本发明涉及一种检测试剂盒，具体为一种磁微粒化学发光法测定肾素的试剂盒及其检测方法。
背景技术：
肾素(renin)是肾小球旁器、球旁细胞释放的一种蛋白水解酶，主要由肾小球旁细胞分泌，释放入肺循环中的血管紧张素转换酶的作用转化为血管紧张素ⅱ。血管紧张素ⅱ可直接使小动脉平滑肌收缩，外周阻力增加，从而使肾小管远端集合管钠再增强，导致体内水与钠潴留。血管紧张素ⅱ和转换酶等经常存在于血浆中，因此肾素的释放是决定血浆中血管紧张素浓度的关键性条件。
血浆肾素含量的检测，可用于诊断由于肾动脉狭窄导致的高血压或肾血管性高血压，帮助临床医生决定是否进行肾血管的影像学研究，诊断原发性醛固酮增多症，以及为原发性高血压病人心血管系统的并发症的发生提供有效的信息等。另外对于指导用药和治疗效果的评价有很重要的意义，例如，对于一些肾上腺功能低下并采用类固醇激素替代治疗的病人，当治疗效果充足时，肾素水平正常，当治疗效果不足时，肾素水平过高。
高血压是最常见的心血管疾病，其发病率逐年上升，并可引起严重的心、脑、肾并发症，是脑卒中和冠心病的主要危险因素。血浆肾素含量的检测，可用于诊断高血压，诊断原发性醛固酮增多症，以及为原发性高血压病人心血管系统的并发症的发生提供有效的信息等。另外还可用于高血压患者的预后评估。
目前临床检测肾素的常见方法有酶联免疫吸附法、放射免疫分析法、酶促化学发光法，但这些方法都存在着一些不足之处，流程较为繁琐，而且灵敏度有待提高。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题是克服现有肾素检测流程较为繁琐，而且灵敏度有待提高的缺陷，提供一种磁微粒化学发光法测定肾素的试剂盒及其检测方法。
为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：
一种磁微粒化学发光法测定肾素的试剂盒，该试剂盒包括生物素化肾素抗体、抗体酶标试剂、链霉亲和素磁微粒、校准品；
所述试剂盒中生物素化肾素抗体制备过程:
将生物素-nhs用dmso进行溶解后，加入肾素抗体，肾素抗体与生物素-nhs的摩尔比为1:18～22，室温反应2h；用透析袋透析反应产物，将透析液稀释至工作液浓度；
所述抗体酶标试剂制备过程：
将检测肾素抗体和碱性磷酸酶分别活化后，将二者混合2-8℃反应14～20h小时；将反应物用层析柱进行纯化，收集i峰ii峰进行混合后用缓冲液将配置成工作液浓度；
进一步的，所述抗体酶标试剂制备过程中检测肾素抗体采用0.1m的pbs进行透析，然后用2it进行活化，得到活化后的抗体；所述抗体酶标试剂制备过程中碱性磷酸酶用smcc进行活化，得到活化后的碱性磷酸酶。
进一步的，试剂盒中生物素化肾素抗体的工作浓度为0.5ug/ml,抗体酶标试剂的工作浓度为0.1ug/ml。
进一步的，校准品的制备方法为：向0.05m的ph为7.4的tris缓冲液中加入0.5％的牛血清白蛋白和0.2％防腐剂制得配制肾素校准品缓冲液；然后使用肾素校准品缓冲液将肾素纯品稀释至0pg/ml、50pg/ml、250pg/ml、500pg/ml、1000pg/ml和2000pg/ml的肾素溶液。
本发明的试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
1)取样本15ul、生物素化肾素抗体30ul和抗体酶标试30ul，孵育15min
2)向1)中加入链霉亲和素磁珠30ul，孵育5min；
3)磁分离2min，去上清；
4)洗涤3次，每次300ul洗液；
5)加入底物200ul，测值。
同时采用生物素化的肾素抗体-链霉亲和素磁珠(体系1)与肾素单克隆抗体包被的羧基化的磁微粒(体系2)，两个体系对0pg/ml、50pg/ml、250pg/ml、500pg/ml、1000pg/ml和2000pg/ml的肾素样品做检测，同时测试同一组样本，并与给值进行比对，体系1的相关性为0.9767，体系2的相关性为0.9397，说明两个体系的相关性都良好，两种测定体系之间的相关性为0.9508，说明两种体系的测值一致，证明本发明的技术方案的可行性。本发明的试剂盒避免了放射性污染，延长了试剂效期，简化了实验操作流程。亲和素与生物素间的结合具有极高的亲和力，其反应呈高度专一性。因此，在提高灵敏度的同时，并不增加非特异性干扰。而且结合特性不会因反应试剂的高度稀释而受影响，使其在实际应用中可最大限度地降低反应试剂的非特异作用。
具体实施方式
以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例
一、生物素化肾素抗体制备过程:
1)量取1mg肾素抗体；
2)通过抗原分子量(30000)和生物素-nhs分子量(587)进行计算，按照摩尔比1：20的投料量称量生物素，称取0.4mg左右的生物素-nhs，并用dmso进行溶解至终浓度为5mg/ml，得到dmso溶解的生物素；
3)在抗体中加入dmso溶解的生物素，充分混匀后室温反应2h；
4)用截留分子量为500的透析袋透析步骤3)中的反应产物，透析缓冲液为ph＝7.5的0.15m的pbs缓冲液；
5)用抗试剂缓冲液将透析液稀释至0.5ug/ml作为工作液使用；
二、抗体酶标试剂制备过程：
1)将肾素鼠单抗用0.1m的pbs进行透析，然后用2it进行活化，得到活化后的抗体；
2)将碱性磷酸酶用smcc进行活化，得到活化后的碱性磷酸酶；
3)将活化后的抗体与活化后的碱性磷酸酶进行混合，2-8℃反应18小时；
4)将反应物用层析柱进行纯化，收集i峰ii峰进行混合后用抗试剂缓冲液将混合液中的抗体-碱磷酶稀释至0.1ug/ml作为工作液；
三、校准品的制备过程；
1)配制肾素校准品缓冲液：0.05m的ph＝7.4的pbs缓冲液中加入5％的bsa，0.2％防腐剂；
2)将肾素抗原用校准品缓冲液进行稀释，依次为：0pg/ml、50pg/ml、250pg/ml、500pg/ml、1000pg/ml和2000pg/ml的肾素溶液。
采用本发明的试剂盒进行检测，包括以下步骤：
1)取样本15ul、生物素化肾素抗体30ul和抗体酶标试30ul，孵育15min
2)向1)中加入链霉亲和素磁珠30ul，孵育5min；
3)磁分离2min，去上清；
4)洗涤3次，每次300ul洗液；
5)加入底物200ul，测值。
同时采用生物素化的肾素抗体-链霉亲和素磁珠(体系1)与肾素单克隆抗体包被的羧基化的磁微粒(体系2)，两个体系对0pg/ml、50pg/ml、250pg/ml、500pg/ml、1000pg/ml和2000pg/ml的肾素样品做检测，同时测试同一组样本，并与给值进行比对，数据如下表所示：
表1不同体系下测值与给值对比以及测值之间对比
体系1的相关性为0.9767，体系2的相关性为0.9397，说明两个体系的相关性都良好，两种测定体系之间的相关性为0.9508，说明两种体系的测值一致，证明本发明的技术方案的可行性。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。