专利名称：一种测定饲料中维生素c含量的方法
技术领域：
本发明涉及一种测定饲料中维生素C含量的测定方法。
背景技术：
维生素C是水产养殖中必需添加的维生素添加剂之一。维生素C含量的检测方法大多采用氧化还原滴定法(碘量法和靛酚蓝法)，这一类方法的特点是所用设备成本低廉，操作简便，只适合检测单一的维生素C制品和简单基质样品中维生素C含量的测定，多用于医药和食品行业。目前饲料行业多用碘量测定法维生素C原料制品，以此来判定其质量。对于维生素预混合饲料和配合饲料中维生素C的检测尚未颁布方法标准，虽有人发表过“配合饲料中维生素C测定的分光光度法”、也有人试图用高效液相色谱技术解决这一难题，但由于维生素C极易被氧化的特点和饲料基质的复杂，加之检测过程繁琐和设备昂贵，因此无法实现饲料中这一关键成分检测。分光光度法针对不同配合饲料样品方法无可重复性，液相色谱法最好也只能得到70%的添加同收率。发明内容
本发明的目的是提供一种测定饲料中维生素C的方法。
本发明所提供的测定饲料中维生素C的方法，是采用伏安极谱法(即应用伏安极谱仪进行检测)，包括下述步骤:
I)将待测样品即含维生素C的饲料用pH值3-5的乙酸缓冲溶液配制成溶液，然后进行超声提取，得到待测样品溶液；
2)分为下述a)或b):
a)采用标准加入法，取数份等体积的所述待测样品溶液，并向其中加入不同量的维生素C标准溶液，其中一份样品溶液中不加标准溶液，然后用pH值3-5的乙酸缓冲溶液定容至相同体积，对所得的溶液均以-0.2V为起始电位、0.3为终止电位进行电位扫描，绘制各溶液的极谱图(即1-U曲线)并记录极谱波峰电流值；
b)采用标准加入法，先取所述样品溶液用pH值3-5的乙酸缓冲溶液稀释后，以-0.2V为起始电位、0.3V为终止电位进行电位扫描，绘制极谱图(即1-U曲线)并记录极谱波峰电流值；然后依次向所述稀释后的溶液中加入维生素C标准溶液，每次加入标准溶液混合均匀后，均以-0.2V为起始电位、0.3V为终止电位进行电位扫描，绘制极谱图(即1-U曲线)并记录极谱波峰电流值；
3)以加入的维生素C的浓度为横坐标，对应的极谱波峰电流值为纵坐标，绘制工作曲线，用外推法(延长工作曲线和横坐标相交的数的绝对值)，即可得到待测样品中的维生素C浓度。
其中，所述饲料中的维生素C既可以是维生素C原粉，也可以是包膜维生素C(如市售的包膜维生素C:惠尔C)。因包膜维生素C的缓释效应可以有效提高其利用率，因而在目前的饲料中被广泛添加使用。
所述饲料具体可为添加维生素C的水产饲料，如鱼饲料等。
步骤I)中所述乙酸缓冲溶液优选pH值为4.6的乙酸缓冲溶液。配制方法如下:取IL去离子水溶液，添加0.1mol的乙酸和0.1mol的乙酸钠，混匀即得。
步骤I)中所述超声提取的功率为60-80W，提取时间为3-10min。
步骤I)中所述待测样品溶液中的维生素C浓度应不小于0.5mg/L，才能保证准确测定。
步骤2)中所述电位扫描的扫描速率为0.0050 0.01V/s，具体可选择0.0062V/So
步骤2)中通常取三份等体积的待测样品溶液，一份O标准添加，另两份加入不同量的维生素C标准液。
由于饲料中的成分比较复杂且待测维生素C的含量低，而标准加入法恰恰适用于样品组分复杂的情况。采用该方法能消除基体效应带来的影响，有利于提高测定的准确度。
为了得到较为精确的外推结果，多采用三个点(包括待测样溶液本身)来作外推曲线，并且第一份加入的标准溶液与待测溶液的浓度之比应适当。增量值的大小可这样选择，使第一个加入量产生的波峰电流值约为试样原波峰电流值的一半。
本发明采用伏安极谱法测定饲料(包括添加包膜维生素C)中的维生素C含量，样品处理简单，操作过程省时，避免了繁琐的操作过程造成的维生素C氧化；应用标准添加法工作曲线排除了样品的基质干扰；采用灵敏度高的电化学检测器加之检测是在屏蔽氧气的条件下完成，方法回收率高，检测结果准确。对该方法的精密度和准确度进行分析，结果证明利用本发明方法测定饲料中的维生素C含量，重现性好，灵敏度高，准确性好，检测限低，为准确测定饲料中的维生素C提供了一种全新的方法。
图1为待测样品及标准外加样品的极谱图。
图2为待测样品及标准外加样品的极谱波峰电流值-浓度工作曲线图。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明的方法进行说明，但本发明并不局限于此。
下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1、伏安极谱法测定配饲料中维生素C的含量
1、仪器
1.伏安极谱仪(瑞士万通797) ；2.超声波仪(KQ-300VDV) ；3.电子分析天平(METTLER-AE240) ；4.pH 计(METTLERT0LED0)。5.离心机(ANKE TDL-5-A)
2试剂及样品
2.1乙酸缓冲溶液
pH = 4.6，配制方法如下:1L去离子水溶液中添加0.1mol的乙酸和0.1mol的乙酸钠，混匀即可
2.2L-抗坏血酸标准溶液:CS = 0.lmg/mL(需测定当天配制)
2.3惠尔C(北京英惠尔生物技术有限公司出售的包膜维生素C)
2.4含维生素C的配合饲料样品，其中VC标示量为不小于80mg/kg (北京英惠尔生物技术有限公司)
2.5空白配合饲料样品(即上述含包膜维生素C的配合饲料样品除去包膜维生素C的饲料样品)
3、方法
准确称量5.0Og样品，加入IOOml的乙酸缓冲溶液，摇匀，80W超声提取5min，5000r/min(4200Xg)离心10分钟，收集上清液(待测)。
取20ml乙酸缓冲溶液，加100 μ I样品溶液，按照0.0062V/s的扫描速率以-0.2V为起始电位、0.3V为终止电位进行电位扫描，依序2次加入100 μ I L-抗坏血酸标准溶液(Cs = 0.lmg/mL)，同样品溶液进行电位扫描测定，绘制各样品的极谱图(即1-U曲线)并记录极谱波峰电流值。采用外推法，计算待测样品中维生素C的浓度。
3.1方法线性
权利要求
1.一种测定饲料中维生素C的方法，包括下述步骤: 1)将含维生素C的饲料用pH值为3-5的乙酸缓冲溶液配制成溶液，然后进行超声提取，得到待测样品溶液； 2)分为下述a)或b): a)采用标准加入法，取数份等体积的所述待测样品溶液，并向其中加入不同量的维生素C标准溶液，其中一份样品溶液中不加标准溶液，然后用pH值3-5的乙酸缓冲溶液定容至相同体积，对所得的溶液均以-0.2V为起始电位、0.3V为终止电位进行电位扫描，绘制各溶液的极谱图并记录极谱波峰电流值； b)采用标准加入法，先取所述待测样品溶液用pH值3-5的乙酸缓冲溶液稀释定容得到稀释液，对所述稀释液以-0.2V为起始电位、0.3V为终止电位进行电位扫描，绘制极谱图并记录极谱波峰电流值；然后依次向所述稀释定容后的溶液中加入维生素C标准溶液，每次加入标准溶液混合均匀后，均以-0.2V为起始电位、0.3V为终止电位进行电位扫描,绘制极谱图并记录极谱波峰电流值； 3)以加入的维生素C标准溶液浓度为横坐标，对应的极谱波峰电流值为纵坐标，绘制工作曲线，用外推法得到待测样品中的维生素C浓度。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:步骤I)中所述乙酸缓冲溶液为PH值4.6的乙酸缓冲溶液。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于:步骤I)中所述超声提取的功率为60-80W，提取时间为3-10min。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于:步骤2)中所述电位扫描的扫描速率为0.0050 0.01V/so
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于:步骤2)中a)如下:取三份100 μ I所述待测样品溶液，其中，一份不加入维生素C标准溶液，第二份加入100 μ 1、0.lmg/mL的维生素C标准溶液,第三份加入200 μ 1、0.lmg/mL的维生素C标准溶液,然后用所述乙酸缓冲溶液定容至20ml，对所得三份溶液均按照0.0062V/S的扫描速率以-0.2V为起始电位、0.3V为终止电位进行电位扫描，绘制各溶液的极谱图并记录极谱波峰电流值。
6.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于:步骤2)中b)如下:取100μ I所述待测样品溶液，加入所述乙酸缓冲溶液20ml，按照0.0062V/S的扫描速率以-0.2V为起始电位、0.3V为终止电位进行电位扫描绘制极谱图并记录极谱波峰电流值；然后依序2次加入100 μ 1、0.lmg/mL的维生素C标准溶液,每次加入标准溶液混合均匀后,均以_0.2V为起始电位、0.3V为终止电位进行电位扫描，绘制极谱图并记录极谱波峰电流值。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其特征在于:所述饲料中所含的维生素C为维生素C原粉或包膜维生素C。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于:所述饲料为含维生素C的水产饲料。
全文摘要
本发明公开了一种测定饲料中包膜维生素C的方法。该方法是采用伏安极谱法，包括下述步骤1)将待测样品即含维生素C的饲料用pH值3-5的乙酸缓冲溶液配制成溶液，然后进行超声提取，得到待测样品溶液；2)采用标准加入法测定样品中vc的浓度，将样品及标准加入的样品均以-0.2V为起始电位、0.3为终止电位进行电位扫描，绘制各溶液的极谱图(即I-U曲线)并记录极谱波峰电流值；绘制工作曲线，用外推法即可得到待测样品中的维生素C浓度。本发明方法重现性好，灵敏度高，准确性好，检测限低，为测定饲料中的痕量维生素C提供了一种全新的方法。
文档编号G01N27/48GK103163203SQ20131004137
公开日2013年6月19日 申请日期2013年2月1日 优先权日2013年2月1日
发明者刘庆生, 任泽林, 范志影, 曾虹, 张萍, 马书宇, 赵维香, 田园, 李慧, 黄吉波 申请人:北京英惠尔生物技术有限公司, 中国农业科学院饲料研究所