一种高效液相色谱法检测3-氨基-2-己内酰胺的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及氨基酸注射液的检测方法，特别是涉及一种高效液相色谱法检测 3-氨基-2-己内酰胺的方法。
【背景技术】
[0002] 氨基酸（amino acid)是含有氨基和羧基的一类有机化合物的通称，是生物功能大 分子蛋白质的基本组成单位，是构成动物营养所需蛋白质的基本物质，是含有碱性氨基和 酸性羧基的有机化合物。氨基酸注射液（Amino Acid Injection)，由18种氨基酸配制而成 的灭菌水溶液，用于蛋白质摄入不足、吸收障碍等氨基酸不能满足机体代谢需要的患者，亦 用于改善手术后病人的营养状况。静脉滴注，每次250~500ml，儿童35~50ml/kg。具有 促进人体蛋白质代谢正常，纠正负氮平衡，补充蛋白质，加快伤口愈合的作用。氨基酸输液 在能量供给充足的情况下，可进入组织细胞，参与蛋白质的合成代谢，获得正氮平衡，并生 成酶类、激素、抗体、结构蛋白等生理活性物质，促进组织愈合，恢复正常生理功能。本品可 致疹样过敏反应，一旦发生应停止用药。偶有恶心、呕吐、胸闷、心悸、发冷、发热或头痛等。 严重肝肾功能不全、肝昏迷、严重氮质血症、严重尿毒症患者及氨基酸代谢障碍者禁用。严 重酸中毒、充血型心力衰竭者慎用。注意事项：应严格控制滴注速度；本品系盐酸盐，大量 输入可能导致酸碱失衡；大量应用或并用电解质输液时，应注意电解质与酸碱平衡；用前 必须详细检查药液，如发现瓶身有破裂、漏气、变色、发霉、沉淀、变质等异常现象绝对不应 使用；本品打开后，不可贮存再使用。
[0003] 3_氨基-2-己内酰胺（3-Amin〇-2_azepanone)，另丨」名：DL- α -氨基-ε-己内酰 胺，CAS :671-42-1，MDL :MFCD00064475,化学式为 C6H12N2O,分子量为 128. 17,熔点 77°C，沸 点168~172°C。赖氨酸（lysine)，别名第一限制性氨基酸，化学式为C6H 14N2O2，分子量为 146. 19,为碱性氨基酸，是人体8种必需氨基酸之一，具有L-型和D-型两种同分异构体。 3_氨基-2-己内酰胺是赖氨酸的降解产物，通过精确检测氨基酸注射液中3-氨基-2-己 内酰胺的含量，可以严格控制氨基酸注射液的产品质量。但是目前检索未发现有采用高效 液相色谱法检测3-氨基-2-己内酰胺含量的方法。高效液相色谱法（HighPerformance LiquidChromatography，HPLC)又称"高压液相色谱"、"高速液相色谱"、"高分离度液相色 谱"、"近代柱色谱"等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压 输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相栗入装有 固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。 该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。
[0004] 申请号为201010513639. 1的中国专利申请公开了复方氨基酸注射液及其制备方 法、检测方法，该注射液由18种氨基酸、亚硫酸氢钠、木糖醇及水组成，同时本发明还公开 了复方氨基酸注射液（18AA)的制备方法，在保证产品质量的同时，具有节能、增效的特点； 本发明通过对精密度、检测限、定量限和线性范围等反复验证，确定了清洗验证简便快速可 靠的方法；并且该发明还根据离子色谱法原理，检测复方氨基酸注射液中抗氧剂亚硫酸氢 钠的残留量，以及亚硫酸氢钠降解产生的硫酸根离子，从而准确测定原料配比中投入的抗 氧剂量，并根据测定结果判断原料配比工艺的稳定性；该发明提供的复方氨基酸注射液检 测方法是一种在线衍生氨基酸含量测定方法，速度快，适合大生产的规模检验。但是该发明 不能在线检测氨基酸注射液中有机物比如3-氨基-2-己内酰胺的含量。
[0005] 申请号为CN201110023106. X的中国专利申请公开了 一种聚赖氨酸的检测方法， 该发明首先以标准溶液的扩散圈直径与聚赖氨酸浓度对数值计算出标准曲线，然后测定 样品溶液产生的扩散圈直径，从标准曲线上计算未知样品中聚赖氨酸的浓度。该发明可 通过调整检测条件分别可以达到快速检测发酵液中聚赖氨酸含量和高灵敏度检测食品中 聚赖氨酸含量的目的。但是该发明应用范围较窄。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种高效液相色谱法检测3-氨 基-2-己内酰胺的方法。
[0007] 本发明的目的通过以下技术方案来实现：一种高效液相色谱法检测3-氨基-2-己 内酰胺的方法，采用如下色谱条件：
[0008] 色谱柱：ODS柱；
[0009] 流动相A :磷酸二氢钾溶液；
[0010] 流动相B :甲醇、乙腈的水溶液；
[0011] 流速：0· 4 ~I. 2ml/min ;
[0012] 检测波长：100 ~300nm ;
[0013] 柱温：20 ~60 Γ;
[0014] 进样量：5 ~20 μ 1。
[0015] 所述检测波长为200nm，柱温为35°C，进样量为10 μ 1。
[0016] 所述流动相A为0. 01~0. 09mol/L的磷酸二氢钾溶液，所述流动相B为甲醇、乙 腈的混合水溶液，且甲醇、乙腈和水的体积比为1~5:1~5:1。
[0017] 所述的一种高效液相色谱法检测3-氨基-2-己内酰胺的方法，它包括以下步骤：
[0018] SI.流动相制备：
[0019] (1)称取磷酸二氢钾5. 44~48. 99g，加水稀释至4000ml，用磷酸调节pH至2~ 4,抽滤超声后得到流动相A ;
[0020] (2)配制甲醇、乙腈和水的体积比为1~5:1~5:1的溶液，摇匀得到流动相B ;
[0021] S2.对照品溶液制备：
[0022] (1)称取3-氨基-2-己内酰胺10~30mg加入到50ml容量瓶中，用流动相A溶解 并定容至容量瓶刻度线，摇匀后得到3-氨基-2-己内酰胺对照品储备液；
[0023] (2)量取3-氨基-2-己内酰胺对照品储备液Iml加入到100mL容量瓶中，加入流 动相A定容至容量瓶刻度线，摇匀后得到对照品溶液；
[0024] S3.供试品溶液制备：量取氨基酸注射液Iml加入到IOml容量瓶中，加水定容至 容量瓶刻度线，摇匀后得到供试品溶液；
[0025] S4.色谱检测：取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪，按照权利要求 1~4中任一项中所述的条件进行高效液相色谱分析。
[0026] 本发明具有以下有益效果：
[0027] (1)本发明能准确测定3-氨基-2-己内酰胺的含量，专属性好；
[0028] (2)本发明3-氨基-2-己内酰胺液相色谱峰面积与其浓度的回归方程为线性相 关，且其线性拟合较好，因此使用方便；
[0029] (3)本发明定量限重复性好，RSD(η = 6)为1. 86% ;
[0030] (4)本发明3-氨基-2-己内酰胺回收率高，平均回收率达到99. 42 % ;
[0031] (5)本发明溶液稳定性好，供试溶液于室温下放置36h后3-氨基-2-己内酰胺浓 度保持稳定，RSD为0. 54% ; 3-氨基-2-己内酰胺回收率保持稳定，RSD为0. 55% ;
[0032] (6)本发明耐用性好，在柱温、检测波长、流速发生细微改变时，测定出3-氨 基-2-己内酰胺的回收率与基本条件下测定结果相差很小。
【附图说明】
[0033] 图1是本发明的3-氨基-2-己内酰胺一元线性回归分析图；
[0034] 图2是本发明的对照品溶液液相色谱图。
【具体实施方式】
[0035] 下面结合实施例及附图对本发明做进一步的描述，本发明的保护范围不局限于以 下所述。
[0036] 实施例1 :一种高效液相色谱法检测3-氨基-2-己内酰胺的方法，它包括以下步 骤：
[0037] SI.流动相制备：
[0038] (1)称取磷酸二氢钾5. 44g，加水稀释至4000ml得到0· 01mol/L的磷酸二氢钾溶 液，用磷酸调节PH至2,抽滤超声后得到流动相A ;
[0039] (2)配制甲醇、乙腈和水的体积比为1:5:1的溶液，摇匀得到流动相B ;
[0040] S2.对照品溶液制备：
[0041] (1)称取3-氨基-2-己内酰胺IOmg加入到50ml容量瓶中，用流动相A溶解并定 容至容量瓶刻度线，摇匀后得到3-氨基-2-己内酰胺对照品储备液；
[0042] (2)量取3-氨基-2-己内酰胺对照品储备液Iml加入到100mL容量瓶中，加入流 动相A定容至容量瓶刻度线，摇匀后得到对照品溶液；
[0043] S3.供试品溶液制备：量取氨基酸注射液Iml加入到IOml容量瓶中，加水定容至 容量瓶刻度线，摇匀后得到供试品溶液；
[0044] S4.色谱检测：取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪进行分析。采用 的色谱条