一种核酸适配体及其在潜指纹显现中的应用的制作方法

本发明涉及一种核酸适配体及其在潜指纹显现中的应用。

背景技术：

指纹识别技术作为一种生物识别技术受到研究人员的极大关注，其中对于潜指纹的显现尤为重要。潜指纹不同于可见指纹和立体指纹，肉眼不可见，但却是案发现场最常见的一类指纹，因此对此类指纹的显现成为指纹工作者的最基础工作。目前已经有许多方法可以对潜指纹进行显现(显影)工作，比如粉末法、502熏显法、茚三酮染色法以及真空镀膜法等，但是这些方法仍然存在着灵敏度低，对某些疑难客体(表面)上指纹显现不适用，背景干扰大等缺点。因此，迫切需要提出新的更灵敏方法对不同客体上的潜指纹进行显现。

近年来，适配体(aptamer)在生物化学领域得到了广泛的应用。适配体是一种单链dna或rna，具有高度的选择性和吸附性，适配体在生物医学领域的疾病检验诊断及成像方面，已经逐渐成为一种重要技术，而在法庭科学领域尤其是指纹显现领域，适配体技术尚未得到应用。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种核酸适配体及其在潜指纹显现中的应用。

本发明提供了一种指纹显现的方法，包括如下步骤：将指纹显色试剂工作液加至待测指印上，反应；所述指纹显色试剂工作液由所述指纹显色试剂和溶剂组成；所述指纹显色试剂是对溶菌酶适配体进行荧光基团标记得到的。

所述反应的条件具体可为：37℃恒温静置反应1小时。

所述溶剂具体可为pbs缓冲液。所述pbs缓冲溶液的ph值为7.2-7.4。所述pbs缓冲溶液具体可为1×pbs缓冲液。

所述指纹显色试剂工作液中含有浓度为11.1od/l的指纹显色试剂。

所述反应在避光下进行。

所述指纹显色试剂是在溶菌酶适配体末端标记fam荧光基团得到的。

所述末端可为3’末端或5’末端。所述末端具体为5’末端。

所述溶菌酶适配体为序列表的序列1所示的单链dna分子。

所述方法还包括如下步骤：所述反应完成后，拍照，获得指纹图像。

所述方法还包括如下步骤：所述反应完成后，将待测指印上的指纹显色试剂工作液甩掉(也可使用pbs缓冲液洗脱一次)并室温放置至手印完全干燥，拍照，获得指纹图像。

以上任一所述拍照具体采用的拍照装置可为dcs4照相装置。

以上任一所述所述拍照是在如下参数下进行的：470nm激发光激发。

以上任一所述所述拍照是在如下参数下进行的：470nm激发光激发，用530nm长通滤色片滤除激发光。

以上任一所述所述拍照是在如下参数下进行的：470nm激发光激发，用530nm长通滤色片滤除激发光，采用1-3s曝光时间。

所述方法还包括如下步骤：“将指纹显色试剂工作液加至待测指印上”之前，用免疫组化笔将所述待测指印圈起。

所述方法还包括如下步骤：“将指纹显色试剂工作液加至待测指印上”之后，将承载有待测指印的客体采用石蜡封口膜密封并用锡箔纸包装，再进行所述反应。

本发明还保护一种指纹显色试剂，是对溶菌酶适配体进行荧光基团标记得到的。

所述指纹显色试剂是在溶菌酶适配体末端标记fam荧光基团得到的。

所述末端可为3’末端或5’末端。所述末端具体为5’末端。

所述溶菌酶适配体为序列表的序列1所示的单链dna分子。

本发明还保护溶菌酶适配体或所述指纹显色试剂在指纹显现中的应用。

所述溶菌酶适配体为序列表的序列1所示的单链dna分子。

本发明还保护一种用于指纹显现的系统，包括以上任一所述指纹显色试剂。

所述系统还包括免疫组化笔。

所述系统还包括记载有以上任一所述方法的说明书。

所述系统还包括拍照装置。

所述拍照装置可为dcs4照相装置。

本发明还保护一种获取指纹图像的系统，包括以上任一所述指纹显色试剂和拍照装置。

所述拍照装置可为dcs4照相装置。

所述系统还包括免疫组化笔。

所述系统还包括记载有以上任一所述方法的说明书。

溶菌酶是已知一种在人类汗液中也即指纹成分中广泛存在的多肽。本发明将绑定溶菌酶的适配体的5′端连接羧基荧光素(fam)作为指纹显色试剂(lysosomebindingaptamer-fam，lba-fam)。lba-fam对手印物质中的溶菌酶具有高度的选择性和结合性，其结合手印纹线后，其连接的荧光素在合适的光源激发下，能够发出明亮的荧光从而将手印显现出来。本发明提供的潜指纹显现方法具备如下优点：(1)灵敏度高；(2)具有高度选择性，只针对手印中的溶菌酶反应，不与背景物质反应；(3)与现有技术相比，本发明提供的技术方法适用于多种客体上的手印显现；(4)本方法所用试剂无毒害，对使用人员的健康安全没有潜在威胁。

附图说明

图1为nc膜上的新鲜手印显现效果。

图2为锡箔纸上的遗留时间为一周的手印显现效果。

图3为锡箔纸上的新鲜手印显现效果。

图4为瓷砖上的新鲜手印显现效果。

图5为载玻片上的新鲜手印显现效果。

图6为复印纸上的新鲜手印显现效果。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

1×pbs缓冲液(ph为7.2-7.4)：北京索莱宝科技有限公司。

免疫组化笔：北京索莱宝科技有限公司。

dcs4照相装置：英国foster-freeman公司生产，北京瑞源科技有限公司经销。

实施例1、指纹显色试剂的制备

指纹显色试剂为荧光标记的溶菌酶适配体。

溶菌酶适配体如下所示：

5'-atcagggctaaagagtgcagagttacttag-3'(序列表的序列1)。

在溶菌酶适配体的5′端采用fam荧光基团修饰，得到所述指纹显色试剂(lba-fam)。

实施例2、潜指纹显现方法的建立

一、制备lba-fam工作液

将1od的实施例1制备的指纹显色试剂(lba-fam)溶解于30μlpbs缓冲液，得到储存液。将10μl储存液加至30mlpbs缓冲液中，得到lba-fam工作液(工作液中lba-fam的浓度为11.1od/l)。

二、潜指纹显现

1、测试者分别在不同客体(载玻片、塑料、胶带粘面、复印纸、牛皮纸、卡片纸、铝箔、陶瓷制品、瓷砖、锡箔纸、nc和pvdf膜)上留手印。手印留待不同时间(24h或1周)后进行试验。

2、对步骤1留有手印的不同客体进行检测，依次按照如下步骤操作：

(1)在客体上使用免疫组化笔将手印圈起；用一次性滴管将步骤一制备的lba-fam工作液滴加到手印上面(至工作液完全覆盖手印即可)；

(2)将客体采用paraffin封口薄膜密封并用锡箔纸包装，37℃恒温放置1小时；

(3)将客体上的lba-fam工作液轻轻甩掉(也可使用pbs缓冲液洗脱一次)并室温放置至手印完全干燥；

(4)使用dcs4照相装置拍照，采用470nm激发光激发，用530nm长通滤色观察并拍照，一般采用较长曝光时间(1-3s)获得指纹图像。

部分结果如图1-图6所示。结果表明，lba-fam显现指纹效果具有高度专一性和灵敏性，适用于多种客体上手印显现，并且具有显现多种疑难客体上手印的潜力。

<110>公安部物证鉴定中心

<120>一种核酸适配体及其在潜指纹显现中的应用

<160>1

<210>1

<211>30

<212>dna

<213>人工序列

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<223>

<400>1

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