本发明涉及中药技术领域，特别是一种小叶莲药材的薄层色谱鉴定方法及其应用。
背景技术：
中草药在我国药用历史悠久，是由复杂多样的化学成分组成的，这些结构多样的化学成分是其疗效的物质基础。通过系统而深入的中药材质量标准研究，建立符合中医药特点的现代质量评价体系可以有效控制中药材的质量，保证其临床安全有效。攻克中药质量分析与控制的难题，改进中药现有质量控制方法已成为药学科研工作者积极研究的课题。小叶莲为小檗科植物鬼臼的干燥成熟果实，具有调经活血，用于血瘀经闭，难产，死胎、胎盘不下，有很好的药用价值，但如何通过薄层色谱法对小叶莲药材进行鉴定，在2015版《中国药典》中，小叶莲质量标准中的薄层色谱鉴别法以鬼臼毒素为对照品进行定性分析，鬼臼毒素为鬼臼类植物（包括鬼臼属、桃儿七属、山荷叶属、八角莲属）所共有的活性成分，缺乏专属性。随着科学技术的发展和对小叶莲的进一步研究，特别是对小叶莲药材深入的化学成分研究发现，8,2´-二异戊烯基-3-甲氧基槲皮素不仅含量很高，而且分离制备方法简单，可以满足产品开发与药品质量控制的需求。截至目前8,2´-二异戊烯基-3-甲氧基槲皮素仅存在于小叶莲药材中，为最大限度地表征小叶莲所具有的丰富的化学信息（异戊烯基化黄酮类化合物和芳基萘内酯型木脂素），因此，采用薄层色谱鉴定方法仅对鬼臼毒素进行鉴定，已不能充分体现小叶莲药材中的化学信息，而且现有的薄层色谱鉴定不能对8,2´-二异戊烯基-3-甲氧基槲皮素和鬼臼毒素同时进行鉴定，那么，如何解决利用薄层色谱同时对8,2´-二异戊烯基-3-甲氧基槲皮素和鬼臼毒素进行检测，以保证小叶莲药材的质量是必须解决的技术问题。
技术实现要素：
针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种小叶莲药材的薄层色谱鉴定方法及其应用，可有效解决小叶莲药材的鉴定问题。本发明解决的技术方案是，由以下步骤实现：1）制备供试品溶液：取小叶莲药材粉末4.5-5.5g，加乙酸乙酯8-12ml，超声处理18-22min，滤过，滤液减压浓缩至0.9-1.1ml，作为供试品溶液；2）制备对照品溶液：取8,2´-二异戊烯基-3-甲氧基槲皮素和鬼臼毒素对照品，分别用乙酸乙酯溶解成每1ml含1.5mg的8,2´-二异戊烯基-3-甲氧基槲皮素溶液和每1ml含0.5mg的鬼臼毒素溶液，作为对照品溶液；3）薄层色谱测定：分别取上述两种溶液各5µl，点于同一硅胶GF254薄层色谱板上，以石油醚与乙酸乙酯体积比为3:2作为展开剂，展开，晾干，置254nm紫外灯下检视，当供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，再喷以体积浓度为10%的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，从而实现利用薄层色谱对小叶莲药材的鉴定。本发明方法操作简便、快速、稳定可靠、准确、专属性强、薄层色谱中各斑点分离效果好、有效用于小叶莲药材及提取物的鉴定，为小叶莲药材鉴定和进一步开发提供技术保障，经济和社会效益巨大。具体实施方式以下结合实施例对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。实施例11）制备供试品溶液：取小叶莲药材粉末5g，加乙酸乙酯10ml，超声处理20min，滤过，滤液减压浓缩至1ml，作为供试品溶液；2）制备对照品溶液：取8,2´-二异戊烯基-3-甲氧基槲皮素和鬼臼毒素对照品，分别用乙酸乙酯溶解成每1ml含1.5mg的8,2´-二异戊烯基-3-甲氧基槲皮素溶液和每1ml含0.5mg的鬼臼毒素溶液，作为对照品溶液；3）薄层色谱测定：分别取上述两种溶液各5µl，点于同一硅胶GF254薄层色谱板上，以石油醚与乙酸乙酯体积比为3:2作为展开剂，展开，晾干，置254nm紫外灯下检视，当供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，再喷以体积浓度为10%的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，从而实现利用薄层色谱对小叶莲药材的鉴定。实施例21）取采集自甘肃省碌曲县的小叶莲药材粉末5.08g，加乙酸乙酯10ml，超声处理20min，滤过，滤液减压浓缩至1ml，作为供试品溶液；2）另取8,2´-二异戊烯基-3-甲氧基槲皮素和鬼臼毒素对照品，分别加乙酸乙酯制成每1ml含1.5mg和每0.5ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；3）吸取上述两种溶液各5µl，分别点于同一硅胶GF254薄层色谱板上，以石油醚与乙酸乙酯体积比为3:2作为展开剂，展开，晾干，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，再喷以体积浓度为10%的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，从而实现利用薄层色谱对小叶莲药材的鉴定。实施例31）取采集自西藏林芝县的小叶莲药材粉末4.97g，加乙酸乙酯10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液减压浓缩至1ml，作为供试品溶液；2）另取8,2´-二异戊烯基-3-甲氧基槲皮素和鬼臼毒素对照品，分别加乙酸乙酯制成每1ml含1.5mg和每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；3）吸取上述两种溶液各5µl，分别点于同一硅胶GF254薄层色谱板上，以石油醚与乙酸乙酯体积比为3:2作为展开剂，展开，晾干，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，再喷以体积浓度为10%的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，从而实现利用薄层色谱对小叶莲药材的鉴定。实施例41）取采集自云南德钦县的小叶莲药材粉末5.05g，加乙酸乙酯10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液减压浓缩至1ml，作为供试品溶液；2）另取8,2´-二异戊烯基-3-甲氧基槲皮素和鬼臼毒素对照品，分别加乙酸乙酯制成每1ml含1.5mg和每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；3）吸取上述两种溶液各5µl，分别点于同一硅胶GF254薄层色谱板上，以石油醚与乙酸乙酯体积比为3:2作为展开剂，展开，晾干，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，再喷以体积浓度为10%的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，从而实现利用薄层色谱对小叶莲药材的鉴定。实施例51）取采集自四川省康定县的小叶莲药材粉末5.03g，加乙酸乙酯10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液减压浓缩至1ml，作为供试品溶液；2）另取8,2´-二异戊烯基-3-甲氧基槲皮素和鬼臼毒素对照品，分别加乙酸乙酯制成每1ml含1.5mg和每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；3）吸取上述两种溶液各5µl，分别点于同一硅胶GF254薄层色谱板上，以石油醚与乙酸乙酯体积比为3:2作为展开剂，展开，晾干，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，再喷以体积浓度为10%的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，从而实现利用薄层色谱对小叶莲药材的鉴定。本发明方法经实地应用和测试，与实际测试结果相一致，表明方法稳定可靠，不但可以用于小叶莲药材的鉴定，而且还可有效用于对小叶莲提取物的检测，所述的小叶莲提取物为小叶莲体积浓度60%以上甲醇提取物、或体积浓度60%以上乙醇提取物、或丙酮提取物、或二氯甲烷提取物。具体是：小叶莲甲醇提取物为小叶莲药材经10倍量的60%以上甲醇回流提取（或超声提取），得到甲醇提取物。小叶莲乙醇提取物为小叶莲药材经10倍量的60%以上乙醇（或超声提取），得到乙醇提取物。小叶莲丙酮提取物为小叶莲药材经10倍量的60%以上丙酮回流提取（或超声提取），得到丙酮提取物。小叶莲二氯甲烷提取物为小叶莲药材经10倍量的60%以上二氯甲烷回流提取（或超声提取），得到二氯甲烷提取物。上述提取物利用薄层色谱鉴定的方法是：取小叶莲提取物1g，加乙酸乙酯10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液减压浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取8,2´-二异戊烯基-3-甲氧基槲皮素和鬼臼毒素对照品，分别加乙酸乙酯制成每1ml含1.5mg和每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述两种溶液各5µl，分别点于同一硅胶GF254薄层色谱板上，以石油醚-乙酸乙酯（3:2，v/v）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(254nm)下检视，供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。再喷以10%(v/v)的硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。由上述可知，本发明提供了一种利用薄层色谱法同时鉴定小叶莲药材中异戊烯基化黄酮类化合物8,2´-二异戊烯基-3-甲氧基槲皮素和芳基萘内酯型木脂类化合物素鬼臼毒素的方法，该方法操作简便、快速、专属性强、薄层色谱中各斑点分离效果良好、可有效用于小叶莲药材及其提取物的质量鉴定，是申请人经科学研究、试验及对实践总结的创造性劳动结晶，与现有技术相比，本发明方法专属性强，建立了小叶莲药材中异戊烯基化黄酮类化合物8,2´-二异戊烯基-3-甲氧基槲皮素和芳基萘内酯型木脂类化合物鬼臼毒素同时鉴定的薄层色谱法；现有方法中薄层色谱展开剂为环己烷-水饱和正丁醇-甲酸（6.5:2.5:0.8）的上层溶液，展开剂涉及到三种溶剂且需要2次分层操作（时间为约为10min），展开时间为29min（10cm×10cm,展距为8cm），而本发明方法中薄层色谱展开剂为石油醚-乙酸乙酯（3:2），两种溶剂直接按体积比混合，避免了繁琐的萃取分层操作,展开时间为25min（10cm×10cm,展距为8cm）。在现有薄层色谱条件下，整个薄层鉴定色谱操作约为43分钟。在本发明薄层色谱条件下，整个薄层鉴定色谱操作约为29分钟。比原鉴定方法大大提高了工作效率，为有效控制小叶莲药材的质量，保证临床安全有效和更好的开发应用提供了技术保障，具有很强的实用性，开辟了小叶莲药材鉴定的新途径，经济和社会效益巨大。