浊点萃取-紫外可见分光光度法测定痕量锌离子的方法
【专利摘要】本发明公开了一种浊点萃取-紫外可见分光光度法测定痕量锌离子的方法。本发明方法包括如下步骤：将待测样品加到包含pH＝8.5的NH4Cl-NH3·H2O缓冲溶液、1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚、TritonX-100、SDS和饱和氯化钠NaCl的浊点萃取体系中；混匀后，置于冰箱中平衡；再通过离心使两相分离，收集下层相，用无水乙醇稀释后，通过分光光度法测定锌离子的含量；其中，分光光度法的吸收波长为549nm。本发明方法可用于测定环境水样、土壤中痕量的锌离子，锌离子的检出限是3.3ng·mL-1，富集倍数是38，相对标准偏差是2.8％，加标回收率在97.7～101.5％之间。
【专利说明】浊点萃取-紫外可见分光光度法测定痕量锌离子的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及测定痕量金属离子的方法，具体涉及一种浊点萃取-紫外可见分光光度法测定痕量锌离子的方法。
【背景技术】
[0002]锌对于酶类的生成起重要的作用。锌在免疫系统、消化系统、神经系统的功能中是很重要的，在一些食品中锌也是很重要的。大量的锌金属酶被应用在所有的新陈代谢中。身体缺锌会导致皮肤病，伤口恢复缓慢，味觉和嗅觉功能减退，易感染，生育能力降低，孩子生长缓慢，嗜睡，食欲不振及容易掉发。锌是高度抗腐蚀的并且被广泛用作为一种防护涂层在不同的产品中。美国环境保护机构(EPA)已经公布了饮用水中锌的含量不超过
[0003]环境样品中痕量元素的测定是一件很困难的分析任务，由于样品成分是复杂的并且所测组分含量很低。因此需要灵敏的仪器检测技术和预富集技术。传统的萃取技术和其他的传统分离方法是耗时耗力的，除此之外还需要大量高纯度的有机溶剂，对环境造成严重的污染。浊点萃取预富集技术能够解决这些问题。浊点萃取技术使用低毒性的表面活性剂代替有毒的有机溶剂。该方法是一种绿色的化学方法。一般在应用定量分析技术像火焰原子吸收光谱法、电感耦合等离子体发射光谱法及分光光度法之前，利用浊点萃取法萃取痕量的金属螯合物。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种浊点萃取-紫外可见分光光度法测定痕量锌离子的方法。
[0005]本发明的目的通过下述技术方案实现:
[0006]一种浊点萃取-紫外可见分光光度法测定痕量锌离子的方法，包括如下步骤:将待测样品加到包含NH4Cl-NH3.H2O缓冲溶液、1-(2-吡啶偶氮)_2_萘酚(PAN)、TritonX-100、SDS和NaCl的浊点萃取体系中，混匀后，置于冰箱中平衡；平衡结束后再通过离心使两相分离，收集下层相，用无水乙醇稀释后，通过分光光度法测定锌离子的含量。
[0007]所述的NH4Cl-NH3.H2O 缓冲溶液的 pH 优选为 8.5 ；pH = 8.5 的 NH4Cl-NH3.H2O 缓冲溶液在浊点萃取体系中的终浓度优选为4% (v/v)。
[0008]所述的1-(2-吡啶偶氮)-2_萘酚在浊点萃取体系中的终浓度优选为
5.6 X 10 5mol.L、
[0009]所述的TritonX-1OO在浊点萃取体系中的终浓度优选为0.4% (v/v)。
[0010]所述的SDS在浊点萃取体系中的终浓度优选为0.1 % (w/w)。
[0011]所述的NaCl在浊点萃取体系中的终浓度按饱和NaCl溶液计优选为12% (v/v)，即ImL浊点萃取体系含0.12mL饱和NaCl溶液。
[0012]所述的平衡的温度优选为0°C，平衡的时间优选为30min。
[0013]所述的离心的条件优选为4000r/min离心lOmin。
[0014]所述的分光光度法的吸收波长优选为549nm。
[0015]优选的，所述的浊点萃取-紫外可见分光光度法测定痕量锌离子的方法包括如下步骤:将1.0mL待测样品溶液加入到15mL离心管中，依次加入0.4mLpH = 8.5的NH4Cl-NH3.H2O 缓冲溶液，0.14mL4.0X 10_3mol.L—1 的 1-(2-吡啶偶氮)_2_ 萘酚，0.8mL5%(v/v)的 TritonX-1OO 溶液，1.0mLl % (w/w)的 SDS 溶液。然后加入 1.2mL 饱和 NaCl 溶液，整个体系立刻变得浑浊。用二次蒸馏水定容至10mL，混匀后，置于冰箱中在(TC保持30min，然后转速在4000r/min离心1min使两相分离。然后通过倾倒法将上层的主体水相去除掉。在下层小体积的表面活性剂富集相中加入无水乙醇定容至3.0mL进行稀释，测定所得溶液在549nm的吸光度。通过作出的标准工作曲线，横坐标是Zn2+浓度，纵坐标是吸光度值。根据吸光度值来确定Zn2+浓度。
[0016]本发明相对于现有技术具有如下优点和效果:
[0017]本发明测定痕量锌离子的方法具有溶剂用量少，操作简单，用时短，对环境无污染，富集倍数大，检测限低等特点。由于操作条件是在o°c的低温条件下即可达到很好的效果，对于热敏性的金属螯合物有很好的保护作用。因此金属螯合物的萃取率很高。
[0018]本发明方法锌离子的检出限是3.3ng.mL—1，富集倍数是38，相对标准偏差是2.8% ;测定环境水样、土样、血样中痕量的金属离子Zn2+所得到的加标回收率在97.7?101.5%之间。
【专利附图】
【附图说明】
[0019]图1是不同浓度的Zn2+与PAN形成的金属螯合物的吸收曲线图，a到f浓度分别为 10、50、100、200、300、400ng.ml^Zn2+。
[0020]图2是pH对Zn2+萃取率的影响结果图。
[0021]图3是PAN用量对Zn2+萃取率的影响结果图。
[0022]图4是TritonX-1OO浓度对Zn2+萃取率的影响结果图。
[0023]图5是平衡时间对Zn2+萃取率的影响结果图。
[0024]图6是SDS浓度对Zn2+萃取率的影响结果图。
[0025]图7是NH4Cl-NH3.H2O缓冲液用量对Zn2+萃取率的影响结果图。
[0026]图8是离心时间对Zn2+萃取率的影响结果图。
[0027]图9是饱和NaCl用量对Zn2+萃取率的影响结果图。
【具体实施方式】
[0028]下面结合具体实施例对本发明做进一步详细的描述。应理解，下面的实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
[0029]实施例1浊点萃取-紫外可见分光光度法测定痕量锌离子的方法的建立
[0030]1、仪器、试剂
[0031](I)仪器:PHS-3C型数字式酸度计(上海奥斯仪器有限公司)，CAV214C电子天平(上海奥豪斯仪器有限公司)，DL-360E型智能超声波清洗仪(上海之信仪器有限公司)，UV2550紫外可见分光光度计(日本岛津公司)，TG6A离心机(上海卢湘仪仪器有限公司)，恒温鼓风干燥箱(上海新苗医疗器械制造有限公司)，电热恒温水浴锅(北京市永光明医疗仪器厂)。
[0032](2)试剂:lmg ^r1Zn2+标准储备液其中加入一定量2% (v/v)的稀硝酸溶液，Zn2+标准工作溶液(5μ g.mL-1)是由Zn2+标准储备液用水稀释而成的。1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚(PAN) (99%，阿拉丁试剂公司)配制成 4.0X10_3mol ?Γ1 的乙醇溶液。TritonX-1OO (99%,阿拉丁试剂公司)配成5% (v/v)的水溶液。SDS(成都科龙试剂有限公司)配成浓度为1% (w/w)的水溶液。0.2mol.Γ1 的 NH4Cl 溶液和 0.2mol.Γ1 的 NH3.H2O 溶液配成 pH =
8.5的缓冲溶液。其他所用的试剂都是分析纯级的，在实验过程中的用水是二次蒸馏水。
[0033]2、试验方法和结果
[0034]试验方法:Zn2+标准溶液浊点萃取和测定的方法
[0035]取一定量的Zn2+标准工作溶液到15mL离心管中，依次加入0.4mLpH = 8.5的NH4Cl-NH3.H2O 缓冲溶液，0.14mL4.0X 10_3mol.L—1 的 1-(2-吡啶偶氮)_2_ 萘酚(PAN)，
0.8mL5% (v/v)的 TritonX-1OO 溶液，0.2mLl% (w/w)的 SDS 溶液。然后加入 1.5mL 饱和NaCl溶液，整个体系立刻变得浑浊。用二次蒸馏水定容至10mL，混匀后，置于冰箱中在0°C左右保持30min,然后转速在4000r/min离心1min使两相分离。此反应不需要冰浴，因为此反应体系的胶束相是由SDS与TritonX-1OO组成的混和表面活性剂作为萃取剂。然后通过倾倒法将上层的主体水相去除掉。在下层小体积的表面活性剂富集相中加入无水乙醇定容至3.0mL进行稀释，将所得溶液利用紫外-可见分光光度计进行吸收曲线或吸光度的测定。
[0036]以此方法为基础，确定金属络合物最大吸收波长，并研究pH值、PAN用量、TritonX-1OO浓度、平衡时间、SDS浓度、缓冲液用量、离心时间、饱和NaCl用量等因素对浊点萃取的影响，以得出浊点萃取-紫外可见分光光度法测定痕量锌离子的最优条件。
[0037]结果与讨论:
[0038](I)金属络合物最大吸收波长的确定
[0039]因为络合剂的不同金属螯合物的最大紫外吸收波长也是不同的。所以在实验条件的优化过程中，首先必须要确定金属螯合物的最大吸收波长。
[0040]按照Zn2+标准溶液浊点萃取和测定的方法，测定不同浓度的Zn2+与PAN形成的金属螯合物的吸收曲线，结果如图1所示，结果显示，在本实验中，锌离子富胶束相在549nm处吸光度是最大的，因此，接下来的所有紫外-可见分光光度测定中均选择在549nm测定溶液的吸光度(Abs.)。
[0041]先取由小到大不同体积的Zn2+标准工作溶液，按Zn2+标准溶液浊点萃取和测定的方法进行浊点萃取，然后在549nm处分别测定各溶解的吸光度，根据朗伯-比耳定律，吸光度与浓度成正比关系，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制出标准曲线并可计算出回归方程。然后取待测溶液按同法进行浊点萃取，同样在549nm处测定吸光度，根据回归方程及取样量，即可计算出待测溶液中Zn2+的含量。
[0042]⑵pH值对浊点萃取的影响
[0043]通过浊点萃取法将金属离子萃取出来，前提是需要合适的络合剂和金属离子形成疏水性的螯合物。然后疏水性螯合物被萃取到表面活性剂富集相中，萃取率是依赖于螯合物形成时溶液的酸碱性。因此，PH主要影响螯合物的形成进而影响Zn2+的萃取率。
[0044]按照Zn2+标准溶液浊点萃取和测定的方法，取10ng.Hir1Zn2+标准溶液进行浊点萃取，549nm作为吸收波长进行吸光度测定。通过调整NH4Cl-NH3.H2O缓冲溶液的pH为7?11，研究pH值对萃取率的影响。结果如图2所示，pH值在7?8.5范围内随着其值的增加，在pH = 8.5时萃取率达到最大。这是因为Zn2+与PAN必须在碱性条件下生成稳定的络合物；但是在过大的碱性条件下，金属离子容易水解成金属氢氧化物，所以随着继续增大PH值，锌离子的萃取率在逐渐下降。因此选择pH = 8.5作为最佳pH值。
[0045]⑶PAN用量对浊点萃取的影响
[0046]浊点萃取法与火焰原子吸收光谱法联用用于测定痕量的金属离子，主要是选择合适的络合剂。
[0047]按照Zn2+标准溶液浊点萃取和测定的方法，取10ng.Hir1Zn2+标准溶液进行浊点萃取，549nm作为吸收波长进行吸光度测定。通过调整4.0X10_3mol.Γ1的1-(2-吡啶偶氮)-2_萘酚(PAN)的体积为0.06?0.20mL，研究络合剂浓度对锌萃取率的影响。结果如图3所示，PAN体积在0.06?0.14mL范围内随着PAN浓度的增大，Zn2+萃取率是逐渐增大的。这是因为随着络合剂用量的增大，金属离子与络合剂形成的螯合物的量也在不断的增大，进而被萃取到表面活性剂富集相的金属离子在不断地增大，所以Zn2+萃取率在不断的增大。由图3可知PAN体积为0.14mL时，回收率达到最大。继续增大PAN的用量，其回收率在不断地下降。由于络合剂的疏水性要比所对应的金属螯合物的疏水性要强，过量的络合剂将金属螯合物中的金属离子置换出来进入主体水相，络合剂会被优先的萃取到表面活性剂富集相中，因此Zn2+萃取率在不断的减小。因此选择4.0X 10_3mol.Γ1的PAN体积为
0.14mL作为最佳条件。
[0048](4) TritonX-1OO浓度对浊点萃取的影响
[0049]在浊点萃取中，TritonX-1OO是一种较为普遍的表面活性剂。因为该表面活性剂具有高纯度的工业效应，低毒，价格便宜，浊点温度低及密度大等优势。高密度的表面活性剂富集相有利于相的分离。
[0050]按照Zn2+标准溶液浊点萃取和测定的方法，取10ng.Hir1Zn2+标准溶液进行浊点萃取，549nm作为吸收波长进行吸光度测定。通过调整5% (v/v) TritonX-1OO的加入体积，控制最终浓度为0.1?0.7% (v/v)，研究了表面活性剂浓度对浊点萃取的影响，通过控制不同浓度的TritonX-100(0.1?0.7%，v/v)对Zn2+萃取率的影响如图4所示。在TritonX-1OO浓度在0.1?0.4%范围内随着TritonX-1OO浓度的增大，Zn2+萃取率是逐渐增大的，这是因为随着表面活性剂用量的加大，金属螯合物被萃取到表面活性剂富集相中的量是逐渐增大的。表面活性剂相体积太小，萃取后难以分离，重现性与准确性降低。TritonX-1OO浓度为0.4% (v/v)时，Zn2+萃取率的萃取率最大，继续增大TritonX-1OO浓度，Zn2+萃取率基本上不变，因为随着Triton X-100浓度的继续增大，金属离子被完全萃取出来。表面活性剂用量过大，则相体积比会减小，富集倍数降低。因此选择加入0.8mL5%(v/v)TritonX-100,即控制其最终浓度为0.4% (v/v)作为最佳条件。
[0051](5)平衡时间对浊点萃取的影响
[0052]平衡时间对浊点萃取影响很大。为了在较短平衡时间内达到完全浊点萃取，按照Zn2+标准溶液浊点萃取和测定的方法，取10ng -mL^Zn2"标准溶液进行浊点萃取，549nm作为吸收波长进行吸光度测定。调整体系置于冰箱中在0°C左右保持的时间为15-50min，研究平衡时间对浊点萃取的影响。结果如图5所示,在平衡时间为30min时，Zn2+的萃取率达到最大，继续的延迟平衡时间，对萃取率的影响不大。因此，应该选择在尽可能短的平衡时间内使金属Zn2+萃取完全，选择平衡时间为30min作为最佳条件。
[0053](6) SDS浓度对浊点萃取的影响
[0054]实验发现仅使用TritonX-1OO作为表面活性剂萃取痕量的Zn2+，其萃取率是很低的，浊点温度高。但是加入适量的阴离子表面活性剂SDS，可使整个体系的浊点温度下降，在室温条件下即可将痕量的金属离子萃取出来。因为SDS被引入到TritonX-1OO溶液中，溶液的浊点温度下降到0°C，只需要放置在冰箱中即可将金属离子萃取出来。
[0055]按照Zn2+标准溶液浊点萃取和测定的方法，取10ng.Hir1Zn2+标准溶液进行浊点萃取，549nm作为吸收波长进行吸光度测定。调整I % SDS溶液的体积使SDS在体系中的终浓度为0.025-0.25%，研究SDS浓度对浊点萃取的影响。结果如图6所示，在SDS质量浓度为0.1 %时，Zn2+的萃取率达到最大，继续增大SDS的浓度，对萃取率的影响不大。因此，应该选择在尽少量的使用SDS使金属Zn2+萃取完全，选择SDS质量浓度为0.1 %作为最佳反应条件。
[0056](7)缓冲液用量对浊点萃取的影响
[0057]缓冲液对金属离子与络合剂形成的金属螯合物的影响很大。因此，尽可能使用较少量缓冲液使金属离子萃取完全。按照Zn2+标准溶液浊点萃取和测定的方法，取10ng.mL_1Zn2+标准溶液进行池点萃取,549nm作为吸收波长进行吸光度测定。调整pH =
8.5的NH4Cl-NH3.H2O缓冲溶液的体积为0.1-0.8mL，研究缓冲液用量对浊点萃取的影响。结果如图7所示，在缓冲液用量为时0.4mL时，Zn2+的萃取率达到最大，继续增大缓冲液的用量，锌离子的萃取率基本保持不变。因此，选择缓冲液用量为0.4mL作为最佳优化条件。
[0058](8)离心时间对浊点萃取的影响
[0059]为了使溶液快速分离为两相，需要借助外力即进行离心分离。随着离心时间的增长，锌离子的萃取率逐渐增大。当达到最大值时，随着时间的加长，萃取率是基本保持不变的。由于混和表面活性剂的浊点温度在o°c左右，因此增加离心时间其萃取率基本不变。
[0060]按照Zn2+标准溶液浊点萃取和测定的方法，取10ng.Hir1Zn2+标准溶液进行浊点萃取，549nm作为吸收波长进行吸光度测定。调整体系在4000r/min转速下离心的时间为2-20min，研究离心时间对浊点萃取的影响。结果如图8所示，在离心时间为1min时，Zn2+的萃取率达到最大，继续延长离心时间，锌离子的萃取率保持不变。因此，选择离心时间为1min作为最佳优化条件。
[0061](9)饱和NaCl用量对浊点萃取的影响
[0062]一般情况下，添加剂对浊点萃取的影响不大，但是很多添加剂像电解质和有机物对萃取率的影响是很大的，因为它对浊点温度的影响很大从而影响相的分离。TritonX-1OO的浊点温度是65°C，如果加入适量的无机电解质溶液如NaCl，它能够使胶束相的氢键断裂，使疏水基团的物质从水相中分离出来并且浊点温度也降低了。
[0063]按照Zn2+标准溶液浊点萃取和测定的方法，取10ng.Hir1Zn2+标准溶液进行浊点萃取，549nm作为吸收波长进行吸光度测定。调整饱和NaCl溶液的体积为0.4-2.0mL，研究饱和NaCl用量对浊点萃取的影响。结果如图9，随着NaCl用量的增大，萃取率是逐渐的增大的，在NaCl用量为1.2mL时，萃取率达到最大；继续增大NaCl用量，Zn2+的回收率是逐渐下降的，因为随着NaCl用量的加大，溶液的密度是逐渐增大的，表面活性剂不能与络合物大面积的接触，表面活性剂漂浮在上层，不利于胶束相萃取络合物。因此，选择NaCl用量为
1.2mL作为最佳优化条件。
[0064]通过上述内容得出浊点萃取-紫外可见分光光度法测定痕量锌离子的最佳方法为:将1.0mL待测样品溶液加入到15mL离心管中，依次加入0.4mLpH = 8.5的NH4Cl-NH3.H2O 缓冲溶液，0.14mL4.0X 10_3mol.L—1 的 1-(2-吡啶偶氮)_2_ 萘酚(PAN)，
0.8mL5 % (v/v)的 TritonX-1OO 溶液，1.0mLl % (w/w)的 SDS 溶液。然后加入 L2mL 饱和NaCl溶液，整个体系立刻变得浑浊。用二次蒸馏水定容至10mL，混匀后，置于冰箱中在0°C左右保持30min，然后转速在4000r/min离心1min使两相分离。然后通过倾倒法将上层的主体水相去除掉。在下层小体积的表面活性剂富集相中加入无水乙醇定容至3.0mL进行稀释，测定所得溶液在549nm的吸光度。通过作出的标准工作曲线，横坐标是Zn2+浓度，纵坐标是吸光度值。根据吸光度值来确定Zn2+浓度。
[0065]所述的待测样品为预处理的样品，样品包括水样、土样和血样；各样品的预处理方法如下:
[0066]水样的预处理:用0.45 μ m孔径的滤膜过滤河水(西河)、江水(嘉陵江)、自来水(实验室)样品，目的是除去水体中悬浮的微粒，将处理好的水溶液冷藏备用。
[0067]土样的预处理:
[0068]分别采集校区山地、花园和农田中的土样。通过风干、粗碎，然后经四分缩分法将采集的土壤进行缩分，缩分后的土壤样品在120°C恒温干燥箱内加热24h直至土壤烘干。用陶瓷研钵将土壤研细，挑出大块岩石和草根等杂物，再用100目分样筛进行过筛，得到的样品以备后面的分析所用。在样品处理之前，研钵，分样筛等所用的工具要用无水乙醇清洗干净，防止样品被污染，对测定的结果产生影响。
[0069]分别称取5.0g上述土壤,加入50mL0.1mol.L—1的盐酸溶液,搅拌均勻浸泡过夜，在振荡器中恒温振荡3h，静置过滤，所得滤液即为土壤样品溶液冷藏备用。
[0070]血样的预处理:称取5g全兔血样到10mL锥形瓶中，加入5mL浓HNO3浸泡过夜，再加入2mL30% H2O2，将锥形瓶放在控温加热板上在120°C条件下消解至溶液澄清透明，继续加热进行赶酸，待溶液体积在ImL左右时，将锥形瓶取下，将溶液定容至50mL容量瓶，冷藏备用。
[0071]进一步研究了该方法的分析性能，取10、40、200、500、100ng.TaU1Zn2+标准溶液，按浊点萃取-紫外可见分光光度法测定痕量锌离子的最佳方法进行浊点萃取，然后在549nm处分别测定各溶解的吸光度，计算得到的线性回归方程为A =
0.00291C+0.001914 (R2 = 0.9976)，A代表吸光度值，C代表锌离子的浓度，其线性范围是10?100ng.mL'通过浊点萃取法富集锌离子的富集倍数是38。该法的检测限(3 σ )是
3.3ng.mL—1，相对标准偏差(RSD)为 2.8% (Zn2+ 的质量浓度为 10ng.mL—1，η = 11)。
[0072]实施例2干扰离子对浊点萃取-紫外可见分光光度法测定痕量锌离子的方法的影响
[0073]根据实施例1的方法研究了几种常见的金属离子对锌离子萃取率的影响，结果由表I所示，正常水样、土样、血样中的金属离子对锌离子的萃取率基本不产生干扰。
[0074]表I干扰离子对浊点萃取的影响
[0075]
【权利要求】
1.一种浊点萃取-紫外可见分光光度法测定痕量锌离子的方法，其特征在于包括如下步骤:将待测样品加到包含NH4Cl-NH3.H2O缓冲溶液、1-(2-吡啶偶氮)_2_萘酚、TritonX-100,SDS和NaCl的浊点萃取体系中，混匀后，置于冰箱中平衡；平衡结束后再通过离心使两相分离，收集下层相，用无水乙醇稀释后，通过分光光度法测定锌离子的含量。
2.根据权利要求1所述的测定痕量锌离子的方法，其特征在于:所述的NH4Cl-NH3-H2O缓冲溶液的PH为8.5 ；pH = 8.5的NH4Cl-NH3 -H2O缓冲溶液在浊点萃取体系中的终浓度为4% (v/v)。
3.根据权利要求1所述的测定痕量锌离子的方法，其特征在于:所述的1-(2-吡啶偶氮)-2_萘酚在浊点萃取体系中的终浓度为5.6X 10_5mol.L'
4.根据权利要求1所述的测定痕量锌离子的方法，其特征在于:所述的TritonX-1OO在浊点萃取体系中的终浓度为0.4% (ν/ν) ο
5.根据权利要求1所述的测定痕量锌离子的方法，其特征在于:所述的SDS在浊点萃取体系中的终浓度为0.1% (w/w)。
6.根据权利要求1所述的测定痕量锌离子的方法，其特征在于:所述的NaCl在浊点萃取体系中的终浓度按饱和NaCl溶液计为12% (v/v)。
7.根据权利要求1所述的测定痕量锌离子的方法，其特征在于:所述的平衡的温度为0°C，平衡的时间为30min。
8.根据权利要求1所述的测定痕量锌离子的方法，其特征在于:所述的离心的条件为4000r/min 离心1min0
9.根据权利要求1所述的测定痕量锌离子的方法，其特征在于:所述的分光光度法的吸收波长为549nm。
10.根据权利要求1所述的测定痕量锌离子的方法，其特征在于包括如下步骤:将1.0mL待测样品溶液加入到15mL离心管中，依次加入0.4mLpH = 8.5的NH4Cl-NH3.H2O缓冲溶液，0.14mL4.0X 10_3mol.L-1 的 1-(2-吡啶偶氮)_2_ 萘酚，0.8mL5 % (v/v)的TritonX-1OO溶液，1.0mLl % (w/w)的SDS溶液,然后加入1.2mL饱和NaCl溶液,用二次蒸馏水定容至10mL，混匀后，置于冰箱中在0°C保持30min，再在4000r/min离心1min使两相分离；通过倾倒法将上层的主体水相去除掉，在下层小体积的表面活性剂富集相中加入无水乙醇定容至3.0mL进行稀释，测定所得溶液在549nm的吸光度；通过作出的标准工作曲线，横坐标是Zn2+浓度，纵坐标是吸光度值，根据吸光度值来确定Zn2+浓度。
【文档编号】G01N21/31GK104198412SQ201410449233
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年9月4日 优先权日:2014年9月4日
【发明者】杨秀培, 杨晓萃, 王修海, 谭志敬, 李固, 贾智慧 申请人:西华师范大学