面积归一化法测定西红花药材中西红花苷类成分的方法与流程

文档序号:12061416阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种面积归一化法测定西红花药材中西红花苷类成分的方法,其特征在于,包括步骤:

a.确定色谱条件;

b.制备对照品溶液:

混合对照品溶液:精密称取西红花苷-Ⅰ对照品和西红花苷-Ⅱ对照品,置于棕色量瓶中,用稀乙醇溶解并定容至刻度,得混合对照品溶液,摇匀,备用;

西红花苷-Ⅰ对照品溶液:精密称取西红花苷-Ⅰ对照品置棕色量瓶中,用稀乙醇溶解并定容至刻度,得西红花苷-Ⅰ对照品溶液;

c.制备供试品溶液:参照中国药典2015年版西红花项下,精密称取西红花样品粉末,置于棕色量瓶中,加稀乙醇40mL,冰浴超声处理20min,放置室温,加乙醇定容至刻度,摇匀,微孔滤膜过滤,取续滤液,得供试品溶液;

d.根据2015年版中国药典的外标法定量西红花苷-Ⅰ和苷-Ⅱ的含量;

e.一测多评法QMSA测定西红花苷-Ⅰ和苷-Ⅱ的含量;

f.紫外分光光度法测定总西红花苷的含量;

g.面积归一化法测定总西红花苷的含量。

2.如权利要求1所述的面积归一化法测定西红花药材中西红花苷类成分的方法,其特征在于,所述步骤a中,色谱条件为Ultimate XB C18色谱柱,色谱柱为250mm×4.6mm,5μm;柱温:30℃;流动相:水-甲醇,梯度洗脱,0-60min,甲醇:20%-100%;DAD检测器波长范围200-600nm,检测波长440nm,流速:1.0mL·min-1;进样量:10μL。

3.如权利要求1所述的面积归一化法测定西红花药材中西红花苷类成分的方法,其特征在于,所述步骤c中,所述冰浴超声为250W、40KHz处理20min。

4.如权利要求1所述的面积归一化法测定西红花药材中西红花苷类成分的方法,其特征在于,所述步骤c中,微孔滤膜的孔径为0.22μm。

5.如权利要求1所述的面积归一化法测定西红花药材中西红花苷类成分的方法,其特征在于,所述步骤d,进一步为,取步骤b中西红花苷-Ⅰ和苷-Ⅱ的混合对照品溶液1、2、4、8、10、20μL,按步骤a中色谱条件进样分析,测定峰面积,分别以西红花苷-Ⅰ和苷-Ⅱ质量浓度(X,μg)对其相应峰面积(Y)进行线性回归,得回归方程,精密量取步骤c中的供试品溶液10μL,注入液相色谱仪测定,相应峰面积代入回归方程计算苷-Ⅰ和苷-Ⅱ含量。

6.如权利要求1所述的面积归一化法测定西红花药材中西红花苷类成分的方法,其特征在于,所述步骤e,进一步为,取步骤b中混合对照品溶液,分别进样1、2、4、8、10、15、20μL,记录峰面积,应用多点校正法,以西红花苷-Ⅰ为内参物,计算西红花苷-Ⅰ对西红花苷-Ⅱ的相对校正因子fk/s,fk/s计算公式:fk/s=(Cs×Ak)/(Ck×As),待测成分(西红花苷-Ⅱ)质量浓度计算公式:Ck′=(Cs×Ak′)/(fk/s×As),

其中Cs为内参物(西红花苷-Ⅰ)质量浓度,As为内参物色谱峰峰面积,Ck为西红花苷-Ⅱ对照品质量浓度,Ak为西红花苷-Ⅱ对照品色谱峰峰面积,Ck′为西红花样品中西红花苷-Ⅱ质量浓度,Ak′为西红花样品中西红花苷-Ⅱ色谱峰峰面积。

7.如权利要求1所述的面积归一化法测定西红花药材中西红花苷类成分的方法,其特征在于,所述步骤f,进一步为,精密吸取西红花苷-Ⅰ对照品溶液0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mL置于10mL量瓶中,用稀乙醇稀释至刻度,以稀乙醇作空白对照,采用紫外-可见分光光度法,于440nm波长处测定吸光度,得标准曲线;精密吸取步骤c中的供试品溶液5mL,置50mL棕色量瓶中,用稀乙醇稀释至刻度,用可见分光光度法于440nm波长处测定吸光度,以西红花苷-Ⅰ为对照标准品,按标准曲线计算总西红花苷含量。

8.如权利要求1所述的面积归一化法测定西红花药材中西红花苷类成分的方法,其特征在于,所述步骤g,进一步为,称取西红花样品粉末约10mg,精密称定,置50mL棕色量瓶中,加稀乙醇40mL,冰浴超声:250W、40KHz处理20min,放置室温,加乙醇定容至刻度,摇匀,0.22μm微孔滤膜滤过,精密吸取续滤液及步骤b中对照品溶液各10μL,注入液相色谱仪测定,测定时间为不少于60分钟,同时进行质谱分析,质谱条件为:离子源:大气压电喷雾离子源(ESI);检测模式:正负离子;全扫描质核比(m/z):50-1200;干燥气温度:350℃,干燥气流量:12.0L·min-1,雾化气压力:35.0psi;毛细管电压:4.5kV;碰撞电压1.0V;进入质谱的流动相流速分流至0.4mL·min-1。以西红花苷-Ⅰ为对照,按C总苷=(C苷-Ⅰ×A总苷)/A苷-Ⅰ计算总西红花苷的含量,

其中A苷-Ⅰ为样品中西红花苷-Ⅰ色谱峰峰面积;A总苷为西红花样品440nm下12个西红花苷类色谱峰峰面积之和;C苷-Ⅰ为外标法测定的西红花样品中西红花苷-Ⅰ的质量浓度;C总苷为西红花样品中总西红花苷质量浓度。

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