一种用于检测敏化硝酸纤维素膜上抗体的胶体金膜的制作方法
【专利摘要】本实用新型公开了一种用于检测敏化硝酸纤维素膜上抗体位置和污染的胶体金膜，包括含有胶体金探针的金标垫、PVC胶板、滤样纸以及金探针复溶液。本实用新型的胶体金膜应用于检测敏化硝酸纤维素膜生产起始阶段中敏化硝酸纤维素膜上质控抗体和捕获抗体位置是否对调以及两种抗体是否被相互污染，具有操作安全、简便、快速、准确、适合生产现场操作等优点。
【专利说明】一种用于检测敏化硝酸纤维素膜上抗体的胶体金膜
【技术领域】
[0001]本实用新型属于生物医药【技术领域】，具体涉及一种胶体金膜，尤其涉及一种用于检测敏化硝酸纤维素膜上抗体的胶体金膜，适用于检测敏化硝酸纤维素膜上质控抗体和捕获抗体位置是否对调以及质控抗体和捕获抗体是否被相互污染。
【背景技术】
[0002]将质控抗体、捕获抗体包被到硝酸纤维素膜上生产敏化硝酸纤维素膜是免疫层析试纸条生产制作中的关键环节之一。目前的喷膜技术即将抗体包被到硝酸纤维素膜上，分为两种，一种是接触划点工艺，即在接触喷点系统中，喷头划过硝酸纤维素膜表面，同时泵推动一定量的液体从喷头处释放到硝酸纤维素膜表面上；另一种是喷点工艺，使用电磁阀连接高精度步进泵，将喷点液体喷点到硝酸纤维素膜上且以紧密的交迭点构成连续的线条，喷点过程与成像系统连接，能检查喷点线条的质量同时标记任何不好的部分。这两种工艺均能够将质控抗体和捕获抗体分别均匀地喷点在硝酸纤维素膜上指定区域(分别为质控线区域、检测线区域)。
[0003]由于目前的喷膜技术均无法区分质控抗体和捕获抗体，不能够确定质控抗体和捕获抗体位置对调或者检测两种抗体之间相互污染(例如，因喷膜抗体与捕获抗体配制/使用时混料而导致的抗体污染)，从而导致整批敏化硝酸纤维素膜报废。
[0004]因此，亟需开发一种可用于快速检测敏化硝酸纤维素膜上质控抗体和捕获抗体位置是否对调以及质控抗体和捕获抗体是否被相互污染的新产品。
实用新型内容
[0005]针对现有技术的不足，本实用新型要解决的技术问题是提供一种用于检测敏化硝酸纤维素膜上抗体的胶体金膜，用于检测敏化硝酸纤维素膜上质控抗体和捕获抗体位置是否对调和两种抗体是否被相互污染。
[0006]为解决上述技术问题，本实用新型提供一种用于检测敏化硝酸纤维素膜上抗体的胶体金膜，该敏化硝酸纤维素膜上设有包被质控抗体的质控线和包被捕获抗体的检测线，该胶体金膜包括含有胶体金探针的金标垫以及配套使用的PVC胶板、滤样纸和金探针复溶液。在PVC胶板上依次叠合有滤样纸，含有胶体金探针的金标垫，以及待检敏化硝酸纤维素膜；金探针复溶液滴加在滤样纸上。
[0007]作为优选的技术方案，所述金标垫是包被金探针的玻璃纤维。所述含有胶体金探针的金标垫为兔抗体金标垫或羊抗鼠抗体金标垫；所述兔抗体金标垫是兔多克隆抗体标记的金探针包被在玻璃纤维上，所述羊抗鼠抗体金标垫是羊抗鼠多克隆抗体标记的金探针包被在玻璃纤维上。
[0008]作为优选的技术方案，所述金探针是偶联抗体的胶体金颗粒，即所述胶体金探针采用胶体金颗粒与抗体分子通过物理吸附的作用偶联结合。
[0009]作为优选的技术方案，所述胶体金颗粒的直径范围是20_60nm。[0010]作为优选的技术方案，所述抗体分子是兔多克隆抗体或羊抗鼠多克隆抗体。即所述兔抗体胶体金膜包括包被兔多克隆抗体标记的金探针的金标垫以及配套使用的PVC胶板、滤样纸和金探针复溶液。所述羊抗鼠抗体胶体金膜包括包被羊抗鼠多克隆抗体标记的金探针的金标垫以及配套使用的PVC胶板、滤样纸和金探针复溶液。
[0011]作为优选的技术方案，所述金探针复溶液包括以下组分(质量百分比):
[0012]Triton X-1000.05% ；
[0013]NaH2PO4.2H20 0.38% ；
[0014]Na2HP04.12H20 2.95% ；
[0015]该金探针复溶液的ρΗ=8.0±0.I。
[0016]本实用新型采用物理吸附胶体金颗粒标记法，分别制备兔抗体胶体金膜和羊抗鼠抗体胶体金膜，其中兔抗体胶体金膜用于检测敏化硝酸纤维素膜上质控抗体，羊抗鼠抗体胶体金膜用于检 测敏化硝酸纤维素膜上捕获抗体。
[0017]本实用新型的胶体金膜检测敏化硝酸纤维素膜上抗体的原理是将20_60nm胶体金颗粒与抗体分子如兔多克隆抗体/羊抗鼠多克隆抗体通过物理吸附的作用偶联结合，当此结合物通过敏化硝酸纤维素膜上质控抗体(羊抗兔多克隆抗体)和捕获抗体(鼠单克隆抗体)时能够发生特异性地结合，形成肉眼可见的红色线条，从而可以快速准确地判断敏化硝酸纤维素膜上质控抗体/捕获抗体位置是否对调以及两种抗体是否被相互污染。
[0018]和现有技术相比，本实用新型的胶体金膜具有以下有益效果:本实用新型用于检测生产的起始阶段的敏化硝酸纤维素膜，能够在生产现场方便快速检测和判断敏化硝酸纤维素膜上质控抗体和捕获抗体位置是否对调、两种抗体是否被相互污染，及时避免因质控抗体和捕获抗体位置对调或者两种抗体被相互污染而导致的整批次敏化硝酸纤维素膜产品报废及时间/人力浪费，具有良好的经济效益。本实用新型所述的胶体金膜，具有操作安全、简便、快速、准确、适合生产现场操作等优点。
【专利附图】
【附图说明】
[0019]图1是本实用新型实施例2中试纸条的组装示意图；
[0020]图2是本实用新型实施例2中兔抗体胶体金膜检测结果示意图。其中，图2A1为合格，图2B1为不合格，图2C1为不合格。
[0021]图3是本实用新型实施例2中羊抗鼠抗体胶体金膜检测结果示意图。其中，图3A2为合格，图3B2为不合格，图3C2为不合格。
[0022]其中，附图标记说明如下:
[0023]I为滤样纸,2为含有胶体金探针的金标垫,3为检测线,4为质控线,5为待检敏化硝酸纤维素膜，6为PVC胶板，7为金探针复溶液。
【具体实施方式】
[0024]下面结合附图和实施例对本实用新型作进一步详细的说明。
[0025]如图1所示，本实用新型涉及的一种用于检测敏化硝酸纤维素膜上抗体的胶体金膜由含有胶体金探针的金标垫2、滤样纸1、PVC胶板6和金探针复溶液7组成，在PVC胶板6上依次叠合滤样纸1，含有胶体金探针的金标垫2，以及待检敏化硝酸纤维素膜5 ;金探针复溶液7滴加在滤样纸I上；待检敏化硝酸纤维素膜5上设有包被质控抗体的质控线4和包被捕获抗体的检测线3。含有胶体金探针的金标垫2可以为兔抗体金标垫或羊抗鼠抗体金标垫。所述兔抗体金标垫是兔多克隆抗体标记的金探针包被在玻璃纤维上，所述羊抗鼠抗体金标垫是羊抗鼠多克隆抗体标记的金探针包被在玻璃纤维上。含有胶体金探针的金标垫2中的胶体金颗粒直径在20-60nm。
[0026]实施例1胶体金膜的制备
[0027]A.胶体金溶液的制备:取0.01%HAuC14水溶液100ml，煮沸后加入1%柠檬酸钠水溶液0.63ml，继续加热20分钟，室温冷却后2_8°C保存备用；
[0028]B.金探针复溶液的制备:
[0029]所述金探针复溶液包括如下重量百分比的组分:
[0030]Triton X-1000.05% ；
[0031]NaH2PO4.2H20 (二水合磷酸二氢钠) 0.38%
[0032]Na2HPO4.12H20 (十二水合磷酸氢二钠) 2.95%
[0033]该金探针复溶液的ρΗ=8.0±0.I。[0034]配制100mL 金探针复溶液:称取 0.38g NaH2PO4.2H20, 2.95g Na2HPO4.12H20 和
0.05gTriton X_100，依次加入到60ml去离子水中，缓慢搅拌直至完全溶解，用0.1N NaOH和0.1N HCl调整其PH至8.0 ±0.1，然后定容至100ml。
[0035]C.兔抗体金探针的制备:
[0036]I)兔多克隆抗体最佳标记量的确定
[0037]1.1)取IOml,用0.1M碳酸钾溶液调整PH到8.0-8.4，搅拌20分钟后分装10管，每管1ml。
[0038]1.2)将兔多克隆抗体(购自Dako)以IOOmM PH8.2±0.2硼酸盐缓冲液做系列稀释，抗体终浓度分别为20-100 μ g/ml，浓度梯度为10μ g/ml，分别取1ml，加入上述胶体金溶液中，混匀。对照管只加ImllOOmM PH8.2±0.2硼酸盐缓冲液。
[0039]1.3) IOmin后，在上述各管中加入0.lmllO%NaCl溶液，混匀后静置2h，观察结果。
[0040]1.4)结果观察，对照管和兔多克隆抗体量不足以稳定胶体金的各管，均呈现出由红变蓝的聚沉现象，加入兔多克隆抗体量达到或超过最低稳定量的各管仍保持红色。以稳定Iml胶体金溶液红色不变的最低兔多克隆抗体用量作为兔多克隆抗体的最低标记用量，在此基础上增加10-20%即兔多克隆抗体的最佳标记量。
[0041]2)兔抗体金探针的制备:取100mL胶体金溶液，用0.1M碳酸钾溶液调整PH到
8.0-8.4，加入兔多克隆抗体，室温搅拌30min，加入终浓度为1%牛血清白蛋白，继续搅拌30分钟，4°C 11000RTC转速离心，弃上清，沉淀用金探针复溶液重悬，2-8°C保存备用。
[0042]D.羊抗鼠抗体金探针的制备:
[0043]I)羊抗鼠多克隆抗体最佳标记量的确定
[0044]1.1)取IOml,用0.1M碳酸钾溶液调整PH到8.0-8.4，搅拌20分钟后分装10管，每管1ml。
[0045]1.2)将羊抗鼠多克隆抗体(购自夏门波生生物技术有限公司)以IOOmMPH8.2±0.2硼酸盐缓冲液做系列稀释，抗体终浓度分别为20-100 μ g/ml，浓度梯度为10μ g/ml，分别取1ml，加入上述胶体金溶液中，混匀。对照管只加ImllOOmM PH8.2±0.2硼酸盐缓冲液。
[0046]1.3) IOmin后，在上述各管中加入0.lmllO%NaCl溶液，混匀后静置2h，观察结果。
[0047]1.4)结果观察，对照管和羊抗鼠多克隆抗体量不足以稳定胶体金的各管，均呈现出由红变蓝的聚沉现象，加入羊抗鼠多克隆抗体量达到或超过最低稳定量的各管仍保持红色。以稳定Iml胶体金溶液红色不变的最低羊抗鼠多克隆抗体量作为羊抗鼠多克隆抗体的最低标记用量，在此基础上增加10-20%即羊抗鼠多克隆抗体的最佳标记量。
[0048]2)羊抗鼠抗体金探针的制备:取100mL胶体金溶液，用0.1M碳酸钾溶液调整PH到
8.0-8.4，加入羊抗鼠多克隆抗体，室温搅拌30min，加入终浓度为1%牛血清白蛋白，继续搅拌30分钟，4°C 11000RTC转速离心，弃上清，沉淀用金探针复溶液重悬，2-8°C保存备用。
[0049]E.金探针稀释液的配制
[0050]所述金探针稀释液包括以下组分(质量百分比):
[0051]
Triton X-100 1.0%；
BSA (牛血清白蛋白)1%
蔗糖2% ；
NaCl (氯化钠) 1%;
PEG20000 (聚乙二醇 20000) 0.5%;
NaH2PO4.2Η20 (二水合磷酸二氢钠) 0.38%;
Na2HPO4.12ΗΛ (十二水合磷酸氢二钠)2.95%;
[0052]ρΗ=8.0±0.1。
[0053]配制100mL 金探针稀释液:称取 0.38g NaH2PO4.2Η20、2.95g Na2HPO4.12H20、lgNaCl、2g 蔗糖、0.5g PEG20000 和 1.0g Triton X-100，依次加入到 60ml 去离子水中，待完全溶解后加入Ig BSA,缓慢搅拌直至完全溶解，用0.1N NaOH和0.1N HCl调整其PH至
8.0±0.1，然后定容至100ml。
[0054]F.兔抗体金标垫溶液的制备:将兔抗体金探针用金探针稀释液稀释到0D530浓度为 1-2。 [0055]G.兔抗体金标垫的制备:将玻璃纤维浸泡在兔抗体金标垫溶液中，待玻璃纤维充分浸润后取出，37°C干燥6小时,密封保存备用。
[0056]H.羊抗鼠抗体金标垫溶液的制备:将羊抗鼠抗体金探针用金探针稀释液稀释到0D530浓度为1-2。
[0057]J.胶体金膜的制备，由上述制得的金标垫和金探针复溶液及PVC胶板和滤样纸所组成，PVC胶板及滤样纸是成熟商品，可购自市场。
[0058]实施例2利用胶体金膜进行敏化硝酸纤维素膜检测
[0059]当开始生产敏化硝酸纤维素膜时，将起始敏化硝酸纤维素膜5剪下一小段，粘贴在PVC胶板6上，然后依次粘贴兔抗体金标垫2 (或羊抗鼠抗体金标垫)和滤样纸I (见图1)，然后裁剪成约4_宽的试纸条，将200 μ I金探针复溶液7滴加在试纸条的滤样纸I上，3-5分钟内观察敏化硝酸纤维素膜5上质控线4和检测线3的显色情况，以此判断敏化硝酸纤维素膜上质控抗体和捕获抗体位置是否对调、两种抗体是否被污染。
[0060]1.检测的准备
[0061] 羊抗鼠抗体金标垫(按实施例1制备)
[0062]兔抗体金标垫(按实施例1制备)
[0063]金探针复溶液(按实施例1制备)
[0064]PVC 胶板
[0065]滤样纸
[0066]2.检测步骤
[0067]A.敏化硝酸纤维素膜上质控线检测:当开始生产敏化硝酸纤维素膜时，将起始敏化硝酸纤维素膜剪下一小段，粘贴在PVC胶板上，剪切一段已粘贴敏化硝酸纤维素膜的PVC膜板，然后依次粘贴兔抗体金标垫和滤样纸，再裁剪成约4mm宽的试纸条，将200 μ I胶体金探针复溶液滴加在试纸条的滤样纸上，3-5分钟内观察敏化硝酸纤维素膜上质控线和检测线的显色情况，以此判断敏化硝酸纤维素膜上质控抗体和捕获抗体位置是否对调、两种抗体是否被污染。
[0068]B.敏化硝酸纤维素膜上检测线检测:当开始生产敏化硝酸纤维素膜时，在检测步骤A中另一段已粘贴敏化硝酸纤维素膜的PVC胶板上依次粘贴羊抗鼠抗体金标垫和滤样纸，然后裁剪成约4_宽的试纸条，在试纸条的滤样纸上滴加200 μ I金探针复溶液，3-5分钟内观察敏化硝酸纤维素膜上质控线和检测线的显色情况，以此判断敏化硝酸纤维素膜上质控抗体和捕获抗体位置是否对调、两种抗体是否被污染。
[0069]3检测结果和判定
[0070]通过查看试纸条上敏化硝酸纤维素膜上质控线和检测线是否显红色线条，判定结果。检测结果见图2和图3。
[0071]结果判断方法如下表1:
[0072]
【权利要求】
1.一种用于检测敏化硝酸纤维素膜上抗体的胶体金膜，该敏化硝酸纤维素膜上设有包被质控抗体的质控线和包被捕获抗体的检测线，其特征在于，该胶体金膜包括含有胶体金探针的金标垫，PVC胶板、滤样纸；在PVC胶板上依次叠合有滤样纸，含有胶体金探针的金标垫，以及待检敏化硝酸纤维素膜。
2.如权利要求1所述的胶体金膜，其特征在于，所述金标垫是包被金探针的玻璃纤维；所述含有胶体金探针的金标垫为兔抗体金标垫或羊抗鼠抗体金标垫；所述兔抗体金标垫是兔多克隆抗体标记的金探针包被在玻璃纤维上，所述羊抗鼠抗体金标垫是羊抗鼠多克隆抗体标记的金探针包被在玻璃纤维上。
【文档编号】G01N33/531GK203705451SQ201320799086
【公开日】2014年7月9日 申请日期:2013年12月5日 优先权日:2013年12月5日
【发明者】张展英, 杜昕光 申请人:美艾利尔（上海）诊断产品有限公司