一种海水鱼类精子染色的方法
【专利摘要】本发明涉及一种海水鱼类精子染色的方法，包括：(1)采集海水鱼类新鲜且活力高的精子，测量精子的pH值，配制甲醛溶液并调节甲醛溶液的pH值；将精子稀释，涂布在载玻片上；(2)待载玻片自然干燥后，先用吉姆萨染料平铺在载玻片上染色，海水冲洗自然干燥后再复染，染好后海水再次冲洗，冲洗完后将载玻片再次自然干燥；等到完全干燥后，再用瑞氏染料平铺在载玻片上染色，海水冲洗自然干燥后复染，自然干燥后即可。本发明运用此方法染色后精子头部无破裂，形态完整，背景清晰，效果明显，精子染色率高达99％。
【专利说明】一种海水鱼类精子染色的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于水产养殖领域，涉及到一种海水鱼类精子染色的方法。
【背景技术】
[0002]我国是一个海水养殖大国，在养殖生产中常常需要对海水鱼类进行催产繁育，而鱼类精子质量的好坏是繁育中非常重要的一个环节，直接影响胚胎受精率、孵化率和成活率等。为了解海水鱼类精子的质量，提高繁殖过程中的受精率、孵化率等指标，需要对其精子的生物学特性进行观察，记录精子形态，计算精子头径、鞭毛长度等数据。在对海水鱼类精子进行形态观察时，一般有两种方法，一种方法是对精子进行染色后显微镜下拍照，相关软件测量相应数据，但目前所用的染色方法为单一染料染色，且海水鱼和淡水鱼精子都采用相同的方法，缺少针对性，导致染色效果不佳，图片背景混杂，精子形态不清晰甚至变形；第二种方法是直接通过扫描电镜进行观察，但这种方法只能观察精子的外部形态，不能测量基本数据，且仪器价格昂贵，操作较为繁琐。
【发明内容】
[0003]本发明提供了一种海水鱼类精子染色的方法，该方法针对海水鱼类精子生物学特性，采用改进后的方法固定精子后用两种不同的染料分别染色一定的时间，海水冲洗后自然干燥，染色后的精子形态清晰，易于观察，背景无杂色，染色效果好。
[0004]本发明的一种海水鱼类精子染色的方法，包括:
[0005](I)采集海水鱼类新鲜且活力高的精子，测量精子的pH值，配制甲醛溶液并调节甲醛溶液的PH值；将精子稀释，涂布在载玻片上；
[0006](2)待载玻片自然干燥后，先用吉姆萨染料平铺在载玻片上染色10?20min，海水冲洗自然干燥后再复染5?lOmin，染好后海水再次冲洗，冲洗完后将载玻片再次自然干燥；等到完全干燥后，再用瑞氏染料平铺在载玻片上染色15?25min，海水冲洗自然干燥后复染5?lOmin，自然干燥后即可。
[0007]所述步骤(I)中精子活力高于90%。
[0008]所述步骤(I)中甲醛溶液浓度为4%，用天然海水配制。
[0009]所述步骤⑴中用1% HCl或NaOH溶液调节甲醛溶液的pH值。
[0010]所述步骤⑴中将精子稀释100倍。
[0011]所述步骤(I)中涂布载玻片的方法具体为:用吸管蘸取少量精子，滴一滴到载玻片的一端，再用胶头滴管滴一滴甲醛溶液到精子上，用注射器针头搅拌精子和甲醛的混合溶液，充分混匀；用另一块干净、边缘光滑的载玻片沿着30°角将精子与甲醛的混合液向前轻推，使精子均匀涂布在载玻片的表面。
_2] 有益.效果
[0013]本发明采用改进后的方法固定精子后用两种不同的染料分别染色一定的时间，海水冲洗后自然干燥，染色后精子头部无破裂，形态完整，背景清晰，易于观察，效果明显，精子染色率高达99%。
【具体实施方式】
[0014]下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
[0015]实施例1
[0016]在海水鱼类的繁殖季节，采集新鲜且活力高于90%的精子，用pH试纸测量精子的PH值，用天然海水配制4%的甲醛溶液，根据所测精子的pH值，用I % HCL或NaOH溶液调节甲醛的pH值，使甲醛溶液的pH值接近海水鱼类精子的pH值，避免用甲醛溶液固定精子时由于渗透压或PH的差异导致精子形态发生变化。用海水将精子稀释100倍，用吸管蘸取少量稀释后的精子，滴一滴到载玻片的一端，再用胶头滴管滴一滴用海水调配过pH的4%甲醛溶液到精子上，用注射器针头搅拌精子和甲醛的混合溶液，使其充分混匀。用另一块干净、边缘光滑的载玻片沿着30°角将精子与甲醛的混合液向前轻推，使精子均匀涂布在载玻片的表面。
[0017]先配好吉姆萨母液(0.5g吉姆萨、33ml甘油、33ml甲醇)，将NaH2PO4和K2HPO4按I: I配成混合溶液，再将混合液与吉姆萨母液按6:1配成吉姆萨染料。待载玻片自然干燥后，滴加染料平铺在载玻片上染色lOmin，海水冲洗自然干燥后再复染5min，染好后海水再次冲洗，冲洗完后将载玻片再次置于室内自然干燥。等到完全干燥后，再用配好的瑞氏染料(Ig瑞氏染料、500ml甲醇)平铺在载玻片上染色15min，海水冲洗自然干燥后复染5min，自然干燥后置显微镜下观察拍照。
[0018]运用此方法染色后精子头部无破裂，形态完整，背景清晰，效果明显，精子染色率闻达99 。
【权利要求】
1.一种海水鱼类精子染色的方法，包括: (1)采集海水鱼类新鲜且活力高的精子，测量精子的pH值，配制甲醛溶液并调节甲醛溶液的PH值；将精子稀释，涂布在载玻片上； (2)待载玻片自然干燥后，先用吉姆萨染料平铺在载玻片上染色10?20min，海水冲洗自然干燥后再复染5?lOmin，染好后海水再次冲洗，冲洗完后将载玻片再次自然干燥；等到完全干燥后，再用瑞氏染料平铺在载玻片上染色15?25min，海水冲洗自然干燥后复染5?lOmin，自然干燥后即可。
2.如权利要求1所述的一种海水鱼类精子染色的方法，其特征在于:所述步骤(I)中精子活力闻于90%。
3.如权利要求1所述的一种海水鱼类精子染色的方法，其特征在于:所述步骤(I)中甲醛溶液浓度为4%，用天然海水配制。
4.如权利要求1所述的一种海水鱼类精子染色的方法，其特征在于:所述步骤(I)中用I % HCl或NaOH溶液调节甲醛溶液的pH值。
5.如权利要求1所述的一种海水鱼类精子染色的方法，其特征在于:所述步骤(I)中将精子稀释100倍。
6.如权利要求1所述的一种海水鱼类精子染色的方法，其特征在于:所述步骤(I)中涂布载玻片的方法具体为:用吸管蘸取少量精子，滴一滴到载玻片的一端，再用胶头滴管滴一滴甲醛溶液到精子上，用注射器针头搅拌精子和甲醛的混合溶液，充分混匀；用另一块干净、边缘光滑的载玻片沿着30°角将精子与甲醛的混合液向前轻推，使精子均匀涂布在载玻片的表面。
【文档编号】G01N1/30GK104406834SQ201410612064
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年11月4日 优先权日:2014年11月4日
【发明者】黄晓荣, 章龙珍, 庄平, 赵峰, 刘鉴毅, 张涛, 宋超, 王妤, 杨刚 申请人:中国水产科学研究院东海水产研究所