件为：色谱柱：〇DS柱；流速：0. 4~I. 2ml/min ;检测波长：100nm ;柱温：20°C ;进 样量：5 μ 1〇
[0045] 实施例2 :-种高效液相色谱法检测3-氨基-2-己内酰胺的方法，它包括以下步 骤：
[0046] SI.流动相制备：
[0047] (1)称取磷酸二氢钾16. 33g，加水稀释至4000ml得到0· 03mol/L的磷酸二氢钾溶 液，用磷酸调节PH至2. 5,抽滤超声后得到流动相A ;
[0048] (2)配制甲醇、乙腈和水的体积比为2:4:1的溶液，摇匀得到流动相B;
[0049] S2.对照品洛液制备：
[0050] (1)称取3-氨基-2-己内酰胺20mg加入到50ml容量瓶中，用流动相A溶解并定 容至容量瓶刻度线，摇匀后得到3-氨基-2-己内酰胺对照品储备液；
[0051] (2)量取3-氨基-2-己内酰胺对照品储备液Iml加入到100mL容量瓶中，加入流 动相A定容至容量瓶刻度线，摇匀后得到对照品溶液；
[0052] S3.供试品溶液制备：量取氨基酸注射液Iml加入到IOml容量瓶中，加水定容至 容量瓶刻度线，摇匀后得到供试品溶液；
[0053] S4.色谱检测：取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪进行分析。采用 的色谱条件为：色谱柱：〇DS柱；流速：0. 4~I. 2ml/min ;检测波长：150nm ;柱温：30°C ;进 样量：10μ1。
[0054] 实施例3 :-种高效液相色谱法检测3-氨基-2-己内酰胺的方法，它包括以下步 骤：
[0055] SL流动相制备：
[0056] (1)称取磷酸二氢钾27. 22g，加水稀释至4000ml得到0· 05mol/L的磷酸二氢钾溶 液，用磷酸调节PH至3,抽滤超声后得到流动相A ;
[0057] (2)配制甲醇、乙腈和水的体积比为3:3:1的溶液，摇匀得到流动相B;
[0058] S2.对照品溶液制备：
[0059] (1)称取3-氨基-2-己内酰胺15mg加入到50ml容量瓶中，用流动相A溶解并定 容至容量瓶刻度线，摇匀后得到3-氨基-2-己内酰胺对照品储备液；
[0060] (2)量取3-氨基-2-己内酰胺对照品储备液Iml加入到100mL容量瓶中，加入流 动相A定容至容量瓶刻度线，摇匀后得到对照品溶液；
[0061] S3.供试品溶液制备：量取氨基酸注射液Iml加入到IOml容量瓶中，加水定容至 容量瓶刻度线，摇匀后得到供试品溶液；
[0062] S4.色谱检测：取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪进行分析。采用 的色谱条件为：色谱柱：〇DS柱；流速：0. 4~I. 2ml/min ;检测波长：200nm ;柱温：40°C ;进 样量：10μ1。
[0063] 实施例4 :一种高效液相色谱法检测3-氨基-2-己内酰胺的方法，它包括以下步 骤：
[0064] SI.流动相制备：
[0065] (1)称取磷酸二氢钾38. llg，加水稀释至4000ml得到0· 07mol/L的磷酸二氢钾溶 液，用磷酸调节PH至3. 5,抽滤超声后得到流动相A ;
[0066] (2)配制甲醇、乙腈和水的体积比为4:2:1的溶液，摇匀得到流动相B;
[0067] S2.对照品溶液制备：
[0068] (1)称取3-氨基-2-己内酰胺30mg加入到50ml容量瓶中，用流动相A溶解并定 容至容量瓶刻度线，摇匀后得到3-氨基-2-己内酰胺对照品储备液；
[0069] (2)量取3-氨基-2-己内酰胺对照品储备液Iml加入到100mL容量瓶中，加入流 动相A定容至容量瓶刻度线，摇匀后得到对照品溶液；
[0070] S3.供试品溶液制备：量取氨基酸注射液Iml加入到IOml容量瓶中，加水定容至 容量瓶刻度线，摇匀后得到供试品溶液；
[0071] S4.色谱检测：取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪进行分析。采用 的色谱条件为：色谱柱：〇DS柱；流速：0. 4~I. 2ml/min ;检测波长：250nm ;柱温：50°C ;进 样量：15 μ 1。
[0072] 实施例5 :-种高效液相色谱法检测3-氨基-2-己内酰胺的方法，它包括以下步 骤：
[0073] SI.流动相制备：
[0074] (1)称取磷酸二氢钾48. 99g，加水稀释至4000ml得到0. 09mol/L的磷酸二氢钾溶 液，用磷酸调节PH至4,抽滤超声后得到流动相A ;
[0075] (2)配制甲醇、乙腈和水的体积比为5:1:1的溶液，摇匀得到流动相B;
[0076] S2.对照品溶液制备：
[0077] (1)称取3-氨基-2-己内酰胺25mg加入到50ml容量瓶中，用流动相A溶解并定 容至容量瓶刻度线，摇匀后得到3-氨基-2-己内酰胺对照品储备液；
[0078] (2)量取3-氨基-2-己内酰胺对照品储备液Iml加入到100mL容量瓶中，加入流 动相A定容至容量瓶刻度线，摇匀后得到对照品溶液；
[0079] S3.供试品溶液制备：量取氨基酸注射液Iml加入到IOml容量瓶中，加水定容至 容量瓶刻度线，摇匀后得到供试品溶液；
[0080] S4.色谱检测：取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪进行分析。采用 的色谱条件为：色谱柱：〇DS柱；流速：0. 4~I. 2ml/min ;检测波长：300nm ;柱温：60°C ;进 样量：20μ1。
[0081] 各实施例中3-氨基-2-己内酰胺检测结果见表1。
[0082] 表1各实施例检测结果表
[0083]
[0085] 表1说明，实施例3条件下所得色谱峰的对称性最好，因此实施例3的色谱条件较 优。
[0086] 以下通过实验说明本发明的有益效果：
[0087] 1、方法专属性验证
[0088] (1)样品来源
[0089] 1号液：空白阴性溶液，按处方配制不含赖氨酸的溶液；
[0090] 2号液：氨基酸注射液，四川科伦药业股份有限公司试制样品。
[0091] (2)样品制备
[0092] ①标准：分别量取1号、2号溶液各Iml于IOml容量瓶中，用流动相A稀释至刻度， 即得。
[0093] ②氧化破坏：取1号、2号溶液各100mL加入30%过氧化氢溶液为0.1 ml后，分别 于室温下2h、室温下24h、80°C下2h。
[0094] ③碱破坏：取1号、2号溶液适量，用5mol/L氢氧化钠溶液调pH为12后，分别室 温24h，121°C灭菌2h，再用浓盐酸调pH为7. 0。
[0095] ④高温破坏：取1号、2号溶液适量，于121°C灭菌2h、4h。
[0096] ⑤酸破坏：取1号、2号溶液适量，用浓盐酸调pH为2后，分别室温放置24h、121°C 灭菌2h、4h，再用5mol/L氢氧化钠溶液调pH为7. 0。
[0097] ⑥光照破坏：取1号、2号溶液适量，于121°C下灭菌12min，于45001x光照箱内放 置10d，取0d、IOd样品测定。分取以上样品按拟定的色谱条件进样10 μ 1进行色谱分析，结 果见表2。
[0098] 表2强制破坏试验结果表
[0099]
[01OOJ
[0101] 注："n.a"表示未检出。
[0102] (3)试验结果表明：①供试品溶液（氨基酸注射液）在未降解条件下未有3-氨 基-2-己内酰胺杂质产生；②供试品溶液（氨基酸注射液）经过灭菌（121°C下12min)，在 光照破坏〇d、IOd后，3-氨基-2-己内酰胺含量基本不变，说明赖氨酸对光照不敏感；③供 试品溶液（氨基酸注射液）在高温、酸破坏、碱破坏条件下均产生3-氨基-2-己内酰胺， 且随着温度的升高3-氨基-2-己内酰胺含量呈上升趋势，而在三种条件下，在碱破坏条件 下产生的3-氨基-2-己内酰胺峰面积最大；④在氧化破坏条件下3-氨基-2-己内酰胺未 有破坏，说明赖氨酸对氧较稳定；⑤赖氨酸辅料空白溶液在各种破坏条件下均不干扰3-氨 基-2-己内酰胺的检测。因此，该方法专属性较好。
[0103] 2、线性方法学验证
[0104] (1)称取3-氨基-2-己内酰胺盐酸盐对照品13. 60mg置于25ml容量瓶中，用水溶 解并稀释至刻度，得混合对照品储备液，精密量取此储备液，按表3逐级稀释成不同浓度的 溶液，编号为1~12#，按拟定色谱条件，取样10 μ 1进行分析，3-氨基-2-己内酰胺峰面积 与浓度线性关系见图1，限度浓度100%的色谱图见图2 (保留时间为11. 460处对应的物质 为3-氨基-2-己内酰胺，保留时间为29. 085处对应的物质为2-哌啶酮），试验结果见表 4〇
[0105] 表3 3-氨基-2-己内酰胺线性关系考察结果表
[0106]
[0107] 表4 3-氨基-2-己内酰胺检测限、定量限和线性范围总结