本发明涉及蜂产品质量控制领域，具体地，本发明涉及保健食品中假蜂胶的定性定量分析方法。
背景技术：
蜂胶是蜜蜂从植物的芽苞、树皮或茎干伤口采集的树脂等分泌物，与部分蜂蜡和花粉以及蜜蜂上颌腺的分泌物混合而成的芳香黏性固体。蜂胶化学成分复杂，含有丰富的黄酮类、萜烯类、酚酸类等生物活性物质。现代大量的生理药理学研究表明，蜂胶具有抗菌、抗病毒、抗氧化、防衰老、抗肿瘤、消炎、增强机体免疫力、降低血糖血脂、镇静、麻醉等多种生物学活性。因此，近十几年来蜂胶成为蜂产品研究开发的热点，越来越受到食品、保健品、医药、日化、农牧业及广大人民群众的关注。
蜂胶由于其广泛的生物学活性而成为国内外研究与开发的热点。蜂胶制品如雨后春笋般涌现出来，产品质量出现良莠不齐，以次充好、以假当真的个案屡见不鲜。有人将杨树叶、芽等粉末或者杨树分泌物搀入蜂胶中，或者直接用杨树芽提取物来假冒蜂胶提取物，所得到的劣质蜂胶在颜色、气味、形状上都与真蜂胶十分相似，给蜂胶的鉴别带来了困难。
目前的仪器检测大都基于对蜂胶中黄酮的检测。所谓的“黄酮”，在《蜂胶国家标准》中统称为“总黄酮”。按照国家标准规定，“总黄酮”含量是检验蜂胶的一项重要指标。蜂胶之所以有良好的保健效果是因为蜂胶中含有大量的黄酮类物质，但这种物质在人体内不能合成，只能从饮食中摄取。但是中央电视台在2010年11月份曝光了“销售假蜂胶”的节目，引起了社会轰动，其中提到，造假者为了产品能够检测合格，会偷偷往假蜂胶里加一些神秘的原料，其中一种黄色的粉末是槲皮素，此外还有芦丁。这是因为，槲皮素和芦丁都是人工提取的黄酮类物质，添加在“假蜂胶”中，用以提高其总黄酮的含量，以次充好，蒙混过关。由此看，仅仅对蜂胶中黄酮的量进行检测难以将假蜂胶鉴别出来。
因此，针对上述问题，本发明提供一种保健食品中假蜂胶的定性定量分析方法，其具有灵敏、简易、准确度高。
技术实现要素：
针对上述问题，本发明提供保健食品中假蜂胶的定性定量分析方法，至少包括以下步骤：
s1：将原料蜂胶置于15℃以下进行粉碎制得碎蜂胶，加入体积浓度为95％的乙醇，搅拌溶解，制得蜂胶乙醇液；
s2：用目数为800-1000目的滤器进行过滤蜂胶乙醇液而制得蜂胶滤液，再将蜂胶滤液通过滤膜得精制蜂胶液，然后将精制蜂胶液减压浓缩干，得到精制蜂胶；
s3：定性分析：取精制蜂胶与去离子水进行混合溶解，配制蜂胶溶液，然后加入显色液，观察颜色变化；
s4：定量分析：通过液相色谱检测法检测精制蜂胶，通过标准品对照得到保健食品中假蜂胶的定量分析；
其中，所述滤膜的制备原料包括葡聚糖、八(氨基苯基三氧硅烷)。
在一种实施方式中，所述体积浓度为95％的乙醇与所述原料蜂胶的重量比为(4-8)：1。
在一种实施方式中，所述显色液包括缩二脲显色液、茚三酮显色液、考马斯亮蓝g250显色液中一种。
在一种实施方式中，所述精制蜂胶与所述去离子水的重量比为1：(5-10)。
在一种实施方式中，所述滤膜的制备原料中所述葡聚糖与所述八(氨基苯基三氧硅烷)的重量比为1：(0.05-0.2)。
在一种实施方式中，所述滤膜的制备原料中所述葡聚糖与所述八(氨基苯基三氧硅烷)的重量比为1：0.16。
在一种实施方式中，所述液相色谱检测法的测试参数：
色谱柱：色谱柱采用改性聚酰胺为填料；流动相：以甲醇为流动相a，以质量分数为15％的磷酸溶液为流动相b，进行梯度洗脱：洗脱程序为：0-25min，甲醇20-40％；25-55min，甲醇40-55％；55-65min，甲醇55％；65-80min，甲醇55-75％；80-90min，甲醇75-20％；检测波长：268nm；流速：1ml/min；柱温：35℃。
在一种实施方式中，所述改性聚酰胺为聚酰胺接枝七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精。
在一种实施方式中，所述改性聚酰胺中聚酰胺接枝七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精的接枝率为1-5％。
在一种实施方式中，所述标准品至少包括芦丁、槲皮素、白杨素、高良姜素、p-香豆酸、阿魏酸中一种或多种。
参考以下详细说明更易于理解本申请的上述以及其他特征、方面和优点。
具体实施方式
参选以下本发明的优选实施方法的详述以及包括的实施例可更容易地理解本发明的内容。除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。
如本文所用术语“由…制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
连接词“由…组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由…组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。
当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1至5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1至4”、“1至3”、“1至2”、“1至2和4至5”、“1至3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。
单数形式包括复数讨论对象，除非上下文中另外清楚地指明。“任选的”或者“任意一种”是指其后描述的事项或事件可以发生或不发生，而且该描述包括事件发生的情形和事件不发生的情形。
说明书和权利要求书中的近似用语用来修饰数量，表示本发明并不限定于该具体数量，还包括与该数量接近的可接受的而不会导致相关基本功能的改变的修正的部分。相应的，用“大约”、“约”等修饰一个数值，意为本发明不限于该精确数值。在某些例子中，近似用语可能对应于测量数值的仪器的精度。在本申请说明书和权利要求书中，范围限定可以组合和/或互换，如果没有另外说明这些范围包括其间所含有的所有子范围。
此外，本发明要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显旨指单数形式。
“聚合物”意指通过聚合相同或不同类型的单体所制备的聚合化合物。通用术语“聚合物”包含术语“均聚物”、“共聚物”、“三元共聚物”与“共聚体”。“共聚体”意指通过聚合至少两种不同单体制备的聚合物。通用术语“共聚体”包括术语“共聚物”(其一般用以指由两种不同单体制备的聚合物)与术语“三元共聚物”(其一般用以指由三种不同单体制备的聚合物)。其亦包含通过聚合更多种单体而制造的聚合物。“共混物”意指两种或两种以上聚合物通过物理的或化学的方法共同混合而形成的聚合物。
为了解决上述技术问题，本发明提供保健食品中假蜂胶的定性定量分析方法，至少包括以下步骤：
s1：将原料蜂胶置于15℃以下进行粉碎制得碎蜂胶，加入体积浓度为95％的乙醇，搅拌溶解，制得蜂胶乙醇液；
s2：用目数为800-1000目的滤器进行过滤蜂胶乙醇液而制得蜂胶滤液，再将蜂胶滤液通过滤膜得精制蜂胶液，然后将精制蜂胶液减压浓缩干，得到精制蜂胶；
s3：定性分析：取精制蜂胶与去离子水进行混合溶解，配制蜂胶溶液，然后加入显色液，观察颜色变化；
s4：定量分析：通过液相色谱检测法检测精制蜂胶，通过标准品对照得到保健食品中假蜂胶的定量分析；
其中，所述滤膜的制备原料包括葡聚糖、八(氨基苯基三氧硅烷)。
蜂胶的评价指标可分解为感官指标、理化指标、安全指标三部分。其品质与内部的有机化学成分有着密切的关系，黄酮和酚类化合物是蜂胶中主要生物活性物质。《蜂胶》国家标准明确规定了蜂胶总黄酮含量指标：即原料蜂胶总黄酮含量分别为一级品≥15％，二级品≥8％，蜂胶乙醇提取物总黄酮含量一级品≥20％，二级品≥17％。
在一种实施方式中，所述体积浓度为95％的乙醇与所述原料蜂胶的重量比为(4-8)：1；优选地，所述体积浓度为95％的乙醇与所述原料蜂胶的重量比为6：1。
在一种实施方式中，所述显色液包括缩二脲显色液、茚三酮显色液、考马斯亮蓝g250显色液中一种。
蜂胶中除了含有黄酮类化合物之外，生物酶也是组成蜂胶广泛生物活性的重要物质。而假蜂胶是采用植物的枝条、叶芽及愈伤组织直接提炼熬制，没有经过与蜜蜂上颚腺、蜡腺等的分泌物同少量花粉酿制的生化过程。因此生物酶蛋白的存在与否，存量水平是区别真假蜂胶的特征指标。
比色判定：
1)、缩二脲比色反应中，真蜂胶的显色为黄绿色，显色不是黄绿色判定为假蜂胶，显色与黄绿色深浅不一致的蜂胶判定为掺假蜂胶；
2)、茚三酮比色反应中，真蜂胶的显色为紫红色，显色不是紫红色判定为假蜂胶，显色与紫红色深浅不一致判定为掺假蜂胶；
3)、考马斯亮蓝g250比色反应中，真蜂胶的显色为墨绿色，显色不是墨绿色判定为假蜂胶，显色与墨绿色深浅不一致判定为掺假蜂胶。
在一种实施方式中，所述精制蜂胶与所述去离子水的重量比为1：(5-10)；优选地，所述精制蜂胶与所述去离子水的重量比为1：6。
在一种实施方式中，所述滤膜的制备原料中所述葡聚糖与所述八(氨基苯基三氧硅烷)的重量比为1：(0.05-0.2)；优选地，所述滤膜的制备原料中所述葡聚糖与所述八(氨基苯基三氧硅烷)(cas：518359-82-5)的重量比为1：0.16。
所述滤膜的制备方法如下：
(1)多孔葡聚糖凝胶制备：将葡聚糖凝胶用蒸馏水浸泡24h，用蒸馏水充分洗涤至中性，过滤，置于-12～-15℃迅速冷冻5h，取出后放入冷冻干燥箱内，冷冻干燥24h，得到多孔葡聚糖凝胶；
(2)酰氯化多孔葡聚糖凝胶：在反应器加入二氯甲烷、草酰氯、多孔葡聚糖凝胶，升温至30℃，保温反应3h，反应完毕后减压浓缩干，取出后放真空干燥箱中干燥，得到酰氯化多孔葡聚糖；所述二氯甲烷与所述草酰氯、所述多孔葡聚糖凝胶的重量比为10：1：0.7；
(3)向反应器中加入乙腈、酰氯化多孔葡聚糖、八(氨基苯基三氧硅烷)，升温至80℃，保温反应14h，过滤，脱泡，得到制膜液；所述乙腈与所述酰氯化多孔葡聚糖重量比为6：1；将聚酯无纺布作为支撑层安装在刮膜机上，调整好刮刀的厚度和线速控制仪的走布速度，将制备好的制膜液缓慢平稳地倒入制膜液储存槽中，开动刮膜机，制膜液被涂刮在聚酯无纺布上，经过10cm的空气暴露距离后，浸入到6℃的恒温凝固浴中，后经过漂洗槽充分漂洗，得到滤膜。
葡聚糖凝胶是具有多孔性三度空间网状结构的高分子化合物，属于软性凝胶，其微孔能吸入大量溶剂，比表面积大，葡聚糖含有亲水性，还带有丰富的配位基；葡聚糖凝胶在水中充分浸泡活化、冷冻干燥、获得多孔葡聚糖凝胶，然后接枝八(氨基苯基三氧硅烷)，获得的八(氨基苯基三氧硅烷)改性多孔葡聚糖滤膜具有良好的物理化学稳定性、优异的机械强度、多孔性三度空间网状结构，促进蜂胶溶液的提纯。
在一种实施方式中，所述液相色谱检测法的测试参数：
色谱柱：色谱柱采用改性聚酰胺为填料；流动相：以甲醇为流动相a，以质量分数为15％的磷酸溶液为流动相b，进行梯度洗脱：洗脱程序为：0-25min，甲醇20-40％；25-55min，甲醇40-55％；55-65min，甲醇55％；65-80min，甲醇55-75％；80-90min，甲醇75-20％；检测波长：268nm；流速：1ml/min；柱温：35℃。
在一种实施方式中，所述改性聚酰胺为聚酰胺接枝七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精。
在一种实施方式中，所述改性聚酰胺中聚酰胺接枝七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精的接枝率为1-5％；优选地，所述改性聚酰胺中聚酰胺接枝七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精的接枝率为3％。
所述改性聚酰胺的制备方法如下：
向反应器中加入七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精、聚酰胺树脂，n,n-二甲基乙酰胺，升温至50℃，反应时间24h后过滤，乙醇洗涤，烘干，研磨，过300目筛，得改性聚酰胺；所述七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精与所述聚酰胺树脂、所述n,n-二甲基乙酰胺的重量比为1：0.2：4。
改性聚酰胺材料载量大，具有聚酰胺树脂对黄酮类化合物的优良分离性能，接枝七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精后不仅增加材料载量还提高了分离性能，可有效去除其它黄酮类杂质；促进蜂胶溶液的分离和提纯，进一步促进蜂胶溶液中物质的定性定量分析。
所述七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精为市售获得，购于山东滨州智源生物科技有限公司。
在一种实施方式中，所述标准品至少包括芦丁、槲皮素、白杨素、高良姜素、p-香豆酸、阿魏酸中一种或多种。
本发明所述阿魏酸标准品为cas号：1135-24-6，纯度≥98％；芦丁标准品为cas号：153-18-4，纯度≥92％；槲皮素标准品为cas号：117-39-5，纯度≥98％；白杨素标准品为cas号：480-40-0，纯度≥98％；p-香豆酸标准品为cas号：501-98-4，纯度≥98％；高良姜素标准品为cas号：548-83-4，纯度≥98％。
本发明所述阿魏酸标准品、芦丁标准品、槲皮素标准品、白杨素标准品、p-香豆酸标准品、高良姜素标准品均来自sigma公司。
本发明采用显色剂对蜂胶溶液进行的定性分析，采用高效液相色谱方法检测蜂胶中p-香豆酸、阿魏酸、芦丁、高良姜素、槲皮素、白杨素的方法，以p-香豆酸、阿魏酸有无区分开蜂胶与杨树胶，以芦丁和槲皮素有无界定是否掺入了这两种物质，解决蜂胶真伪鉴别及质量控制中的重要的技术难题。本发明通过八(氨基苯基三氧硅烷)改性多孔葡聚糖滤膜对蜂胶溶液进行初步分离，然后通过显色试剂对蜂胶溶液进行定性分析，初步判断蜂胶中是否掺杂假蜂胶，通过液相色谱进行定量分析，通过改性聚酰胺高效地分离蜂胶溶液中黄酮类物质的分离。该方法鉴别蜂胶的真实性具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好、易于掌握的特点。
下面通过实施例对本发明进行具体描述。有必要在此指出的是，以下实施例只用于对本发明作进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的专业技术人员根据上述本发明的内容做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
另外，如果没有其它说明，所用原料都是市售的，购于国药化学试剂。
实施例1
选取样品：2批已知的真蜂胶(标记为1#、2#)和2批假蜂胶(标记为3#、4#)；
选取标准品组芦丁、槲皮素、白杨素、高良姜素、p-香豆酸、阿魏酸；对应标准物质浓度：芦丁0.5μg/ml、槲皮素0.5μg/ml、白杨素0.5μg/ml、p-香豆酸2μg/ml、高良姜素10μg/ml和阿魏酸20μg/ml；进行液相测试；
所述保健食品中假蜂胶的定性定量分析方法，至少包括以下步骤：
s1：将原料蜂胶置于15℃以下进行粉碎制得碎蜂胶，加入体积浓度为95％的乙醇，搅拌溶解，制得蜂胶乙醇液；所述体积浓度为95％的乙醇与所述原料蜂胶的重量比为6：1；
s2：用目数为800目的滤器进行过滤蜂胶乙醇液而制得蜂胶滤液，再将蜂胶滤液通过滤膜得精制蜂胶液，然后将精制蜂胶液减压浓缩干，得到精制蜂胶；
s3：定性分析：取精制蜂胶与去离子水进行混合溶解，配制蜂胶溶液，然后加入显色液，观察颜色变化；所述显色液为缩二脲显色液；所述精制蜂胶与所述去离子水的重量比为1：6；
s4：定量分析：通过液相色谱检测法检测精制蜂胶，通过标准品对照得到保健食品中假蜂胶的定量分析；
其中，所述滤膜的制备原料包括葡聚糖、八(氨基苯基三氧硅烷)；所述滤膜的制备原料中所述葡聚糖与所述八(氨基苯基三氧硅烷)的重量比为1：0.16；所述改性聚酰胺为聚酰胺接枝七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精；所述改性聚酰胺中聚酰胺接枝七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精的接枝率为3％；
所述液相色谱检测法的测试参数：
色谱柱：色谱柱采用改性聚酰胺为填料；流动相：以甲醇为流动相a，以质量分数为15％的磷酸溶液为流动相b，进行梯度洗脱：洗脱程序为：0-25min，甲醇30％；25-55min，甲醇50％；55-65min，甲醇55％；65-80min，甲醇60％；80-90min，甲醇70％；检测波长：268nm；流速：1ml/min；柱温：35℃；
所述滤膜的制备方法如下：
(1)多孔葡聚糖凝胶制备：将葡聚糖凝胶用蒸馏水浸泡24h，用蒸馏水充分洗涤至中性，过滤，置于-12～-15℃迅速冷冻5h，取出后放入冷冻干燥箱内，冷冻干燥24h，得到多孔葡聚糖凝胶；
(2)酰氯化多孔葡聚糖凝胶：在反应器加入二氯甲烷、草酰氯、多孔葡聚糖凝胶，升温至30℃，保温反应3h，反应完毕后减压浓缩干，取出后放真空干燥箱中干燥，得到酰氯化多孔葡聚糖；所述二氯甲烷与所述草酰氯、所述多孔葡聚糖凝胶的重量比为10：1：0.7；
(3)向反应器中加入乙腈、酰氯化多孔葡聚糖、八(氨基苯基三氧硅烷)，升温至80℃，保温反应14h，过滤，脱泡，得到制膜液；所述乙腈与所述酰氯化多孔葡聚糖重量比为6：1；将聚酯无纺布作为支撑层安装在刮膜机上，调整好刮刀的厚度和线速控制仪的走布速度，将制备好的制膜液缓慢平稳地倒入制膜液储存槽中，开动刮膜机，制膜液被涂刮在聚酯无纺布上，经过10cm的空气暴露距离后，浸入到6℃的恒温凝固浴中，后经过漂洗槽充分漂洗，得到滤膜。
所述改性聚酰胺的制备方法如下：
向反应器中加入七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精、聚酰胺树脂，n,n-二甲基乙酰胺，升温至50℃，反应时间24h后过滤，乙醇洗涤，烘干，研磨，过300目筛，得改性聚酰胺；所述七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精与所述聚酰胺树脂、所述n,n-二甲基乙酰胺的重量比为1：0.2：4。
结果：1#：显色为黄绿色；2#：显色为黄绿色；3#：显色不是黄绿色；4#：显色不是黄绿色。
实施例2
选取样品：2批已知的真蜂胶(标记为1#、2#)和2批假蜂胶(标记为3#、4#)；
选取标准品组芦丁、槲皮素、白杨素、高良姜素、p-香豆酸、阿魏酸；对应标准物质浓度：芦丁0.5μg/ml、槲皮素0.5μg/ml、白杨素0.5μg/ml、p-香豆酸2μg/ml、高良姜素10μg/ml和阿魏酸20μg/ml；进行液相测试；
所述保健食品中假蜂胶的定性定量分析方法，至少包括以下步骤：
s1：将原料蜂胶置于15℃以下进行粉碎制得碎蜂胶，加入体积浓度为95％的乙醇，搅拌溶解，制得蜂胶乙醇液；所述体积浓度为95％的乙醇与所述原料蜂胶的重量比为6：1；
s2：用目数为800目的滤器进行过滤蜂胶乙醇液而制得蜂胶滤液，再将蜂胶滤液通过滤膜得精制蜂胶液，然后将精制蜂胶液减压浓缩干，得到精制蜂胶；
s3：定性分析：取精制蜂胶与去离子水进行混合溶解，配制蜂胶溶液，然后加入显色液，观察颜色变化；所述显色液为缩二脲显色液；所述精制蜂胶与所述去离子水的重量比为1：6；
s4：定量分析：通过液相色谱检测法检测精制蜂胶，通过标准品对照得到保健食品中假蜂胶的定量分析；
其中，所述滤膜的制备原料包括葡聚糖、八(氨基苯基三氧硅烷)；所述滤膜的制备原料中所述葡聚糖与所述八(氨基苯基三氧硅烷)的重量比为1：0.05；所述改性聚酰胺为聚酰胺接枝七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精；所述改性聚酰胺中聚酰胺接枝七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精的接枝率为3％；
所述液相色谱检测法的测试参数：
色谱柱：色谱柱采用改性聚酰胺为填料；流动相：以甲醇为流动相a，以质量分数为15％的磷酸溶液为流动相b，进行梯度洗脱：洗脱程序为：0-25min，甲醇30％；25-55min，甲醇50％；55-65min，甲醇55％；65-80min，甲醇60％；80-90min，甲醇70％；检测波长：268nm；流速：1ml/min；柱温：35℃；
所述滤膜的制备方法、所述改性聚酰胺的制备方法同实施例1。
结果：1#：显色为黄绿色；2#：显色为黄绿色；3#：显色不是黄绿色；4#：显色不是黄绿色。
实施例3
选取样品：2批已知的真蜂胶(标记为1#、2#)和2批假蜂胶(标记为3#、4#)；
选取标准品组芦丁、槲皮素、白杨素、高良姜素、p-香豆酸、阿魏酸；对应标准物质浓度：芦丁0.5μg/ml、槲皮素0.5μg/ml、白杨素0.5μg/ml、p-香豆酸2μg/ml、高良姜素10μg/ml和阿魏酸20μg/ml；进行液相测试；
所述保健食品中假蜂胶的定性定量分析方法，至少包括以下步骤：
s1：将原料蜂胶置于15℃以下进行粉碎制得碎蜂胶，加入体积浓度为95％的乙醇，搅拌溶解，制得蜂胶乙醇液；所述体积浓度为95％的乙醇与所述原料蜂胶的重量比为6：1；
s2：用目数为800目的滤器进行过滤蜂胶乙醇液而制得蜂胶滤液，再将蜂胶滤液通过滤膜得精制蜂胶液，然后将精制蜂胶液减压浓缩干，得到精制蜂胶；
s3：定性分析：取精制蜂胶与去离子水进行混合溶解，配制蜂胶溶液，然后加入显色液，观察颜色变化；所述显色液为缩二脲显色液；所述精制蜂胶与所述去离子水的重量比为1：6；
s4：定量分析：通过液相色谱检测法检测精制蜂胶，通过标准品对照得到保健食品中假蜂胶的定量分析；
其中，所述滤膜的制备原料包括葡聚糖、八(氨基苯基三氧硅烷)；所述滤膜的制备原料中所述葡聚糖与所述八(氨基苯基三氧硅烷)的重量比为1：0.2；所述改性聚酰胺为聚酰胺接枝七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精；所述改性聚酰胺中聚酰胺接枝七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精的接枝率为3％；
所述液相色谱检测法的测试参数：
色谱柱：色谱柱采用改性聚酰胺为填料；流动相：以甲醇为流动相a，以质量分数为15％的磷酸溶液为流动相b，进行梯度洗脱：洗脱程序为：0-25min，甲醇30％；25-55min，甲醇50％；55-65min，甲醇55％；65-80min，甲醇60％；80-90min，甲醇70％；检测波长：268nm；流速：1ml/min；柱温：35℃；
所述滤膜的制备方法、所述改性聚酰胺的制备方法同实施例1。
结果：1#：显色为黄绿色；2#：显色为黄绿色；3#：显色不是黄绿色；4#：显色不是黄绿色。
实施例4
选取样品：2批已知的真蜂胶(标记为1#、2#)和2批假蜂胶(标记为3#、4#)；
选取标准品组芦丁、槲皮素、白杨素、高良姜素、p-香豆酸、阿魏酸；对应标准物质浓度：芦丁0.5μg/ml、槲皮素0.5μg/ml、白杨素0.5μg/ml、p-香豆酸2μg/ml、高良姜素10μg/ml和阿魏酸20μg/ml；进行液相测试；
所述保健食品中假蜂胶的定性定量分析方法，至少包括以下步骤：
s1：将原料蜂胶置于15℃以下进行粉碎制得碎蜂胶，加入体积浓度为95％的乙醇，搅拌溶解，制得蜂胶乙醇液；所述体积浓度为95％的乙醇与所述原料蜂胶的重量比为6：1；
s2：用目数为800目的滤器进行过滤蜂胶乙醇液而制得蜂胶滤液，再将蜂胶滤液通过滤膜得精制蜂胶液，然后将精制蜂胶液减压浓缩干，得到精制蜂胶；
s3：定性分析：取精制蜂胶与去离子水进行混合溶解，配制蜂胶溶液，然后加入显色液，观察颜色变化；所述显色液为缩二脲显色液；所述精制蜂胶与所述去离子水的重量比为1：6；
s4：定量分析：通过液相色谱检测法检测精制蜂胶，通过标准品对照得到保健食品中假蜂胶的定量分析；
其中，所述滤膜的制备原料包括葡聚糖、八(氨基苯基三氧硅烷)；所述滤膜的制备原料中所述葡聚糖与所述八(氨基苯基三氧硅烷)的重量比为1：0.16；所述改性聚酰胺为聚酰胺接枝七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精；所述改性聚酰胺中聚酰胺接枝七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精的接枝率为1％；
所述液相色谱检测法的测试参数：
色谱柱：色谱柱采用改性聚酰胺为填料；流动相：以甲醇为流动相a，以质量分数为15％的磷酸溶液为流动相b，进行梯度洗脱：洗脱程序为：0-25min，甲醇30％；25-55min，甲醇50％；55-65min，甲醇55％；65-80min，甲醇60％；80-90min，甲醇70％；检测波长：268nm；流速：1ml/min；柱温：35℃；
所述滤膜的制备方法、所述改性聚酰胺的制备方法同实施例1。
结果：1#：显色为黄绿色；2#：显色为黄绿色；3#：显色不是黄绿色；4#：显色不是黄绿色。
实施例5
选取样品：2批已知的真蜂胶(标记为1#、2#)和2批假蜂胶(标记为3#、4#)；
选取标准品组芦丁、槲皮素、白杨素、高良姜素、p-香豆酸、阿魏酸；对应标准物质浓度：芦丁0.5μg/ml、槲皮素0.5μg/ml、白杨素0.5μg/ml、p-香豆酸2μg/ml、高良姜素10μg/ml和阿魏酸20μg/ml；进行液相测试；
所述保健食品中假蜂胶的定性定量分析方法，至少包括以下步骤：
s1：将原料蜂胶置于15℃以下进行粉碎制得碎蜂胶，加入体积浓度为95％的乙醇，搅拌溶解，制得蜂胶乙醇液；所述体积浓度为95％的乙醇与所述原料蜂胶的重量比为6：1；
s2：用目数为800目的滤器进行过滤蜂胶乙醇液而制得蜂胶滤液，再将蜂胶滤液通过滤膜得精制蜂胶液，然后将精制蜂胶液减压浓缩干，得到精制蜂胶；
s3：定性分析：取精制蜂胶与去离子水进行混合溶解，配制蜂胶溶液，然后加入显色液，观察颜色变化；所述显色液为缩二脲显色液；所述精制蜂胶与所述去离子水的重量比为1：6；
s4：定量分析：通过液相色谱检测法检测精制蜂胶，通过标准品对照得到保健食品中假蜂胶的定量分析；
其中，所述滤膜的制备原料包括葡聚糖、八(氨基苯基三氧硅烷)；所述滤膜的制备原料中所述葡聚糖与所述八(氨基苯基三氧硅烷)的重量比为1：0.16；所述改性聚酰胺为聚酰胺接枝七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精；所述改性聚酰胺中聚酰胺接枝七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精的接枝率为5％；
所述液相色谱检测法的测试参数：
色谱柱：色谱柱采用改性聚酰胺为填料；流动相：以甲醇为流动相a，以质量分数为15％的磷酸溶液为流动相b，进行梯度洗脱：洗脱程序为：0-25min，甲醇30％；25-55min，甲醇50％；55-65min，甲醇55％；65-80min，甲醇60％；80-90min，甲醇70％；检测波长：268nm；流速：1ml/min；柱温：35℃；
所述滤膜的制备方法、所述改性聚酰胺的制备方法同实施例1。
结果：1#：显色为黄绿色；2#：显色为黄绿色；3#：显色不是黄绿色；4#：显色不是黄绿色。
实施例6
选取样品：2批已知的真蜂胶(标记为1#、2#)和2批假蜂胶(标记为3#、4#)；
选取标准品组芦丁、槲皮素、白杨素、高良姜素、p-香豆酸、阿魏酸；对应标准物质浓度：芦丁0.5μg/ml、槲皮素0.5μg/ml、白杨素0.5μg/ml、p-香豆酸2μg/ml、高良姜素10μg/ml和阿魏酸20μg/ml；进行液相测试；
所述保健食品中假蜂胶的定性定量分析方法，至少包括以下步骤：
s1：将原料蜂胶置于15℃以下进行粉碎制得碎蜂胶，加入体积浓度为95％的乙醇，搅拌溶解，制得蜂胶乙醇液；所述体积浓度为95％的乙醇与所述原料蜂胶的重量比为4：1；
s2：用目数为800目的滤器进行过滤蜂胶乙醇液而制得蜂胶滤液，再将蜂胶滤液通过滤膜得精制蜂胶液，然后将精制蜂胶液减压浓缩干，得到精制蜂胶；
s3：定性分析：取精制蜂胶与去离子水进行混合溶解，配制蜂胶溶液，然后加入显色液，观察颜色变化；所述显色液为缩二脲显色液；所述精制蜂胶与所述去离子水的重量比为1：6；
s4：定量分析：通过液相色谱检测法检测精制蜂胶，通过标准品对照得到保健食品中假蜂胶的定量分析；
其中，所述滤膜的制备原料包括葡聚糖、八(氨基苯基三氧硅烷)；所述滤膜的制备原料中所述葡聚糖与所述八(氨基苯基三氧硅烷)的重量比为1：0.16；所述改性聚酰胺为聚酰胺接枝七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精；所述改性聚酰胺中聚酰胺接枝七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精的接枝率为3％；
所述液相色谱检测法的测试参数：
色谱柱：色谱柱采用改性聚酰胺为填料；流动相：以甲醇为流动相a，以质量分数为15％的磷酸溶液为流动相b，进行梯度洗脱：洗脱程序为：0-25min，甲醇30％；25-55min，甲醇50％；55-65min，甲醇55％；65-80min，甲醇60％；80-90min，甲醇70％；检测波长：268nm；流速：1ml/min；柱温：35℃；
所述滤膜的制备方法、所述改性聚酰胺的制备方法同实施例1。
结果：1#：显色为黄绿色；2#：显色为黄绿色；3#：显色不是黄绿色；4#：显色不是黄绿色。
对比例1
选取样品：2批已知的真蜂胶(标记为1#、2#)和2批假蜂胶(标记为3#、4#)；
选取标准品组芦丁、槲皮素、白杨素、高良姜素、p-香豆酸、阿魏酸；对应标准物质浓度：芦丁0.5μg/ml、槲皮素0.5μg/ml、白杨素0.5μg/ml、p-香豆酸2μg/ml、高良姜素10μg/ml和阿魏酸20μg/ml；进行液相测试；
所述保健食品中假蜂胶的定性定量分析方法，至少包括以下步骤：
s1：将原料蜂胶置于15℃以下进行粉碎制得碎蜂胶，加入体积浓度为95％的乙醇，搅拌溶解，制得蜂胶乙醇液；所述体积浓度为95％的乙醇与所述原料蜂胶的重量比为6：1；
s2：用目数为800目的滤器进行过滤蜂胶乙醇液而制得蜂胶滤液，再将蜂胶滤液通过滤膜得精制蜂胶液，然后将精制蜂胶液减压浓缩干，得到精制蜂胶；
s3：定性分析：取精制蜂胶与去离子水进行混合溶解，配制蜂胶溶液，然后加入显色液，观察颜色变化；所述显色液为缩二脲显色液；所述精制蜂胶与所述去离子水的重量比为1：6；
s4：定量分析：通过液相色谱检测法检测精制蜂胶，通过标准品对照得到保健食品中假蜂胶的定量分析；
其中，所述滤膜的制备原料包括葡聚糖；所述改性聚酰胺为聚酰胺接枝七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精；所述改性聚酰胺中聚酰胺接枝七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精的接枝率为3％；
所述液相色谱检测法的测试参数：
色谱柱：色谱柱采用改性聚酰胺为填料；流动相：以甲醇为流动相a，以质量分数为15％的磷酸溶液为流动相b，进行梯度洗脱：洗脱程序为：0-25min，甲醇30％；25-55min，甲醇50％；55-65min，甲醇55％；65-80min，甲醇60％；80-90min，甲醇70％；检测波长：268nm；流速：1ml/min；柱温：35℃；
所述改性聚酰胺的制备方法同实施例1；
所述滤膜的制备方法如下：
(1)多孔葡聚糖凝胶制备：将葡聚糖凝胶用蒸馏水浸泡24h，用蒸馏水充分洗涤至中性，过滤，置于-12～-15℃迅速冷冻5h，取出后放入冷冻干燥箱内，冷冻干燥24h，得到多孔葡聚糖凝胶；
(2)向反应器中加入乙腈、多孔葡聚糖，升温至80℃，保温反应4h，过滤，脱泡，得到制膜液；所述乙腈与所述多孔葡聚糖重量比为6：1；将聚酯无纺布作为支撑层安装在刮膜机上，调整好刮刀的厚度和线速控制仪的走布速度，将制备好的制膜液缓慢平稳地倒入制膜液储存槽中，开动刮膜机，制膜液被涂刮在聚酯无纺布上，经过10cm的空气暴露距离后，浸入到6℃的恒温凝固浴中，后经过漂洗槽充分漂洗，得到滤膜。
结果：1#：显色为黄绿色；2#：显色为黄绿色；3#：显色不是黄绿色；4#：显色不是黄绿色。
对比例2
选取样品：2批已知的真蜂胶(标记为1#、2#)和2批假蜂胶(标记为3#、4#)；
选取标准品组芦丁、槲皮素、白杨素、高良姜素、p-香豆酸、阿魏酸；对应标准物质浓度：芦丁0.5μg/ml、槲皮素0.5μg/ml、白杨素0.5μg/ml、p-香豆酸2μg/ml、高良姜素10μg/ml和阿魏酸20μg/ml；进行液相测试；
所述保健食品中假蜂胶的定性定量分析方法，至少包括以下步骤：
s1：将原料蜂胶置于15℃以下进行粉碎制得碎蜂胶，加入体积浓度为95％的乙醇，搅拌溶解，制得蜂胶乙醇液；所述体积浓度为95％的乙醇与所述原料蜂胶的重量比为6：1；
s2：用目数为800目的滤器进行过滤蜂胶乙醇液而制得蜂胶滤液，再将蜂胶滤液通过滤膜得精制蜂胶液，然后将精制蜂胶液减压浓缩干，得到精制蜂胶；
s3：定性分析：取精制蜂胶与去离子水进行混合溶解，配制蜂胶溶液，然后加入显色液，观察颜色变化；所述显色液为缩二脲显色液；所述精制蜂胶与所述去离子水的重量比为1：6；
s4：定量分析：通过液相色谱检测法检测精制蜂胶，通过标准品对照得到保健食品中假蜂胶的定量分析；
其中，所述滤膜的制备原料包括葡聚糖、八(氨基苯基三氧硅烷)；所述滤膜的制备原料中所述葡聚糖与所述八(氨基苯基三氧硅烷)的重量比为1：0.16；所述液相色谱检测法的测试参数：
色谱柱：色谱柱采用聚酰胺为填料；流动相：以甲醇为流动相a，以质量分数为15％的磷酸溶液为流动相b，进行梯度洗脱：洗脱程序为：0-25min，甲醇30％；25-55min，甲醇50％；55-65min，甲醇55％；65-80min，甲醇60％；80-90min，甲醇70％；检测波长：268nm；流速：1ml/min；柱温：35℃；
所述滤膜的制备方法同实施例1。
结果：1#：显色为黄绿色；2#：显色为黄绿色；3#：显色不是黄绿色；4#：显色不是黄绿色。
对比例3
选取样品：2批已知的真蜂胶(标记为1#、2#)和2批假蜂胶(标记为3#、4#)；
选取标准品组芦丁、槲皮素、白杨素、高良姜素、p-香豆酸、阿魏酸；对应标准物质浓度：芦丁0.5μg/ml、槲皮素0.5μg/ml、白杨素0.5μg/ml、p-香豆酸2μg/ml、高良姜素10μg/ml和阿魏酸20μg/ml；进行液相测试；
所述保健食品中假蜂胶的定性定量分析方法，至少包括以下步骤：
s1：将原料蜂胶置于15℃以下进行粉碎制得碎蜂胶，加入体积浓度为95％的乙醇，搅拌溶解，制得蜂胶乙醇液；所述体积浓度为95％的乙醇与所述原料蜂胶的重量比为6：1；
s2：用目数为800目的滤器进行过滤蜂胶乙醇液而制得蜂胶滤液，再将蜂胶滤液通过滤膜得精制蜂胶液，然后将精制蜂胶液减压浓缩干，得到精制蜂胶；
s3：定性分析：取精制蜂胶与去离子水进行混合溶解，配制蜂胶溶液，然后加入显色液，观察颜色变化；所述显色液为缩二脲显色液；所述精制蜂胶与所述去离子水的重量比为1：6；
s4：定量分析：通过液相色谱检测法检测精制蜂胶，通过标准品对照得到保健食品中假蜂胶的定量分析；
其中，所述滤膜的制备原料包括葡聚糖；
所述液相色谱检测法的测试参数：
色谱柱：色谱柱采用聚酰胺为填料；流动相：以甲醇为流动相a，以质量分数为15％的磷酸溶液为流动相b，进行梯度洗脱：洗脱程序为：0-25min，甲醇30％；25-55min，甲醇50％；55-65min，甲醇55％；65-80min，甲醇60％；80-90min，甲醇70％；检测波长：268nm；流速：1ml/min；柱温：35℃；
所述滤膜的制备方法同对比例1。
结果：1#：显色为黄绿色；2#：显色为黄绿色；3#：显色不是黄绿色；4#：显色不是黄绿色。
对比例4
选取样品：2批已知的真蜂胶(标记为1#、2#)和2批假蜂胶(标记为3#、4#)；
选取标准品组芦丁、槲皮素、白杨素、高良姜素、p-香豆酸、阿魏酸；对应标准物质浓度：芦丁0.5μg/ml、槲皮素0.5μg/ml、白杨素0.5μg/ml、p-香豆酸2μg/ml、高良姜素10μg/ml和阿魏酸20μg/ml；进行液相测试；
所述保健食品中假蜂胶的定性定量分析方法，至少包括以下步骤：
s1：将原料蜂胶置于15℃以下进行粉碎制得碎蜂胶，加入体积浓度为95％的乙醇，搅拌溶解，制得蜂胶乙醇液；所述体积浓度为95％的乙醇与所述原料蜂胶的重量比为6：1；
s2：用目数为800目的滤器进行过滤蜂胶乙醇液而制得蜂胶滤液，然后将蜂胶液减压浓缩干，得到蜂胶；
s3：定性分析：取蜂胶与去离子水进行混合溶解，配制蜂胶溶液，然后加入显色液，观察颜色变化；所述显色液为缩二脲显色液；所述蜂胶与所述去离子水的重量比为1：6；
s4：定量分析：通过液相色谱检测法检测蜂胶，通过标准品对照得到保健食品中假蜂胶的定量分析；
其中，所述改性聚酰胺为聚酰胺接枝七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精；所述改性聚酰胺中聚酰胺接枝七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精的接枝率为3％；
所述液相色谱检测法的测试参数：
色谱柱：色谱柱采用改性聚酰胺为填料；流动相：以甲醇为流动相a，以质量分数为15％的磷酸溶液为流动相b，进行梯度洗脱：洗脱程序为：0-25min，甲醇30％；25-55min，甲醇50％；55-65min，甲醇55％；65-80min，甲醇60％；80-90min，甲醇70％；检测波长：268nm；流速：1ml/min；柱温：35℃；
所述改性聚酰胺的制备方法同实施例1。
结果：1#：显色为黄绿色；2#：显色为黄绿色；3#：显色不是黄绿色；4#：显色不是黄绿色。
本发明中真蜂胶(标记为1#、2#)和2批假蜂胶(标记为3#、4#)；
1#：槲皮素0.66mg/g，白杨素2.46mg/g，高良姜素8.03mg/g，p-香豆酸1.86mg/g，阿魏酸1.90mg/g；
2#：槲皮素0.62mg/g，白杨素2.41mg/g，高良姜素8.07mg/g，p-香豆酸1.85mg/g，阿魏酸1.83mg/g；
3#：芦丁6.36mg/g，槲皮素12.39mg/g，p-香豆酸1.90mg/g；
4#：芦丁5.35mg/g，槲皮素17.40mg/g，p-香豆酸1.82mg/g。
表1性能测试结果
从上述表格中数据可以看出，本发明提供的保健食品中假蜂胶的定性定量分析方法，其具有灵敏、简易、准确度高。
上述的实例仅是说明性的，用于解释本发明的特征的一些特征。所附的权利要求旨在要求可以设想的尽可能广的范围，且本文所呈现的实施例仅是根据所有可能的实施例的组合的选择的实施方式的说明。因此，申请人的用意是所附的权利要求不被说明本发明的特征的示例的选择限制，而且在科技上的进步将形成由于语言表达的不准确的原因而未被目前考虑的可能的等同物或子替换，且这些变化也应在可能的情况下被解释为被所附的权利要求覆盖。