本发明属于生物体外诊断试剂制备领域。具体涉及一种冻干液配方及其应用。
背景技术：
酶联免疫吸附(elisa)作为国际公认的蛋白定量金标准，具有灵敏度高，特异性好等特点。其中标准品是elisa试剂盒构成的一个关键，标准品的保质期直接影响到试剂盒的货架期。目前elisa标准品的保存方法有甘油-20℃保存法和真空冷冻干燥法，此两种方法对蛋白的稳定性有一定的延长作用，但难以满足试剂盒长时间的保存需求。从实际的经验发现，不同蛋白对于同一配方的冻干液表现出来的保存效果不同。而市面上一般的试剂盒的保存时间为半年，令使用受到限制。
技术实现要素：
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种新的冻干液配方。由该冻干液配方制成的elisa标准品具有较长的保质期，尤其适用于猴细胞elisa标准品的制备。
本发明的上述目的通过如下方案予以实现：
一种冻干液配方，由以下按质量百分数计算的组分组成：
0.5～5％干酪素钠，1～10％甘露醇，0.05～0.5％聚吡咯烷酮k30，余量为浓度0.01mol/l的磷酸缓冲液。
在冻干粉剂中，现存通常有两种产品，一种是散的粉剂，一种是结合得相对紧密的粉剂，即冻干粉之间能形成一个良好的型状，通常是饼型。而前者比较容易获得，但在开盖时容易使冻干粉飘出，后者则需要在赋型剂等作用下经过配方的优化获得，并且可能出现塌陷等成型问题。
本发明中甘露醇、聚吡咯烷酮k30二者协同作用有助于蛋白的成膜，减少冻干粉在冻干后出现的挂壁现象，并且适量的k30显著提高冻干粉的成型率。采用本发明的冻干液配方进行冻干，能使冻干粉获得很好的成型效果，并且产品外观良好，不出现挂壁等不良现象。
磷酸缓冲液的ph值可以参考现有技术。最优选地，所述磷酸缓冲液的ph值为7.4。
最优选地，所述干酪素钠的质量分数最优选为1％。
最优选地，所述甘露醇的质量分数最优选为5％。
所述冻干液配方在制备含有蛋白的冻干粉中的应用。
现有技术中，为了确保冻干效果良好，通常不会在冻干瓶(西林瓶)中添加过多的蛋白溶液，因为如果溶液体积过多，液面高度过大，会使冻干变得困难，冻干效果变差。而本发明的优选配方，则是可以在液面较高时，依然保持较好的冻干效果，优选地，所述冻干液适用于容积为3ml的西林瓶，每瓶加入1ml的由所述冻干液配成的蛋白溶液。
本发明的冻干液对多种细胞因子都有很好的冻干效果。现有的elisa试剂盒产品中，猴细胞因子的产品甚少，所以对其保存方式和保存周期的研究并不多。而本发明的冻干液适用于猴细胞因子标准品的制备，其保质期可以达到两年。
优选地，所述猴细胞因子为猴细胞因子il-12或23。
本发明所述冻干液的制备方法为，将干酪素钠、甘露醇、聚吡咯烷酮k30溶解于磷酸缓冲液中得到。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明通过对冻干液配方的合理搭配，利用甘露醇、聚吡咯烷酮k30二者协同作用有助于蛋白的成膜，减少冻干粉在冻干后出现的挂壁现象，提高冻干粉的成型率。采用本发明的冻干液配方进行冻干，能获得很好的成型效果，并且产品外观良好，不出现挂壁等不良现象。本冻干液对多种细胞因子都有很好的冻干效果，尤其是对猴细胞因子有很好的冻干效果。采用本发明的冻干液制成的猴细胞因子标准品保质期可以达到两年。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的解释说明，但具体实施例并不对本发明作任何限定。除非特别说明，实施例中，所涉及的试剂、方法均为本领域常用的试剂和方法。
实施例1
冻干液制备：1％质量分数的干酪素钠，5％质量分数的甘露醇，0.1％质量分数的聚吡咯烷酮k30(pvpk30)溶解于0.01mol/lph为7.4的磷酸缓冲液(pbs)。
其余实施例和对比例的配方见表1
表1
猴细胞因子il-12/23elisa标准品的制备，包括如下步骤：
s1.对冷冻干燥的相关设备，例如西林瓶、架子、托盘进行预冷，预冷至4℃；
s2.将猴细胞因子il-12/23标准蛋白用水溶解后，配制成母液，母液采用各实施例或对比例的冻干液稀释至目标浓度，得到标准浓度蛋白溶液；
s3.将s2.得到的标准浓度蛋白溶液分装至s1.已预冷的容积为3ml西林瓶中，每瓶内装入1ml蛋白溶液，轻盖上盖子；
s4.将s3.盛有蛋白溶液的西林瓶放置在真空冻干机中至完全干燥，得到猴细胞因子il-12/23elisa标准品。其中实施例1、4、5为猴细胞因子il-12，实施例2、3为猴细胞因子il-23。对比例1～5均为猴细胞因子il-12。
本实施例1～5所得猴细胞因子il-12/23elisa标准品经过37℃加速老化试验，可以放置14天，采用elisa实验测试其活性，损失率小于1％，根据阿伦尼乌斯公式结论，采用本发明制备的猴细胞因子il-12/23elisa标准品用于elisa试剂盒4℃可保存2年以上。
冻干前后蛋白活性测试：
采用elisa法对实施例1制备的猴细胞因子il-12/23elisa标准品的蛋白活性进行测试，每一个浓度测试5个样品，对比冻干后，加速老化14天与冻干前活性比值。详细结果见表2
表2
比较实施例与对比例得到的猴细胞因子elisa标准品的外观、活性损失率和成型率，结果如表3所示：
表3
从实施例与对比例1、2、3、4、5对比可以看出，当不选用本发明所述的配方时，冻干粉的产品容易存在挂壁现象，外观不佳，并且成型率出现明显下降，冻干过程的活性损失率升高，保存时间缩短。
人细胞因子il-12/23elisa标准品的制备，包括如下步骤：
s1.对冷冻干燥的相关设备，例如西林瓶、架子、托盘进行预冷，预冷至4℃；
s2.将人细胞因子il-12/23标准蛋白用水溶解后，配制成母液，母液采用各实施例或对比例的冻干液稀释至目标浓度，得到标准浓度蛋白溶液；
s3.将s2.得到的标准浓度蛋白溶液分装至s1.已预冷的容积为3ml西林瓶中，每瓶内装入1ml蛋白溶液，轻盖上盖子；
s4.将s3.盛有蛋白溶液的西林瓶放置在真空冻干机中至完全干燥，得到人细胞因子il-12/23elisa标准品。其中实施例1、4、5为人细胞因子il-12，实施例2、3为人细胞因子il-23。对比例1～5均为人细胞因子il-12。
比较实施例与对比例得到的人细胞因子elisa标准品的外观、活性损失率和成型率，结果如表4所示：
表4
可以看出，本冻干液也适用于其它细胞因子标准品的制备。