一种纳米铁免疫检测器的制造方法
【专利摘要】本发明建立了一种应用纳米铁进行免疫分析的方法，本发明利用磁性荧光微球上固定抗体，利用抗体一抗原特异性结合之一特点，固定抗体的磁性荧光微球可与异硫氰酸荧光素标记的抗原结合，而待测物中抗原的浓度与荧光强度之间具有良好的线性关系，依据于此建立检测抗原含量的新方法，进一步研发为新型检测器。
【专利说明】-种纳米铁免疫检测器
【技术领域】
[0001] 本发明提出的是设计研发一种新型纳米铁免疫检测器。
【背景技术】
[0002] 在将磁性复合微粒用于免疫学研究领域中时，科学家形象地将其称为免疫磁性微 球（Immunomagnetic microspheres，IMMS)，或称免疫磁珠（Immunomagnetic，bedas，IMB)〇 由于磁性微粒超强的富集和快速的分离能力、较高的比表面积以及表面结合抗体对相应抗 原的特异性识别作用，可以用来进行抗体/抗原分离和EUSA检测，与传统的酶标法（EUAs) 相比，具有更高的检测灵敏度，操作更为简单；还可以对小分子药物进行免疫检测，结合免 疫荧光、光纤传感、电磁分离、流式细胞仪、流动注射等技术，实现在线快速检测。
[0003] 本发明提出设计研发一种新型纳米铁免疫检测器用于进行免疫分析。研发阶段包 括：1、磁性突光微球的合成；2、磁性突光微球固定抗体；3、检测器样品池的研发；4、检测器 的组装及调试；5、检测器性能论证。
[0004] 本发明利用磁性荧光微球上固定抗体，利用抗体一抗原特异性结合特点，固定抗 体的磁性荧光微球可与异硫氰酸荧光素标记的抗原结合，而待测物中抗原的浓度与荧光强 度之间具有良好的线性关系，依据于此建立检测抗原含量的新方法，进一步研发为新型检 测器。研发的检测器只需检测到量子点荧光强度的变化，并转换为数字信号，与荧光分光 光度计相比，构造简单、成本低廉，且具有操作方便、灵敏度高、检测范围宽和循环利用等优 点，可以用于免疫检测和细胞分离等方面。
【发明内容】
[0005] 1、量子点的合成。
[0006] 2、磁性突光微球的合成及其固定抗体。
[0007] 3、检测器组装及调试。
【专利附图】
【附图说明】
[0008] 图1为本发明仪器的结构图即检测器结构示意图，其中：1、光源，2、样品池，3、电 感磁圈，4、（XD，5、显示屏，6、废液缸，7、进样瓶，8、样品池进口阀门，9、样品池出口阀门，10、 懦动泵，11、光源开关，12、电感磁圈开关。图2为不例一的突光光谱图。
【具体实施方式】
[0009] 1、量子点的合成 首先在2 mL水溶液中，将适量硼氢化钠与2. 9 mg締粉混合反应制得締氢化钠的溶液 1;在三口瓶中加入100 mL水，加入氯化镉并调节pH =11. 4,在100 μ L巯基丙酸稳定剂 存在条件下，将新鲜制得的溶液1添加到此溶液中，加热，常温下，以罗丹明6G为对照，测得 所合成量子点的量子效率在?25%左右。
[0010] 2、磁性突光微球的合成及固定抗体 1) 称取一定量的氯化铁置入小烧杯，量取21 ml无水乙醇和9 ml蒸馏水后放入烧杯， 搅拌至完全溶解，转移至100 ml三口烧瓶中； 2) 在小气流氮气氛围并且剧烈机械搅拌的情况下保持15 min ; 3) 称取一定量的硼氢化钠，置入2 ml蒸馏水后溶解密封，用注射器缓慢加入三口烧瓶 中； 4) 用1 ml移液管吸取2 ml TE0S和100 μ L氨水滴加至三口烧瓶中，氮气保护并剧烈 搅拌反应1 h ; 5) 加入1 ml所合成的CdTe量子点，加入2ml APS继续搅拌2小时； 6) 反应完成后进行磁选分离，将悬浮液分离后，蒸馏水洗涤三次并重复磁选分离至清 夜中无悬浮物。将固体转移至烘干瓶中放入烘干箱设定温度为70摄氏度待固体变为灰黑 色； 7) 将所得磁性荧光微球复溶于PBS缓冲溶液之中，加入抗体(例如羊抗兔IgG)孵育20 分钟，离心分离，去上清得固定抗体的磁性荧光微球。
[0011] 3、检测器主要部件 (1) 、蠕动泵：将各种溶液以恒定的浓度、速率，定量引入流通池之中； (2) 、光源：提供激发波长为365 nm的激发光； (3) 、样品池：为1 cmXl cmX5 cm四面透光、中空的石英长方体，在长方体的左右上下 各有一个孔，通过导管分别与蠕动泵和废液缸相连接，进、出口分布设置开关阀门； (4) 、CCD :检测量子点荧光强度变化，并将光学信号转化为数字信号； (5) 、电脑：根据数字信号，结合所建立数据库给出所检测甲样品的浓度。
[0012] 4、检测过程(抗体采用羊抗兔IgG、抗原采用FITC-兔抗羊IgG为模型）： ①接通电源，打开样品池出口阀门，通过蠕动泵先后将氢氧化钠溶液和蒸馏水引入样 品池，对样品池进行清洗；②关闭样品池出口阀门，向样品池中加入1 ml固定了抗体的磁 性荧光微球及1 ml PBS缓冲溶液；③向样品池中加入1号FITC-兔抗羊Ig G溶液；④补加 蒸馏水至样品池充满（总体积5 ml)，关闭样品池进口阀门；⑤打开电感磁圈开关，5分钟 后，打开出口阀门，排出溶液；⑥打开光源，CCD检测荧光，并转化为数字信号，与电脑中的 标准曲线数据库相对照给出甲醛浓度；⑦关闭光源，关闭电感磁圈；⑧向样品池中加入2号 FITC-兔抗羊Ig G溶液，重复步骤3-8至所有溶液测定完成；⑨关闭光源，关闭电感磁圈； 先后通入氢氧化钠溶液和蒸馏水清洗样品池，实验结束后排空样品池。
[0013] 示例一，依次加入不同浓度FITC-兔抗羊IgG所得的测定图谱（图二)，浓度依次为 (a) 0.50 mg/L; (b) 0.90 mg/L; (c) 1.20 mg/L; (d) 1.30 mg/L; (e) 1.60 mg/L〇
[0014] 示例二，若将某一需分离的细胞二抗固定在磁性荧光微球上，通过本仪器可以与 抗原和待分离细胞形成三明治结构，可以对细胞进行分离与富集。
【权利要求】
1. 一种检测器，主要部件包括以下部分，将各种溶液以恒定的浓度、速率定量引入流通 池之中的蠕动泵；提供激发光的光源；四面透光、中空的石英长方体的样品池；可以控制开 启和关闭的电感磁圈；并将光学信号转化为数字信号的CCD ;以及电脑。
2. -种检测方法，应用权利一检测器进行检测的一种方法，具体操作过程如下（以抗体 采用羊抗兔IgG、抗原采用FITC-兔抗羊IgG为模型):①接通电源，打开样品池出口阀门，通 过蠕动泵先后将氢氧化钠溶液和蒸馏水引入样品池，对样品池进行清洗；②关闭样品池出 口阀门，向样品池中加入1 ml固定了抗体的磁性荧光微球及1 ml PBS缓冲溶液；③向样 品池中加入1号FITC-兔抗羊Ig G溶液；④补加蒸馏水至样品池充满(总体积5 ml)，关闭 样品池进口阀门；⑤打开电感磁圈开关，5分钟后，打开出口阀门，排出溶液；⑥打开光源， CCD检测荧光，并转化为数字信号，与电脑中的标准曲线数据库相对照给出甲醛浓度；⑦关 闭光源，关闭电感磁圈；⑧向样品池中加入2号FITC-兔抗羊Ig G溶液，重复步骤3-8至所 有溶液测定完成；⑨关闭光源，关闭电感磁圈；先后通入氢氧化钠溶液和蒸馏水清洗样品 池，实验结束后排空样品池。
【文档编号】G01N21/64GK104090096SQ201410330438
【公开日】2014年10月8日 申请日期:2014年7月14日 优先权日:2014年7月14日
【发明者】金丽, 曹雪玲, 娄大伟 申请人:吉林化工学院