液相色谱搭载vwd检测器测定水果中糖组分的方法
【专利摘要】本发明公开了一种液相色谱搭载VWD检测器测定水果中糖组分的方法，色谱条件为：检测器：VWD检测器；色谱柱：CARBOSepCHO-620，Ca型，6.5mm×300mm×10um；流动相：超纯水；流速：0.5ml/min；波长：190nm；柱温：80℃；时间：30min。本发明的液相色谱搭载VWD检测器测定水果中糖组分的方法，采用VWD检测器检测，并采用截止波长只有190nm的超纯水作为样品溶剂和流动相，而同时波长采用190nm，能有效的分离水果果肉中的多种糖，克服了传统的认为液相色谱搭载VWD检测器不适用于直接进行糖类物质检测的技术偏见，成本低廉，操作简单，灵敏度高，测定结果重复性好，准确度高。本发明确定的色谱条件可用于直接分离测定各种水果中的糖组分。
【专利说明】液相色谱搭载VWD检测器测定水果中糖组分的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及液相色谱搭载VWD检测器测定水果中糖组分的方法，属于化学工业中 的化学分析及仪器分析【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 水果中含多种糖分，结构复杂且多为异构体，结构差异性小，采用常规方法对其分 离鉴定比较困难。加之单糖没有发色基团，紫外吸收微弱甚至无，而且在通常情况下为电 中性。因此植物组织中糖检测广泛应用的高效液相色谱法（HPLC)，通常需要先进行衍生 化，使糖类组分具有UV吸收、荧光特性或其它一些可测定的物理化学性质，再使用选择性 检测器如紫外检测器、荧光检测器等进行检测，但这样处理步骤复杂，且会导致不稳定基 团的分解，造成结果的偏差。目前常采用液相色谱搭载通用型检测器，如示差折光检测器 (HPLC-RID)测定水果中糖组分，这样样品不需衍生化处理，可以直接测得糖分。但是相较紫 外检测器而言，示差折光检测器（RID)易受外界环境干扰，对温度变化非常敏感，难以平衡， 流动相的波动、洗脱液比的变化等都会明显影响折射率，灵敏度也不高。
[0003] 可变波长检测器（VWD)是紫外检测器的一种，几乎所有的HPLC都配有这种检测 器。VWD灵敏度和选择性高，对温度、流动相的波动和组成的变化不甚敏感；检测限可达 l〇ng。液相色谱搭载可变波长检测器（HPLC-VWD)具有良好的光学性能，在预设的波长范 围内检测结果灵敏、准确，广泛用于对大多数有紫外吸收的化合物的检测。然而本领域技 术人员普遍认为VWD不适用于糖类物质的检测，这是因为糖类特别是葡萄糖等物质吸光度 极其微弱，需要选很低的波长区间进行检测，而常用测定糖类的色谱条件如选择的流动相 的截止波长都较高，会产生背景吸收；进一步地，有文献总结称选择性检测器无法对糖类组 分进行检测（吕良，陈霈.浅谈高效液相色谱仪检测器的发展与展望.计量与测试技术， 2008，35 (9):76-77 ;武开业，雷林，吕庆华.高效液相色谱仪检测器分类及应用.科技信 息，2010，13:789-791)，而VWD就是典型的选择性检测器。也就是说，一直存在VWD不适用 于检测糖类物质的技术偏见。仅见谢志刚等(谢志刚，李博，陈书军，彭秀兰，王莹，尹鸿萍， 奚涛.高效液相色谱法快速检测氨基葡萄糖含量.分析测试学报，2012, 31 (5):575-579) 利用HPLC-VWD直接测定硫酸氨基葡萄糖氯化钾胶囊中氨基葡萄糖的含量，氨基葡萄糖是 一种天然的氨基单糖，是葡萄糖中的一个羟基被氨基取代，多了一个N这样的元素，是直链 伯胺，具有胺的性质，因此该文献报道的采用氨基柱，但是，无需衍生化直接对氨基葡萄糖 进行测定的HPLC-VWD法对植物组织中广泛存在的、由C、H、0三元素构成的糖类物质，如蔗 糖、葡萄糖、果糖等的检测不具有通用性。总之，目前为止，尚无 HPLC-VWD用于直接检测水 果以及其它植物组织中各种糖类的记载。本发明拟建立一种HPLC-VWD法直接测定水果中 糖组分的方法。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种液相色谱搭载VWD检测器测定水果中糖组分的方法，该 方法能有效分离测定水果果肉中的多种糖类物质。
[0005] 为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：一种液相色谱搭载VWD检测器测定 水果中糖组分的方法，其步骤包括： a、 配制4种糖的混合标准溶液，绘制标准溶液曲线； b、 从水果果肉中提取糖配制样品溶液； c、 在色谱条件下对样品溶液进行高效液相色谱分析，并用VWD检测器进行检测； d、 将样品溶液的分析结果与标准曲线做比对，得出样品溶液中的糖含量； 其中高效液相色谱分析的色谱条件为： 检测器：VWD检测器； 色谱柱：CARB0S印 CH0-620，Ca 型，6.5 mmX300 mmXlO um; 流动相：超纯水； 流速：〇· 5 ml/min ; 波长：190 nm ; 柱温：80°C ; 时间：30min。
[0006] 进一步的，步骤b中从果肉中提取糖配制样品溶液的步骤为：称取lg果肉，加入7 ml 80%乙醇，避光超声波提取10 min, 4°C下10000 rpm离心10 min,取上清液定容到10ml ; 再吸取2ml到真空浓缩仪浓缩至干燥，用0. 5ml超纯水溶解制得样品溶液，经0. 22 mm有机 滤头过滤。
[0007] 进一步的，步骤a中配制4种糖的混合标准溶液的步骤为：分别准确称取1. 6g各 种糖的标准品，用超纯水溶解定容，制得浓度为160 g/L的标准溶液；分别移取1.00 ml各 标准溶液，混合并用超纯水逐级稀释，制得混合标准溶液。
[0008] 进一步的，所述糖包括蔗糖、葡萄糖、果糖和山梨醇。
[0009] 本发明的液相色谱搭载VWD检测器测定水果中糖组分的方法，采用VWD检测器检 测，并采用截止波长只有190nm的超纯水作为样品溶剂和流动相，而同时波长采用190nm， 能有效的分离检测水果果肉中的多种糖，而不需要将糖类物质先进行衍生化，克服了传统 的认为液相色谱搭载VWD检测器不适用于直接进行糖类物质检测的技术偏见，成本低廉， 操作简单，灵敏度高，测定结果重复性好，准确度高。本发明确定的色谱条件可用于直接分 离测定各种水果中的糖组分。
【专利附图】
【附图说明】
[0010] 图1为4种糖混合标准溶液的HPLC图，其中1.蔗糖；2.葡萄糖；3.果糖；4.山 梨醇。
[0011] 图2为桃'Big top'品种果肉样品中糖的HPLC图，其中1.蔗糖；2.葡萄糖；3.果 糖；4.山梨醇。
[0012] 图3为葡萄'巨玫瑰'品种果肉样品中酚类化合物的HPLC图，其中1.蔗糖；2.葡 萄糖；3.果糖。
[0013] 图4为苹果'红富士'品种1.蔗糖；2.葡萄糖；3.果糖；4.山梨醇。
[0014] 图5为香蕉'开策'品种1.蔗糖；2.葡萄糖；3.果糖；4.山梨醇。
[0015] 图6为梨'丰水'品种1.蔗糖；2.葡萄糖；3.果糖；4.山梨醇。
[0016] 下面结合附图对本发明的实施方式做进一步说明。
【具体实施方式】
[0017] 试剂与设备： 4种糖标准品包括蔗糖、葡萄糖、果糖、山梨醇，均购自Sigma公司，纯度彡98%。
[0018] 超声波清洗器，离心机，真空浓缩仪，Agilent高效液相色谱系统：1100系列，VWD (可变波长）检测器，CARB0S 印 CH0-620 (Ca 型，6.5 mmX300 mmXlO um)。
[0019] 实施例1 a、配制4种糖的混合标准溶液的步骤为：分别准确称取1. 6g各糖标准品，用超纯水溶 解定容，制得浓度为160 g/L的标准溶液；分别移取1. 00 ml各标准溶液，混合并用超纯水 逐级稀释，制得各级别混合标准溶液。
[0020] 取混合标准溶液经高效液相色谱分析得到标准溶液曲线，见图1，色谱条件为： 检测器：VWD (可变波长）检测器； 色谱柱：CARBOSep CH0-620 (Ca 型，6.5 mmX300 mmXlO um); 流动相：超纯水； '流速：〇· 5 ml/min ; 波长：190 nm ; 柱温：80°C ; 时间：30min。
[0021] b、称取lg 'Big top'桃品种果肉，加入7 ml 80%乙醇，避光超声波提取10 min, 4?下10000 rpm离心10 min,取上清液定容到10ml ;再吸取2ml进真空浓缩仪浓缩至干 燥，用〇. 5ml超纯水溶解制得样品溶液，经0. 22 mm有机滤头过滤。
[0022] c、对样品溶液进行高效液相色谱分析，进样量为5μ 1，得到样品溶液的色谱图，见 图2,色谱条件同标准曲线的色谱条件。
[0023] d、将样品溶液的色谱图与标准溶液曲线比对，得到桃果肉中各种糖的含量，见表 1，单位为g/L，即每L新鲜果肉中含有糖的含量。
[0024] 实施例2 准确称取lg '巨玫瑰'葡萄品种成熟果实果肉，样品制备过程和色谱条件同实施例1。 所得样品溶液的色谱图见图3,葡萄果肉中各种糖的含量见表1。
[0025] 实施例3 准确称取lg '红富士'苹果品种成熟果实果肉，样品制备过程和色谱条件同实施例1。 所得样品溶液的色谱图见图4,苹果果肉中各种糖的含量见表1。
[0026] 实施例4 准确称取lg '开策'香蕉品种成熟果实果肉，样品制备过程和色谱条件同实施例1。所 得样品溶液的色谱图见图5,香蕉果肉中各种糖的含量见表1。
[0027] 实施例5 准确称取lg '丰水'梨品种成熟果实果肉，样品制备过程和色谱条件同实施例1。所得 样品溶液的色谱图见图6,梨果肉中各种糖的含量见表1。
[0028] 表1 :本发明实施例1-5中各品种水果中糖含量测量结果
【权利要求】
1. 一种液相色谱搭载VWD检测器测定水果中糖组分的方法，其步骤包括： a、 配制4种糖的混合标准溶液，绘制标准溶液曲线； b、 从水果果肉中提取糖配制样品溶液； c、 在色谱条件下对样品溶液进行高效液相色谱分析，并用VWD检测器进行检测； d、 将样品溶液的分析结果与标准曲线做比对，得出样品溶液中的糖含量； 其中高效液相色谱分析的色谱条件为： 检测器：VWD检测器； 色谱柱：CARBOS印 CH0-620，Ca 型，6. 5 mmX300 mmX 10 um ; 流动相：超纯水； '流速：〇· 5 ml/min ; 波长：190 nm ; 柱温：80°C ; 时间：30min。
2. 根据权利要求1所述的液相色谱搭载VWD检测器测定水果中糖组分的方法，其特征 在于：步骤b中从果肉中提取糖配制样品溶液的步骤为：称取lg果肉，加入7 ml 80%乙醇， 避光超声波提取10 min, 4°C下10000 rpm离心10 min,取上清液定容到10ml ;再吸取2ml 到真空浓缩仪浓缩至干燥，用〇. 5ml超纯水溶解制得样品溶液，经0. 22 mm有机滤头过滤。
3. 根据权利要求2所述的液相色谱搭载VWD检测器测定水果中糖组分的方法，其特征 在于：步骤a中配制4种糖的混合标准溶液的步骤为：分别准确称取1.6g各种糖的标准品， 用超纯水溶解定容，制得浓度为160 g/L的标准溶液；分别移取1. 00 ml各标准溶液，混合 并用超纯水逐级稀释，制得混合标准溶液。
4. 根据权利要求3所述的液相色谱搭载VWD检测器测定水果中糖组分的方法，其特征 在于：所述糖包括蔗糖、葡萄糖、果糖和山梨醇。
【文档编号】G01N30/06GK104280472SQ201410548514
【公开日】2015年1月14日 申请日期:2014年10月16日 优先权日:2014年10月16日
【发明者】严娟, 沈志军, 马瑞娟, 蔡志翔, 张斌斌, 俞明亮 申请人:江苏省农业科学院