专利名称：一种快速测定含硒蛋白中硒的方法
技术领域：
本发明涉及一种快速测定含硒蛋白中硒的方法，属于分析化学领域。
背景技术：
硒是人和动物体必需的微量元素，具有多种生物学功能，如具有抗氧化、抗癌、防衰老、提高人体免疫力、保护心脑血管等作用，它的生物学功能主要是以硒蛋白表现的。已发现的硒蛋白大多数是具有重要作用的酶，又称之为硒酶。目前已有大量研究表明人体40多种疾病与硒的营养状况有密切的关系。因此，对硒蛋白的研究已成为近年来的热点研究课题。硒蛋白的纯化过程中硒含量的测定有多种方法，如利用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)，电感耦合等离子体发射光谱(ICP-AES)对纯化的蛋白进行硒含量的测定。这些方法虽然方法快速，但仪器设备的费 用昂贵，电感耦合等离子体质谱或发射光谱的仪器费用是原子荧光的3倍以上，载气的使用费用是原子荧光的50倍以上，这些设备昂贵不利于测试的普及，寻求一种设备简单，精度较高的方法十分有必要。
发明内容
本发明的目的是提供一种简便，能精确快速测定含硒蛋白中硒的方法。为达上述目的，本发明借助原子荧光光谱(AFS)对提取蛋白中的硒进行定量分析。本发明的技术方案是一种快速测定含硒蛋白中硒的方法，其特征在于它由如下步骤组成1.提取蛋白的处理，2.原子荧光光谱法测定硒含量，3.结果计算。下面对上述技术方案进行进一步解释
I、提取蛋白的处理本发明中所涉及的蛋白为通过不同层析方法获得的蛋白，因为纯化过程中收集的蛋白组分往往较少，有时仅为几十到几百微升微升，除了进行硒含量的测定，还需进行进一步的纯化或其他生物学功能的测定。而常规的混酸消解往往需要毫升量级体积的样品，所以纯化提取的蛋白不适合用常规的混酸消解后进行测定。将层析纯化收集的蛋白取部分样品加入一定体积的浓盐酸(l:2(Tl:40，ν/ν)沸水浴中保持O. 5 lh，冷却后纯水定容至5 ml，利用原子荧光进行测定。同时做试样空白。2、原子荧光光谱法测定硒取硒标准溶液(1000 yg/ml)(国家标准物质中心)逐级稀释，再配置成I ppb, 2 ppb, 5 ppb,8 ppb, 10 ppb几个浓度系列。作为标准曲线的绘制。线性关系达到O. 999以上方可进行样品检测。测定的仪器参考条件条件为负高压270 V ；灯电流80 mA ;原子化温度800 V ;炉高8 mm ;载气流速400 mL/min ;屏蔽气流速800mL/min ;测量方式标准曲线法；读数方式峰面积；延迟时间1 s ;读数时间7 S。设定好仪器条件，点火预热10 mirT20 min待仪器稳定后开始测量。先测定标准系列，绘制标准曲线。再进行试样测量。3. 结果计算分别测定试样空白和试样,试样测定结果按下式计算试样中硒的
含量X= (C-CO) XV1/V2式中
X—试样中硒的含量，单位为微克每升(μ g/L)； c一试样测定的浓度，单位为微克每升(μ g/L)；
CO一试样空白测定浓度,单位为微克每升(μ g/L)；
Vl一试样定容体积，单位为毫升(mL)；
V2—试样取样体积，单位为毫升(mL)。本发明能提供一种操作简便，精确度高RSD〈2%，加标回收率为929Γ100%，成本低廉的测定硒的方法。本发明是对提取的蛋白进行简单的处理，利用原子荧光(AFS)直接测定硒含量，方法简便，精确度高，成本低廉。
具体实施例方式下面结合实施例进一步说明本发明和效果，但不影响发明的保护范围。实施例一
取层析纯化收集的蛋白50 ul,加入Iml浓盐酸沸水浴保持10 min,冷却后定容至5 ml利用原子荧光进行测定，同时做试样空白，加标回收实验。取硒标准溶液(1000 μ g/ml)(国家标准物质中心)逐级稀释，再配置成O. I ppb，O. 2 ppb,O. 5 ppb,O. 8 ppb, I. O ppb几个浓度系列。作为标准曲线的绘制。线性关系达到O. 999以上方可进行样品检测。测定的仪器参考条件条件为负闻压270 V ;灯电流80mA ;原子化温度800 V ;炉高8 mm ;载气流速400 mL/min ;屏蔽气流速800 mL/min ;测量方式标准曲线法；读数方式峰面积；延迟时间1 s ;读数时间-J S。设定好仪器条件，点火预热10 mirT20 min待仪器稳定后开始测量。先测定标准系列，绘制标准曲线，再进行试样测量。分别测定试样空白和试样，试样测定结果按下式计算试样中硒的含量
X= (C-CO) XV1/V2
式中X—试样中硒的含量,单位为微克每升(μ g/L) ;C—试样测定的浓度，单位为微克每升(μ g/L) ；C0一试样空白测定浓度,单位为微克每升(μ g/L) ；V1一试样定容体积，单位为晕升(mL) ；V2一试样取样体积，单位为晕升(mL)。测定的结果如下表
权利要求
1.一种快速测定含硒蛋白中硒的方法，其特征在于包括如下步骤组成 (1)硒蛋白的提取处理将通过层析纯化方法获得的含硒蛋白溶于浓盐酸中并进行沸水浴，冷却后纯水定容待测，同时做试样空白； (2)原子荧光光谱法测定硒含量取硒标准溶液(1000u g/ml)(国家标准物质中心)逐级稀释，再配置成I ppb,2 ppb, 5 ppb,8 ppb, 10 ppb几个浓度系列；作为标准曲线的绘制；线性关系达到0. 999以上方可进行样品检测；测定的仪器参考条件条件为负高压270 V ；灯电流80 mA ;原子化温度800 V ;炉高8 mm ;载气流速400 mL/min ;屏蔽气流速800mL/min ;测量方式标准曲线法；读数方式峰面积；延迟时间1 s ;读数时间7 s ;设定好仪器条件，点火预热10 mirT20 min待仪器稳定后开始测量；先测定标准系列，绘制标准曲线；再进行试样测量； (3)结果计算分别测定试样空白和试样，试样测定结果按下式计算试样中硒的含量X= (C-CO) XV1/V2 式中 X—试样中硒的含量，单位为微克每升(U g/L)； C一试样测定的浓度，单位为微克每升(y g/L)； CO一试样空白测定浓度,单位为微克每升(y g/L)； Vl一试样定容体积，单位为毫升(mL)； V2—试样取样体积，单位为毫升(mL)。
2.根据权利要求I所述的一种快速测定含硒蛋白中硒的方法，其特征在于所述硒蛋白的提取处理过程中含硒蛋白与浓盐酸的混合体积比为1:2(T40。
3.根据权利要求I所述的一种快速测定含硒蛋白中硒的方法，其特征在于所述硒蛋白的提取处理过程中含硒蛋白与浓盐酸的混合体积比为1:30。
4.根据权利要求I所述的一种快速测定含硒蛋白中硒的方法，其特征在于所述硒蛋白的提取处理过程中在沸水浴中的时间为0. 5^1小时。
5.根据权利要求I所述的一种快速测定含硒蛋白中硒的方法，其特征在于所述硒蛋白的提取处理过程中在沸水浴中的时间为45分钟。
全文摘要
本发明提供了一种快速测定含硒蛋白中硒的方法，它由如下步骤组成1.提取蛋白的处理，2.原子荧光光谱法测定硒含量，3.结果计算。本发明的目的是提供一种简便，能精确快速测定含硒蛋白中硒的方法。本发明能提供一种操作简便，精确度高RSD<2%，加标回收率为92%~100%，成本低廉的测定硒的方法。本发明是对提取的蛋白进行简单的处理，利用原子荧光(AFS)直接测定硒含量，方法简便，精确度高，成本低廉。
文档编号G01N1/28GK102809552SQ201210288300
公开日2012年12月5日 申请日期2012年8月15日 优先权日2012年8月15日
发明者朱元元 申请人:苏州硒谷科技有限公司