专利名称：离体心脏灌流装置的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种离体心脏灌流装置，属医疗仪器技术领域。主要用于研究药物对离体心脏功能的影响和分离心肌 细胞。
背景技术：
随着科学技术的进步和对心脏研究的不断发展，心肌细胞已成为研究心肌结构、代谢、功能、病理生理、发病其机制及心肌疾病治疗的重要工具。目前，大多数研究均采用Langendorff装置生物酶灌流消化法分离成熟心肌细胞。Langendorff离体心脏灌流装置包含数个蛇形管、玻璃容器和连接管道，主要依靠重力进行灌流，其高度通常在I m左右，不能放进普通的超净台内实现无菌操作。同时该装置由于液体经过的管道太长，灌流瓶太大导致费时、废液、通氧困难、气泡不易排出。
发明内容本实用新型的目的主要在于解决上述装置体积大不能放入超净台无菌操作，通氧困难，气泡不易排出的缺陷，提供一种具有结构简单实用，心肌细胞产出率高和质量好、价格便宜等优点的离体心脏灌流装置。本实用新型是通过如下技术方案实现的一种离体心脏灌流装置，它包括灌流保温槽、心脏保温槽、三通心脏灌流管、底板和支架五部分，支架安装在底板上，灌流保温槽和心脏保温槽上下依次固定在支架上并能够沿支架上下移动；在所述的灌流保温槽中有三个灌流柱，槽侧壁上有热进水孔和热出水孔；灌流柱外侧刻有刻度，顶部开口上盖有带进液管的橡皮塞，底部的出液口与位于灌流保温槽下方的三个三通阀相连通；三个三通阀通过输液管与三通心脏灌流管相连；所述的心脏保温槽中有心脏保温室，心脏保温槽的上端面有能够开合的且中心位置有灌流孔的凹型上隔温板，下端面有能够转动的中间带孔的凹型下隔温板；所述的上隔温板由两块对称安装能开关的半圆凹型板组成，其中心位置有半圆形孔，当两块半圆凹型板关闭时中间形成一和三通心脏灌流管配合的灌流孔供三通心脏灌流管下端通过。三个三通阀通过输液管与三通心脏灌流管相连可分别控制三种灌流液进行灌流，同时可以单通酶液，避免酶液被稀释。灌流柱有三个可以同时研究三种不同的药物对离体心脏的作用。心脏保温槽上的上隔温板和下隔温板形成一个密闭的保温空间使心脏保温室温度稳定。心脏保温槽下隔温板上的孔可以用于收集灌流液。心脏保温槽外侧壁上有热水进孔和热水出孔。恒温水浴泵的水通过恒温水管经心脏保温槽再到灌流保温槽，最后回到恒温水浴泵，从而保证置于心脏保温槽内离体心脏的恒定温度和湿度，保证灌流柱内灌流液的恒定温度。实验时，恒流泵和压力控制器将灌流液经橡皮塞恒压或恒流注入灌流槽内，然后经三通阀、三通心脏灌流管进入心脏进行灌流。具有如下特点[0008]I)本装置体积小、结构紧凑、操作方便，可置于超净台内完成整个灌流。从而保证在无菌条件下分离细胞，分离得到的心肌细胞可以培养进行细胞学实验。2)该装置灌流柱体积小，在不影响分离效果的前提下有助于节约昂贵的胶原酶和蛋白酶的用量，降低实验成本。3)该装置可以根据实验需要结合恒流泵或压力控制器选择恒流或恒压灌注心脏。4)可进行多种药物灌流实验，同时研究三种不同的药物对离体心脏的作用。5)主动脉套管可以根据实验动物不同进行更换，因而此装置可以用于大鼠、小鼠、 兔等常用实验动物的离体心脏灌流。本实用新型的有益效果是体积小、结构紧凑、操作方便，利用该装置灌流心脏能获得闻数量和闻质量的心肌细胞，获得的心肌细胞可以进行电生理实验，转基因实验，细胞培养，分子生物学实验等。
附图I是本实用新型的结构示意图。图中1、底板，2、金属支架，3、灌流保温槽，4、灌流柱，5皮塞，6、灌流保温槽热水出孔，7、灌流保温槽热水进孔，8、T型三通阀，8、三通心脏灌流管，10、心脏保温槽，11、心脏保温槽上盖，12、心脏保温槽下盖，13、心脏保温室，14、心脏保温槽热水出孔，15、心脏保温槽热水进孔，16、灌流孔。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本实用新型进一步说明。如附图所示，一种离体心脏灌流装置它有灌流保温槽3、心脏保温槽10、三通心脏灌流管9、底板I和支架2五部分，支架2垂直安装在底板I上，灌流保温槽3和心脏保温槽10上下依次固定在支架2上并能够沿支架上下移动；在所述的灌流保温槽3中有三个灌流柱4，槽侧壁上有热进水孔7和热出水孔6 ;灌流柱外侧刻有刻度，顶部开口上盖有带进液管的橡皮塞5，底部的出液口与位于灌流保温槽3下方的三个三通阀8相连通；三个三通阀8通过输液管与三通心脏灌流管9相连；所述的心脏保温槽10中有心脏保温室13，心脏保温槽10的上端面有能够开合的且中心位置有灌流孔16的凹型上隔温板11，下端面有能够转动的中间带孔的凹型下隔温板12 ;在心脏保温槽侧壁上有热水进孔15和热水出孔14。所述的上隔温板11由两块对称安装能开关的半圆凹型板组成，其中心位置有半圆形孔，当两块半圆凹型板关闭时中间形成一和三通心脏灌流管9配合的灌流孔16供三通心脏灌流管下端通过。三通心脏灌流管下端的主动脉套管可以根据实验动物大小的需要，用不同型号的注射针头改制而成。剪掉针头前端尖锐部分，将剩余的前端打磨光滑，并在切口上端2毫米处挫一凹痕以便于将主动脉根部结扎到主动脉套管上。本实施例中底板I用大理石制作，在底板上固定金属做的支架2，先将心脏保温槽10固定于支架的下部，再在30厘米处将灌流保温槽3固定在支架上。取橡胶管连接恒温循环水泵的出水口和心脏保温槽热水进孔15，再取一根橡胶管连接心脏保温槽热水出孔14和灌流保温槽的热水进孔，最后取一根橡胶管连接灌流保温槽热水出孔6和恒温循环水泵的进水口，完成整个恒温循环水通路。把输液管的一端放入盛有灌流液的烧杯中，另一端与灌流柱4顶部橡皮塞5的进液管相连，中间一段放入蠕动泵的卡口中，用三根输液管分别连接T型三通阀8与三通心脏灌流管的顶端三个进水口。氧气管的一端连接氧气袋，另一端放入盛有灌流液的烧杯中。灌流保温槽长度150-160_、灌流柱直径35-40_。使用本实用新型分离心肌细胞的具体操作过程如下I)开启恒温循环水泵，让恒温水循环，使灌流保温槽、心脏保温槽中液体的温度达到 40 0C ；2)打开氧气管道阀门，根据实验需要调节压力大小使气泡连续均匀较小地排入台式液、酶液中； 3)用橡皮塞塞紧灌流柱的顶端，打开蠕动泵将台式液灌至灌流柱上面第一个刻度时停止灌入,打开三通,当灌流柱内液体到达一定高度时,主动脉套管不再流液体；4)悬挂心脏于主动脉套管上，套管插入深度不得超过主动脉瓣，线结扎固定。打开蠕动泵经主动脉逆行灌流台式液，心脏恢复跳动后，移动心脏保温槽将心脏完全包裹在心脏保温室内，关闭上下隔温板。5min后换酶液循环灌流20-30 min，在心脏保温槽下放置烧杯，收集灌流液使其循环利用。5、当心脏变得松软，将心脏剪下置入KB液中，剪去心房和结缔组织，将心室组织剪成约ImmX 1_X Imm碎块，用粗开口吸管轻轻吹打，就可见单个细胞和细胞团脱落，然后用200目的尼龙网过滤，滤液于室温下静置20min，让细胞自然沉降，弃上清液，再加入KB液自然沉降，反复3次。利用本装置分离的每个大鼠心脏细胞产量可达4-6 X IO6细胞数，细胞的杆状率平均75%左右，90%以上的长杆状心肌细胞伸直舒展，细胞无明显搏动，呈现清晰的横纹，两端边缘锐利。因此利用本装置可获得高产量与高质量的大鼠心肌细胞，并能降低实验成本，简单经济，值得在心血管研究领域推广应用。
权利要求1.一种离体心脏灌流装置，其特征在于它包括灌流保温槽(3)、心脏保温槽(10)、三通心脏灌流管(9)、底板(I)和支架(2);支架(2)安装在底板(I)上，灌流保温槽(3)和心脏保温槽(10)上下依次固定在支架(2)上并能够沿支架上下移动；在所述的灌流保温槽(3)中有三个灌流柱(4)，槽侧壁上有热进水孔(7)和热出水孔(6);灌流柱外侧刻有刻度，顶部开口上盖有带进液管的橡皮塞(5)，底部的出液口与位于灌流保温槽(3)下方的三个三通阀(8)相连通；三个三通阀(8)通过输液管与三通心脏灌流管(9)相连；所述的心脏保温槽(10)中有心脏保温室(13)，心脏保温槽(10)的上端面有能够开合的且中心位置有灌流孔(16)的凹型上隔温板(11)，下端面有能够转动的中间带孔的凹型下隔温板(12);在心脏保温槽侧壁上有热水进孔(15 )和热水出孔(14 )。
2.根据权利要求I所述的离体心脏灌流装置，其特征在于所述的上隔温板(11)由两块对称安装能开关的半圆凹型板组成，其中心位置有半圆形孔，当两块半圆凹型板关闭时中间形成一和三通心脏灌流管(9)配合的灌流孔(16)供三通心脏灌流管下端通过。
专利摘要本实用新型公开了一种离体心脏灌流装置，属医疗仪器领域。它包括安装在底板上的支架，支架上安装有灌流保温槽和心脏保温槽；在灌流保温槽中有三个灌流柱，槽侧壁上有热进水孔和热出水孔；灌流柱外侧刻有刻度，顶部开口上盖有带进液管的橡皮塞，底部的出液口与位于灌流保温槽下方的三个三通阀相连通；三个三通阀与三通心脏灌流管相连；心脏保温槽中有心脏保温室，心脏保温槽的上端面有能够开合的且中心位置有灌流孔的凹型上隔温板，下端面有能够转动的中间带孔的凹型下隔温板。有益效果是体积小、结构紧凑、操作方便；用其灌流心脏能获得高数量和高质量心肌细胞，获得的心肌细胞能进行电生理实验、转基因实验、细胞培养和分子生物学实验等。
文档编号G01N33/15GK202421174SQ20122002975
公开日2012年9月5日 申请日期2012年1月30日 优先权日2012年1月30日
发明者孙红, 潘秀华, 王影, 祁友键, 闫长栋 申请人:徐州医学院