，将检体中的丙氨酸乙醛酸氨基转移酶的水平与源自健康人检体中的丙氨酸乙醛酸氨基转移酶的水平进行比较，将其水平较高的情况判定为非酒精性脂肪性肝炎。
·
[4]如上述[2]或[3]所述的方法，其通过使用与丙氨酸乙醛酸氨基转移酶特异性结合的抗体的免疫测定法或通过测定丙氨酸乙醛酸氨基转移酶的酶活性来测定丙氨酸乙醛酸氨基转移酶。[5]如上述[2] [4]中任一项所述的方法，其中，检体为源自血液的检体；[6] 一种非酒精性脂肪性肝炎检测和/或鉴别用试剂盒，其含有与丙氨酸乙醛酸氨基转移酶特异性结合的抗体或用于测定丙氨酸乙醛酸氨基转移酶的酶活性的试剂。[7]丙氨酸乙醛酸氨基转移酶作为非酒精性脂肪性肝炎检测和/或鉴别用标记物的用途。[8]丙氨酸乙醛酸氨基转移酶，其用作非酒精性脂肪性肝炎检测和/或鉴别用标记物。发明效果根据本发明，通过测定源自患者检体中的丙氨酸乙醛酸氨基转移酶，可以鉴别并区分NASH与健康人及单纯性脂肪肝患者。检体可以为如血清那样可简便地从患者中采集的物质。迄今为止，通常，对于NASH的确诊，必须要进行伴随住院的肝脏活组织检查，但通过测定丙氨酸乙醛酸氨基转移酶，可以利用简便的血液检查进行精度良好的NASH诊断，因此，可应用于包括诊断药在内的诊断领域用途。与良性的单纯性脂肪肝不同，NASH被认为探索从肝炎至肝硬化的进行性经过且与癌发生相关，因此，强烈需要对NASH的确诊。通过使用本发明的非酒精性脂肪性肝炎用检测和/或鉴别标记物，可以精度良好地检测和/或鉴别出非酒精性脂肪性肝炎。特别是可以进行目前除了采用肝脏活组织检查以外难以鉴别的非酒精性脂肪性肝炎与单纯性脂肪肝之间的判别、进而可以判别健康人和非酒精性脂肪性肝炎患者。
图I表示实施例I中进行的来自男性健康人(对照组)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)患者、单纯性脂肪肝(FL)患者的血清的Western印迹及其定量化结果；图2表示实施例I中进行的来自女性健康人(对照组)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)患者、单纯性脂肪肝(FL)患者的血清的Western印迹及其定量化结果。
具体实施例方式本发明中的非酒精性脂肪性肝炎检测和/或鉴别用标记物为丙氨酸乙醛酸氨基转移酶。在本发明中，非酒精性脂肪性肝炎的检测是指调查判定非酒精性脂肪性肝炎本身是否存在，非酒精性脂肪性肝炎的鉴别是指区分判别非酒精性脂肪性肝炎与其他疾病例如单纯性脂肪肝等。AGXT是由EC2. 6. I. 44表示的将丙氨酸和乙醛酸转变为丙酮酸和甘氨酸的氨基转移酶的一种。已知AGXT在生物体中显示极其局限于肝脏的表达(Clin. Biochem.,Vol. 18，1985 年 10 月，311-316)。 在本发明中，例如，可以检测从疑似NASH患者所得到的检体中作为上述NASH检测和/或鉴别用标记物蛋白质的AGXT是否存在或者测定其量来检测NASH的发病或者鉴别单纯性脂肪肝等NASH以外的肝脏疾病与NASH。在本发明的检测和/或鉴别非酒精性脂肪性肝炎的方法中，将检体中AGXT的水平与健康人检体中AGXT的水平进行比较，将其水平较高的情况判定为非酒精性脂肪性肝炎。更具体地，本发明方法的特征在于例如包括步骤(i)测定源自要诊断的个体的适当样品中的AGXT水平，接着，(ii)将测定值水平与明显健康的个体(正常个体)所对应的水平(正常水平、正常浓度范围)进行比较。将AGXT的测定值水平偏离正常水平且较高的情况怀疑为 NASH。如上所述，在本发明中，可以使用丙氨酸乙醛酸氨基转移酶作为非酒精性脂肪性肝炎检测和/或鉴别用标记物。作为可以在本发明中使用的检体，可举出从疑似NASH病患者中采集的源自血液的检体(检品),例如血清、血浆、血液等或尿等。作为检体,优选源自血液的检体。作为检体，特别优选判明了不是病毒性肝炎的患者的检体且没有判明是一般的单纯性脂肪肝患者还是NASH患者的检体。在本发明中，AGXT的有无的检测或者其量的测定原则上可以采用提供满足灵敏度、精度、特异性等的目前已知的任何方法。例如可举出利用免疫测定法测定作为蛋白质的AGXT、利用酶法测定作为酶的AGXT的活性等方法。从测定的灵敏度的高低、可进行特异性测定等方面考虑，优选免疫测定法。免疫测定法的特征在于，在可形成由AGXT和与AGXT特异性结合的抗体(抗AGXT抗体)构成的免疫复合物的条件下，使可能含有AGXT的检体与抗AGXT抗体接触。然后，通过公知的方法测定形成的复合物，可以得到检体中的AGXT水平的定量或定性的测定值，换言之，可以得到检体中的AGXT水平的测定值。在这些测试系统中，可以直接测定免疫复合物或者可以通过将该免疫复合物用可分析性检测的物质(标记物)进行标记来测定，标记物可以被该免疫复合物特异性地合并到其中。作为免疫测定法，可举出使用抗AGXT (即，本发明的非酒精性脂肪性肝炎检测和/或鉴别用标记物蛋白质)的多克隆抗体或单克隆抗体的以往已知的蛋白质测定方法。作为这样的免疫测定法，可举出酶免疫测定法(EIA法)、免疫比浊测定法(TIA法)、胶乳免疫凝集法(LATEX法)、电化学发光法、荧光法、Western印迹法等。另外，免疫色谱法以及利用试纸的方法也是有效的。这些方法本身对本领域技术人员来说均是周知的方法，可以直接采用这些周知的方法。作为可用于上述免疫测定法的抗体，可以使用市售的抗体(例如ABGENT公司的兔子抗人AGXT抗体)。另外，可举出通过已通用的方法制作的多克隆抗体或单克隆抗体。用于制作抗体的AGXT抗原可以从人血液中精制来获得，也可以基于AGXT的公知的氨基酸序列或编码其的基因序列(Biochem. Biophys. Res. Commun.，176 (3) :1093-1099,1991 年 7 月；Genomics，10 (I ):34_42，1991年7月)通过基因工程技术来合成，另外，还可以使用公知的肽合成技术进行化学合成来获得。以下，举出酶免疫测定法的例子进行说明。首先，直接或间接利用物理结合或化学结合、亲和力使抗AGXT的单克隆抗体与聚苯乙烯、聚丙烯、聚碳酸酯、聚乙烯、尼龙、聚甲基丙烯酸酯等其本身公知的固相结合。致敏抗体的量通常为Ing 100mg/ml的范围。在利用物理结合或化学结合、亲和力等与固相结合的单克隆抗体中加入检体进行反应。反应一定时间后，清洗固相并加入相应的二次标记抗体(例如抗AGXT 二次标记抗体)进一步进行2次反应。再次清洗固相，加入DAB显色底物等进行反应。在标记物质使用HRP的情况下， 底物可使用已知的DAB、TMB等，标记物质并不限定于此。不仅例如可举出酶，而且可举出胶体金、铕等标记金属或FITC、若丹明、Texas Red.Alexa.GFP等各种化学或生物学荧光物质、32P、51Cr等放射性物质等任何可识别的物质。在用Western印迹法测定AGXT时,组合凝胶电泳的优异的分离能力和抗原抗体反应的高的特异性，从检体的各种物质中分离、检测AGXT或测定其量。具体而言，首先，将检体施加于SDS-PAGE、等电点电泳、或双向电泳，然后，将AGXT从凝胶向膜电转移并固定，制作印迹(膜)。膜优选使用容易结合蛋白质的疏水性高的硝基纤维素或疏水性更优异的PVDF(聚偏二氟乙烯)。接着，使印迹与抗AGXT抗体反应来进行检测。检测法有使用酶的体系、使用荧光的体系等。在使用酶的体系中，将用ALP或HRP等标记的二次抗体与一次抗体反应，通过利用酶活性的显色或化学发光来进行检测。另外，基于化学发光的检测，可使用扫描器，通过X射线膜的曝光检测或化学发光来检测AGXT或测定其水平。在使用荧光法时，也可以使用用Cy3或Cy5标记的二次抗体来定量。作为利用酶法测定作为酶的AGXT活性的方法，例如可举出通过使AGXT与其底物反应，测定生成的生成物来测定AGXT活性的方法。具体而言，可举出如下方法作为底物，使用丙氨酸和乙醛酸作为必须成分，根据情况在磷酸吡哆醛的存在下进行酶反应，测定生成的丙酮酸的方法。作为测定生成的丙酮酸的方法，可举出使乳酸脱氢酶和NADH与该丙酮酸作用，测定NADH的减少量来测定丙酮酸的还原法、使磷酸和丙酮酸氧化酶与丙酮酸作用，测定生成的过氧化氢来测定丙酮酸的氧化法等。在还原法的情况下，可以使乳酸脱氢酶和NADH与丙酮酸作用，向反应液照射被NADH吸收的340nm波长的紫外线，基于吸光度的减少比例测定NADH的减少量，由此测定丙酮酸。在氧化法的情况下，过氧化氢的量的测定优选使用过氧化物酶和通过氧化而显色的底物，测定生成的色素。此时，作为通过氧化而显色的底物，可举出通过氧化而显色的单一化合物的底物、组合Tr inder试剂和4-氨基安替比林等的底物等。作为通过氧化而显色的单一化合物，可举出N-羧甲基氨基羰基)-4，4’ -双(二甲氨基)-二苯基胺钠盐(DA-64)、10-(羧甲基氨基羰基)_3，7-双(二甲氨基)-吩噻嗪钠盐(DA-67)等无色染料、N，N，N，,N，州”，『-六(3-磺丙基)-4，4’，4”，-三氨基-三苯甲烷六钠盐(TPM-PS)或邻苯二胺(OPD)。作为Trinder试剂,例如可举出苯酹衍生物、苯胺衍生物等。作为Trinder试剂的具体例，可举出2，4-二氯苯酚、N-乙基-N- (2-羟基-3-磺丙基)-3，5-二甲氧基苯胺(DAOS)、N-乙基-N-磺丙基-3，5-二甲基苯胺(MAPS)、N-乙基-N- (2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲基苯胺(MAOS)、N-乙基-N- (2-羟基-3-磺丙基)-间甲苯胺(TOOS)、N-乙基-N-磺丙基-间茴香胺(ADPS)、N-乙基-N-磺丙基苯胺(ALPS)、N-乙基-N-磺丙基-3，5-二甲氧基苯胺(DAPS)、N-磺丙基-3，5-二甲氧基苯胺(HDAPS)、N-乙基-N-磺丙基-间甲苯胺(TOPS )、N-乙基-N-( 2-羟基-3-磺丙基)_间茴香胺(ADOS )、N-乙基_N_( 2-羟基-3-磺丙基)苯胺(ALOS)、N- (2-羟基-3-磺丙基)_3，5- 二甲氧基苯胺(HDAOS)、N-磺丙基-苯胺(HALPS)等。另外，作为与上述4-氨基安替比林相应的化合物，也可以使用氨基安替比林衍生物、香草醛二胺磺酸、甲基苯并噻唑啉酮腙(MBTH)、磺化甲基苯并噻唑啉酮腙(SMBTH)等。本发明的检测和/或鉴别非酒精性脂肪性肝炎的方法例如可以通过至少含有与·AGXT特异性结合的抗体(抗AGXT抗体)作为试剂成分或用于测定AGXT的酶活性的试剂的非酒精性脂肪性肝炎检测和/或鉴别用试剂盒来实施。抗AGXT抗体例如能够以与微板等水不溶性载体结合的形式作为试剂盒的试剂成分。作为试剂盒的其他试剂成分，例如可举出抗人免疫球蛋白抗体等二次抗体，该二次抗体可以根据所采用的酶免疫测定法、放射免疫测定法、荧光免疫测定法、化学发光免疫测定法等测定方法，使用用酶、放射性同元素、荧光物质、化学发光物质等标记物标记的物质。作为其他试剂成分，可以适宜加入表面活性剂、缓冲剂等。作为用于测定AGXT的酶活性的试剂，例如可举出AGXT的底物、用于测定通过与该底物反应而生成的生成物的试剂等。作为这样的试剂，例如以作为底物的丙氨酸和乙醛酸、用于测定生成的丙酮酸的成分作为必须成分，可以根据情况使用含有磷酸吡哆醛的试齐U。作为用于测定丙酮酸的成分，在还原法的情况下，可以含有乳酸脱氢酶和NADH，在氧化法的情况下，可以含有磷酸、丙酮酸氧化酶和用于测定过氧化氢的成分。作为用于测定过氧化氢的成分，可以含有过氧化酶和通过氧化而显色的底物。通过氧化而显色的底物可举出上述例示的通过氧化而显色的单一化合物的底物、Trinder试剂和4-氨基安替比林等。通过以上说明的方法，通过对从疑似NASH患者中得到的检体中的AGXT的有无进行检测或者测定其量，可以检测和/或鉴别NASH。本发明的方法除了可以鉴别健康人和NASH患者以外，还可以鉴别以往除了采用肝脏活组织检查以外难以鉴别的FL患者和NASH患者。实施例以下，通过实施例进一步详细地说明本发明，但本发明并不受这些实施例的任何限定。实施例INASH (非酒精性脂肪性肝炎)患者和FL (单纯性脂肪肝)患者、健康人血清中的AGXT (Alanine-glyoxylate aminotransferase,丙氨酸乙醒酸氨基转移酶)值的测定对健康人18名(男性10人和女性8人)、FL患者9名(男性4人和女性5人)、NASH患者17名(男性8人和女性9人)的各血清，通过以下记载的方法测定血清中AGXT值。在对健康人、NASH患者、FL患者进行比较时，进行在性别、年龄、BMI (人体质量指数)方面没有统计学上大的偏差的比较。健康人血清为从健康诊断受诊者中得到书面同意的志愿者中采集空腹时血清。NASH患者全部为通过对住院检查患者进行肝脏活组织检查而确诊的病例，在这种情况下，得到同意而获得空腹时血清。FL患者为 通过肝脏活组织检查或肝超声波检查在肝脏上发现脂肪肝的患者，在这种情况下，得到同意而获得空腹时血清。I.方法为了测定血清AGXT，向相当于未处理的血清0. L中加入2X SDS-样品缓冲剂(0. 125M Tris-Cl,2. 0%SDS (十二烷基硫酸钠)、10% 甘油、0. 05% 溴酚蓝，pH6. 8) 50 y L 和纯水并悬浮，使用其中的IOy L等分，进行SDS-PAGE (聚丙烯酰胺凝胶电泳)。用于SDS-PAGE的凝胶使用具有10 20%的丙烯酰胺浓度梯度的长8cm、宽14cm、厚Imm的聚丙烯酰胺凝胶(DRC公司)进行。接着，根据公知的方法进行Western印迹法。S卩，将通过SDS-PAGE分离的蛋白质转印在PVDF (聚偏二氟乙烯)膜上。将转印后的PVDF膜切割成规定的大小，用于Ponceau S染色，确认没有转印不均。接着，重复进行如下操作3次在4°C下将PVDF膜在0. 05%脱脂乳-PBS-T (具有Tween20的磷酸盐)中浸溃过夜来进行封闭(blocking)、再在室温下在PBS-T中浸溃10分钟以进行清洗。接着，重复进行如下操作3次将清洗后的PVDF膜在溶解有兔子抗人AGXT抗体(ABGENT公司)的PBS中在室温下孵育I小时，再在PBS-T中在室温下浸溃5分钟以进行清洗。接着，重复进行如下操作3次将清洗后的PVDF膜在含有HRP标记的抗兔子IgG抗体(Dako公司)的PBS中在室温下孵育I小时，再在PBS_Tween20(0. 1%)中在室温下浸溃5分钟以进行清洗。由清洗后的PVDF膜，使用FEMT0GL0W Western印迹发光试剂(Michigan Diagnostics公司)并根据添附的方案，检测发光信号。信号检测及图像分析设备使用LumiVision PRO 400EX (爱信精机公司)，进行发光信号的拍摄及数值化。2.结果关于通过Western印迹法得到的信号的图像分析结果，将男性的情况示于图1，将女性的情况示于图2。另外，将男女图像分析结果中的各谱带的信号强度数值化，求出AGXT值，结果不于表I。[表I]通过Western印迹法的AGXT值的比较
AGXT值(Xio6) j健康对照 Ifl患者 Inash患者 7. 5 以上OAo~K14 A
7. 5 以下I8A9A3A由以上结果判明，通过AGXT测定，可以高精度地区别鉴定NASH与健康人及FL患者。产业实用性对于GOT (AST)、GPT (ALT)等以往的肝功能标记物，由于单纯性脂肪肝、NASH以外的肝脏疾病以及肝脏疾病以外的其他疾病，其值容易上升，与这些值相比，AGXT对NASH是特异性的，误诊的风险极小，极大有助于诊断领域。因此，以AGXT作为非酒精性脂肪性肝 炎检测和/或鉴别用标记物，可以通过AGXT测定高精度地检测或鉴别健康人及单纯性脂肪肝患者与NASH患者。
权利要求
1.一种非酒精性脂肪性肝炎检测和/或鉴别用标记物，其包含丙氨酸乙醛酸氨基转移酶。
2.一种方法，其通过测定检体中的丙氨酸乙醛酸氨基转移酶来检测和/或鉴别非酒精性脂肪性肝炎。
3.—种检测和/或鉴别非酒精性脂肪性肝炎的方法，其中，将检体中的丙氨酸乙醛酸氨基转移酶的水平与源自健康人检体中的丙氨酸乙醛酸氨基转移酶的水平进行比较，将其水平较高的情况判定为非酒精性脂肪性肝炎。
4.权利要求2或3所述的方法，其通过使用与丙氨酸乙醛酸氨基转移酶特异性结合的 抗体的免疫测定法或通过测定丙氨酸乙醛酸氨基转移酶的酶活性来测定丙氨酸乙醛酸氨基转移酶。
5.权利要求2 4任一项所述的方法，其中，检体为源自血液的检体。
6.一种非酒精性脂肪性肝炎检测和/或鉴别用试剂盒，其含有与丙氨酸乙醛酸氨基转移酶特异性结合的抗体或用于测定丙氨酸乙醛酸氨基转移酶的酶活性的试剂。
7.丙氨酸乙醛酸氨基转移酶作为非酒精性脂肪性肝炎检测和/或鉴别用标记物的用途。
8.丙氨酸乙醛酸氨基转移酶，其用作非酒精性脂肪性肝炎检测和/或鉴别用标记物。
全文摘要
本发明通过测定检体中的丙氨酸乙醛酸氨基转移酶，可以检测非酒精性脂肪性肝炎患者，并且可以正确鉴别健康人与非酒精性脂肪性肝炎患者。
文档编号G01N33/576GK102971630SQ20118003307
公开日2013年3月13日 申请日期2011年6月13日 优先权日2010年6月17日
发明者野村文夫, 西村基, 片山胜博, 清川巌 申请人:国立大学法人千叶大学, 日东纺绩株式会社, 日东纺医药株式会社