Dtnbp1化学发光法检测试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及一种新型化学发光法检测技术领域，具体是一种血清DTNBPl化学发光检测试剂盒。
【背景技术】
[0002]DTNBPl基因位于6ρ22.3，人类DTNBPl基因全长140kb，包含I个启动子和10个外显子。DTNBPl基因编码的蛋白约40kDa?50kDa，由352个氨基酸组成，有I个Coiled-coil二级结构，是一种进化上保守的蛋白。DTNBPl蛋白在人体的神经终板、海马、小脑等多种组织中均有表达，主要分布于谷氨酸能通道的突触前轴突末梢，参与建立和维持神经元与肌细胞之间的联系、突触间化学信号传递的调节及支持和调节大脑神经元之间的信息联系。研究表明DTNBPl基因与精神分裂症存在密切联系，精神分裂症患者脑回中的DTNBPl表达量显著下降，提示DTNBPl可能是精神分裂症的一个易感基因和候选功能因子。本课题组经前期研究发现，DTNBPl在消化道患者血清和肿瘤组织中的表达显著上调，提示其可能和胰腺癌的发生发展相关，可能成为一个潜在的肿瘤标志物。但目前针对的DTNBPl检测主要依赖于多重聚合酶链反应扩增(PCR)和免疫组织化学(IHC)，过程繁琐且效率不高。因此，发明一种快捷、高效的检测手段以便于DTNBPl的临床大样本筛选和分析，对于阐述DTNBPl的功能和临床意义有重要的作用。
[0003]目前用于临床生化指标经检测的方法主要有放射免疫测定、酶联免疫测定、乳胶凝集试验等，但这些方法都存在明显的局限性和缺陷。放射免疫测定虽然具有较高的灵敏度和特异性，但其有效期较短，且具有放射性污染；酶联免疫测定是目前主要检测手段，技术较成熟、应用较广且成本较低，但其反应底物大多数具有毒性或是潜在致癌性；乳胶凝集试验则具有较高的主观性，结果误差大。
[0004]化学发光分析法(ChemiLuminescence，简称为CL)是依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理，利用仪器对体系化学发光强度进行检测，而确定待测物含量的一种衡量分析方法。随着化学发光技术的逐渐发展和成熟，其应用领域越来越广泛。尤其在生物医学领域，化学发光技术得到相当程度的普及，已广泛应用于多种生物活性物质的临床检测，如应用化学发光法检测乙肝病毒、甲状腺功能及肿瘤标志物等。化学发光分析法以其灵敏度高、线性范围宽、分析快速和容易实现自动化等优点，已然成为分析化学中一个十分话跃的研究热点，并将取代放射免疫分析和酶联免疫分析等，成为现代免疫诊断的主要发展方向。
[0005]由此可见，如何将化学发光检测方法应用于DTNBPl的血清学定量检测，并根据检测结果对消化道肿瘤病人的病情程度、治疗效果及预后进行判定和预测，对扩大DTNBPl的临床应用和肿瘤相关疾病的大样本筛查有重要意义。
【发明内容】
[0006]本实用新型的目的是提供一种DTNBPl化学发光法检测试剂盒，可以准确、快捷又安全的检测血清中DTNBPl含量。
[0007]本实用新型的技术方案是:一种DTNBPl化学发光法检测试剂盒，其特征在于:包括盒体和盒内一块96孔微孔板、十瓶试剂、一袋固体磷酸-吐温包被缓冲液，其中所述的96孔微孔板内设有预包被DTNBPl抗体微孔；十瓶试剂分别为七个浓度的标准品溶液，一瓶酶标抗体工作液、一瓶底物发光液A、一瓶底物发光液B，其中一瓶酶标抗体工作液和一瓶底物发光液A用黑盖PE半透明塑料瓶，一瓶底物发光液B用黑盖PE黑色塑料瓶，所述盒体是硬纸盒，96孔微孔板放在真空锡箔袋内，包被缓冲液放在密封袋内。
[0008]所述的96孔微孔板是由外框支架和放置其上的可拆卸的八条酶标条组成，每个可拆卸的酶标条有十二个微孔。
[0009]本实用新型的目的是这样实现的:以双抗体夹心法为基础，于微孔板上预包被DTNBPl单克隆抗体捕获血清DTNBPl抗原，再加入HRP标记DTNBPl抗体，形成抗体-DTNBPl抗原-抗体HRP标记物复合物，洗板加入鲁米诺-H2O2反应试剂，用化学发光分析仪测量发光值。血清中DTNBPl含量越高，结合的酶标抗体越多，则化学发光强度越强；反之亦然。因此，可以根据检测到的化学发光强度来间接定量人血清中DTNBPl的水平。将结果与正常体检血清值相比较，从而判断阴阳性。
[0010]试剂组成
[0011]1.发光底物:A液为H2O2, B液为鲁米诺。
[0012]2.包被缓冲液:0.01M, pH7.4PBS_Tween20 缓冲液。
[0013]本实用新型的有益效果在于能够更快速、灵敏检测血清DTNBPl的含量。
【附图说明】
[0014]图1是本实用新型盒体示意图。
[0015]图2是本实用新型96孔微孔板的示意图。
[0016]图3是本实用新型包被缓冲液的示意图。
[0017]图4是本实用新型试剂瓶示意图。
[0018]图5是本实用新型整体结构示意图。
[0019]其中I为盒体；2为预包被DTNBPl抗体的96孔微孔板；3为包被缓冲液；4为标准品溶液，5为酶标抗体工作液，6为底物发光液A ;7为底物发光液B。
【具体实施方式】
[0020]如图1、图2、图3、图4和图5所示，一种DTNBPl化学发光法检测试剂盒，包括盒体I和盒内一块96孔微孔板2，96孔微孔板为固体载体，预包被DTNBPl抗体微孔；十瓶试剂，分别为七瓶标准品溶液4，一瓶酶标抗体工作液5、一瓶底物发光液A6、一瓶底物发光液B70盒体I是硬纸盒，96孔微孔板2放在真空锡箔袋内，一瓶酶标抗体工作液5和一瓶底物发光液A6用黑盖PE半透明塑料瓶，一瓶底物发光液B7用黑盖PE黑色塑料瓶。96孔微孔板2是由外框支架和放置其上的可拆卸的八条酶标条组成，每个可拆卸的酶标条有十二个微孔。
[0021]将人血浆按50 μ I/孔加入预包被DTNBPl抗体的微孔板内，水浴、洗板，加入酶标抗体工作液50 μ I/孔，洗板，加入底物发光Α、B液，化学发光仪检测，即得DTNBPl浓度。
【主权项】
1.一种DTNBPl化学发光法检测试剂盒，其特征在于:包括盒体(I)和盒内一块96孔微孔板(2)、十瓶试剂、一袋固体磷酸-吐温包被缓冲液(3)，其中所述的96孔微孔板内设有预包被DTNBPl抗体微孔；十瓶试剂分别为七个浓度的标准品溶液(4)，一瓶酶标抗体工作液(5)、一瓶底物发光液A^)、一瓶底物发光液B (7)，其中一瓶酶标抗体工作液(5)和一瓶底物发光液A(6)用黑盖PE半透明塑料瓶，一瓶底物发光液B(7)用黑盖PE黑色塑料瓶，所述盒体(I)是硬纸盒，96孔微孔板(2)放在真空锡箔袋内，包被缓冲液(3)放在密封袋内。2.根据权利要求1所述的一种DTNBPl化学发光法检测试剂盒，其特征在于:所述的96孔微孔板(2)是由外框支架和放置其上的可拆卸的八条酶标条组成，每个可拆卸的酶标条有十二个微孔。
【专利摘要】本实用新型公开了一种DTNBP1化学发光法检测试剂盒，该试剂盒包括：微孔板、酶标抗体工作液、七个浓度的标准品溶液、底物发光液A、底物发光液B、包被缓冲液。本实用新型采用化学发光法，在微孔板微孔条上预包DTNBP1抗体，与样本中的DTNBP1抗原结合，后者与辣根过氧化物酶标记的二抗结合，用底物发光液发光，利用发光值与其所含DTNBP1量成正比关系，即可得出样品中DTNBP1的含量。本实用新型具有快速、高灵敏度等特点，在检测生物样品中DTNBP1的含量中发挥重要作用。
【IPC分类】G01N33/577, G01N21/76
【公开号】CN204924948
【申请号】CN201520709580
【发明人】陈勇, 白泉, 姚雪彪, 赵宁, 方诚, 郭欣, 吕行
【申请人】陈勇
【公开日】2015年12月30日
【申请日】2015年9月14日