(mk-7)含量的测定方法
【专利摘要】本发明公开了一种维生素K2（MK-7）含量的测定方法，主要涉及维生素K2（MK-7）的样品提取技术和色谱分离技术。该含量测定方法包括以下步骤:（1）样品溶液的制备；（2）维生素K2（MK-7）含量测定：利用高效液相色谱技术对样品溶液进行测定，得到维生素Ｋ2（MK-7）色谱峰的峰面积，根据标准曲线计算供试品中维生素K2（MK-7）的含量，并结合样品的质量，经计算得到维生素K2（MK-7）的含量。该方法可以用于含有维生素K2（MK-7）保健食品、药品、普通食品或预混料的含量快速测定，对含维生素K2（MK-7）的保健食品、药品、普通食品或预混料的质量进行评价，该含量测定方法准确、快捷、方便、有效。
【专利说明】一种维生素K2 (MK-7)含量的测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于维生素K2 (MK-7)功效成分测定领域，具体地说，涉及一种保健食品、 药品、普通食品或预混料中维生素1( 2 (MK-7)的含量的测定方法。
【背景技术】
[0002] 维生素K2是一种脂溶性维生素，是一系列含有2-甲基-1，4-萘醌母核及C3位 带有数目不等的异戊二烯结构单元的萜烯侧链化合物的统称，其中最为重要的是维生素K 2(MK-5)、K^ (MK-7)，是人体中不可缺少的重要维生素之一。预防骨质疏松作用的主要是维 生素K2(MK-7)。为保证产品质量，其有效成分的含量测定就不能忽视。对食品中维生素K2 (MK-7)含量测定很少报道，尤其是复杂组分中的维生素1(2 (MK-7)的含量测定，国内公开 报告仅有《反相高效液相色谱法测定纳豆提取物中维生素K2(35)含量》（《中国药品标准》 2010年第11卷第4期287页)，该样品处理方法和色谱条件均不适合复杂组分中微量维生 素1( 2 (MK-7)的含量测定，且回收率偏低，色谱过程温度控制高达50°C，保留时间在25~ 35 分钟,该色谱条件对色谱柱产生伤害较大，大大缩短了色谱柱的使用寿命，同时保留时间过 长，工作效率不高。因此，为了控制产品质量，我们对食品中的维生素K2(MK-7)含量测定进 行了研究，为该类产品的质量控制提供了依据。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是针对上述检测方法的不足，向质量控制部门提供一种具有灵敏度 高、准确度好、操作简便、快速、应用范围广等特点，适用于各类保健食品、药品、普通食品或 预混料中维生素1( 2 (MK-7)含量的测定，从而建立一种快速简便的维生素K2 (MK-7)快速 测定方法。
[0004] 为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案： 一种维生素K2 (MK-7)含量的测定方法，包括以下步骤： (1) 样品溶液的配制： 取3. 0-5. 0g样品于50ml棕色容量瓶中，加入30ml异丙醇，在45~55°C恒温水浴锅涡 旋振荡〇. 5~1. 0小时，冷却至室温下，用异丙醇定容至刻度，摇匀，即为样品溶液； (2) 高效液相色谱实验条件： 色谱柱：JADE-PAK0DS(150X4. 6mm，5um)或等效色谱柱； 流速：〇? 8~1. 5ml/min; 检测波长：270nm; 流动相：无水乙醇与乙腈的混合溶液，其中无水乙醇占比50。/『60% ; 进样量：10iil; 柱温：35~45°C; 洗脱时间：20min; (3) 对照品溶液的配制：取维生素1(2(1?-7)对照品【CAS号：2124-57-4】，制成每1ml 分别含 1. 0yg、2. 0yg、4. 0i!g、6. 0i!g、8. 0i!g的对照品溶液； (4)维生素K2 (MK-7)含量测定： 高效液相色谱测定：不同浓度的对照品溶液分别以10Ul进样，测得各标准品溶液的 高效液相色谱峰面积；以所得各标准对照品峰面积为纵坐标，各对应标准对照品浓度为横 坐标分别做标准曲线，分别计算得线性回归方程；然后对样品溶液进行高效液相色谱测定， 得到维生素K2 (MK-7)色谱峰的峰面积，根据标准曲线计算样品中维生素K2 (MK-7)的含 量，并结合样品的质量，经计算得到维生素K2 (MK-7)的含量。
[0005] 所述步骤四中的维生素K2 (MK-7)含量的计算公式为：
【权利要求】
1. 一种维生素K2 (MK-7)含量的测定方法，其特征在于：包括以下步骤： (1) 样品溶液的配制： 取3. 0-5.Og样品于50ml棕色容量瓶中，加入30ml异丙醇，在45~55°C恒温水浴锅涡 旋振荡〇. 5~1. 0小时，冷却至室温下，用异丙醇定容至刻度，摇匀，即为样品溶液； (2) 高效液相色谱实验条件： 色谱柱：JADE-PAKODS(150X4. 6mm，5um)或等效色谱柱； 流速：〇· 8~1. 5ml/min; 检测波长：270nm; 流动相：无水乙醇与乙腈的混合溶液，其中无水乙醇占比50。/『60% ; 进样量：10μ1 ; 柱温：35~45°C; 洗脱时间：20min; (3) 对照品溶液的配制：取维生素1(2 (MK-7)对照品【CAS号：2124-57-4】，制成每Iml 分别含 1. 〇μg、2. 0μg、4. 0μg、6. 0μg、8. 0μg的对照品溶液； (4) 维生素K2 (MK-7)含量测定： 高效液相色谱测定：不同浓度的对照品溶液分别以10μ1进样，测得各标准品溶液的 高效液相色谱峰面积；以所得各标准对照品峰面积为纵坐标，各对应标准对照品浓度为横 坐标分别做标准曲线，分别计算得线性回归方程；然后对样品溶液进行高效液相色谱测定， 得到维生素K2 (ΜΚ-7)色谱峰的峰面积，根据标准曲线计算样品中维生素K2 (ΜΚ-7)的含 量，并结合样品的质量，经计算得到维生素K2 (ΜΚ-7)的含量。
2. 如权利要求1所述的维生素K2 (ΜΚ-7)含量的测定方法，其特征在于：所述步骤四中 的维生素1(2 (ΜΚ-7)含量的计算公式为：
式中A样：样品溶液的维生素1(2峰面积； C:对照品溶液的浓度，μg/ml; A标：对照品溶液的维生素1(2峰面积； W样：样品称重，g。
3. 如权利要求1所述的维生素K2 (MK-7)含量的测定方法，其特征在于：所述的样品溶 液经0. 45um微孔滤膜过滤后再进样。
4. 如权利要求1所述的维生素K2 (MK-7)含量的测定方法，其特征在于：所述的步骤一 中的样品为固体样品则需先用研钵及研杵研磨成细粉后使用，若样品为液体样品则直接取 用，若样品为胶囊样品则取若干胶囊的内容物，研磨混合均匀后使用。
5. 如权利要求1所述的维生素K2 (MK-7)含量的测定方法，其特征在于：所述方法适 用于含维生素K2 (MK-7)的片剂、维生素1(2 (MK-7)类硬胶囊、维生素1(2 (MK-7)类粉剂、维 生素K2 (MK-7)类软胶囊、维生素K2 (MK-7)类滴剂、维生素K2 (MK-7)类丸剂、维生素K2 (MK-7)类软糖、维生素K2 (MK-7)类饮料，产品可以是保健食品、药品、普通食品或预混料。
【文档编号】G01N30/88GK104458990SQ201410755707
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月11日 优先权日:2014年12月11日
【发明者】张兴, 高平, 张国栋, 夏旭东 申请人:江苏艾兰得营养品有限公司