本发明属于分析化学领域，具体涉及采用液相色谱法检测l-2-氨基丁酰胺盐酸盐及其手性异构体的分离测定方法。
背景技术
左乙拉西坦是由比利时ucb公司研制开发的新型抗癫痫药，其化学名为(s)-α-乙基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺，其分子结构中有一个手性中心，r构型对映异构体没有治疗活性。考虑到手性中心的溯源性，左乙拉西坦的中间体l-2-氨基丁酰胺盐酸盐的手性纯度直接决定了左乙拉西坦的手性纯度，因此必须严格控制l-2-氨基丁酰胺盐酸盐的对映异构体杂质含量。
l-2-氨基丁酰胺盐酸盐，为白色或类白色固体粉末，其结构式如式1-a所示：
根据已有的文献报道，高效液相色谱法检测(s)-2-氨基丁酰胺盐酸盐的纯度都是采用传统的c18色谱柱进行杂质检测，从文献的结果来看，仅仅是说明存在几个杂质峰，并未对杂质峰对应的杂质结构进行说明，从以往的实验经验来看，c18色谱柱对含有手性异构体杂质的样品分离效果比较差，杂质峰包含在主峰内。手性杂质的检测往往需要手性色谱柱，如何在众多手性色谱柱选择合适的手性色谱柱，同时确定色谱条件使l-2-氨基丁酰胺盐酸盐及其已知杂质实现有效分离，为l-2-氨基丁酰胺盐酸盐工业化生产提供简便、准确、快速、可靠的检测方法，对本领域的技术人员而言，也是极具挑战性的。
对l-2-氨基丁酰胺盐酸盐的手性杂质进行控制，可以有效降低后续合成药物提纯的难度和工作。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种l-2-氨基丁酰胺盐酸盐及其手性异构体的分离测定方法，可用于l-2-氨基丁酰胺盐酸盐的制备过程和终产品控制，有利于保证原料药的与制剂的质量。
本发明所采取的技术方案是：
一种l-2-氨基丁酰胺盐酸盐手性杂质的检测方法，包括如下步骤：
1)供试样品溶液的制备：称取供试样品l-2-氨基丁酰胺，加稀释液溶解，配制成每毫升含l-2-氨基丁酰胺0.8～1.2mg的供试样品溶液；
2)对照品溶液的制备：量取上述供试样品溶液2ml，用流动相稀释至100ml，再量取稀释液10ml，用流动相稀释至100ml的样品溶液，得到对照品溶液；
3)空白试验：量取稀释液10～20μl，注入液相色谱仪，记录稀释液的色谱图；
4)供试样品溶液试验：取供试样品溶液，注入高效液相色谱仪，记录供试样品溶液的色谱图；
5)对照品溶液试验：取对照品溶液，注入高效液相色谱仪，记录对照品溶液的色谱图；
6)利用稀释液的色谱图、对照品溶液的色谱图和供试样品溶液的色谱图，确定供试样品中的手性杂质含量。
作为上述检测方法的进一步改进，稀释液为纯化水。
作为上述检测方法的进一步改进，高效液相色谱测试条件为：色谱柱为
作为上述检测方法的进一步改进，流动相hclo4溶液的ph＝1.5～2.0。
作为上述检测方法的进一步改进，高效液相色谱的色谱柱的柱温为15～20℃。
作为上述检测方法的进一步改进，高效液相色谱的进样量为10～20μl。
作为上述检测方法的进一步改进，高效液相色谱中的流速为0.2～1.0ml/min。
作为上述检测方法的进一步改进，高效液相色谱的色谱柱为大赛璐耐溶剂型冠醚手性色谱柱
作为上述检测方法的进一步改进，紫外检测器的检测波长为200～210nm。
作为上述检测方法的进一步改进，使用供试样品溶液的色谱峰扣除稀释液的色谱峰，与对照品溶液的色谱主峰面积进行对比，计算得到手性杂质的量。
本发明的有益效果是：
本发明采用液相色谱法检测l-2-氨基丁酰胺盐酸盐的手性杂质，能使l-2-氨基丁酰胺盐酸盐及其已知杂质均能实现有效分离，为l-2-氨基丁酰胺盐酸盐工业化生产提供简便、准确、快速、可靠的检测方法。
附图说明
图1为l-2-氨基丁酰胺盐酸盐与r-2-氨基丁酰胺盐酸盐混合样的高效液相色谱图。
具体实施方式
一种l-2-氨基丁酰胺盐酸盐手性杂质的检测方法，包括如下步骤：
1)供试样品溶液的制备：称取供试样品l-2-氨基丁酰胺，加稀释液溶解，配制成每毫升含l-2-氨基丁酰胺0.8-1.2mg的供试样品溶液；
2)对照品溶液的制备：量取上述供试样品溶液2ml，用流动相稀释至100ml，再量取稀释液10ml，用流动相稀释至100ml的样品溶液，得到对照品溶液；
3)空白试验：量取稀释液10μl，注入液相色谱仪，记录稀释液的色谱图；
4)供试样品溶液试验：取供试样品溶液，注入高效液相色谱仪，记录供试样品溶液的色谱图；
5)对照品溶液试验：取对照品溶液，注入高效液相色谱仪，记录对照品溶液的色谱图；
6)利用稀释液的色谱图、对照品溶液的色谱图和供试样品溶液的色谱图，确定供试样品中的手性杂质含量。
作为上述检测方法的进一步改进，稀释液为纯化水。
作为上述检测方法的进一步改进，高效液相色谱测试条件为：色谱柱为
作为上述检测方法的进一步改进，流动相hclo4溶液的ph＝1.5。
作为上述检测方法的进一步改进，高效液相色谱的色谱柱的柱温为15℃。
作为上述检测方法的进一步改进，高效液相色谱的进样量为10μl。
作为上述检测方法的进一步改进，高效液相色谱中的流速为0.3ml/min。
作为上述检测方法的进一步改进，高效液相色谱的色谱柱为大赛璐耐溶剂型冠醚手性色谱柱
作为上述检测方法的进一步改进，紫外检测器的检测波长为205nm。
下面将结合具体的实施例对发明中的技术方案做出进一步的阐述。除非另有说明，下列实施例中所使用的试剂、材料及仪器均可以通过常规商业手段获得。
实施例1：
仪器与条件：
色谱柱：
流动相：ph＝1.5的hclo4溶液
流速：0.3ml/min
柱温：15℃
检测波长：205nm
进样体积：10μl
实施步骤：
1)供试样品溶液的制备：称取供试样品l-2-氨基丁酰胺25.00mg，加纯化水溶解，转移至25ml容量瓶，加纯化水定容至刻度，得到供试样品溶液；
2)对照品溶液的制备：量取上述供试样品溶液2ml，用流动相稀释至100ml，再量取稀释液10ml，用流动相稀释至100ml的样品溶液，得到对照品溶液；
3)空白试验：量取稀释液10μl，注入液相色谱仪，记录稀释液的色谱图；
4)供试样品溶液试验：取供试样品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，记录供试样品溶液的色谱图；
5)对照品溶液试验：取对照品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，记录对照品溶液的色谱图；
6)使用供试样品溶液的色谱峰扣除稀释液的色谱峰，与对照品溶液的色谱主峰面积进行对比，计算得到手性杂质的量。
结果显示：本实施例的色谱条件下，l-2-氨基丁酰胺保留时间为4.773min，r-2-氨基丁酰胺的保留时间为6.285min，各峰之间的分离度大于2.0，r-2-氨基丁酰胺手性异构体杂质的含量为0.12％。
实施例2：
仪器与条件：
色谱柱：
流动相：ph＝1.5的hclo4溶液
流速：0.6ml/min
柱温：17℃
检测波长：205nm
进样体积：10μl
实施步骤：
1)供试样品溶液的制备：称取供试样品l-2-氨基丁酰胺24.82mg，加纯化水溶解，转移至25ml容量瓶，加纯化水定容至刻度，得到供试样品溶液；
2)对照品溶液的制备：量取上述供试样品溶液2ml，用流动相稀释至100ml，再量取稀释液10ml，用流动相稀释至100ml的样品溶液，得到对照品溶液；
3)空白试验：量取稀释液10μl，注入液相色谱仪，记录稀释液的色谱图；
4)供试样品溶液试验：取供试样品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，记录供试样品溶液的色谱图；
5)对照品溶液试验：取对照品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，记录对照品溶液的色谱图；
6)使用供试样品溶液的色谱峰扣除稀释液的色谱峰，与对照品溶液的色谱主峰面积进行对比，计算得到手性杂质的量。
结果显示：本实施例的色谱条件下，l-2-氨基丁酰胺保留时间为4.528min，r-2-氨基丁酰胺的保留时间为6.150min，各峰之间的分离度大于2.0，r-2-氨基丁酰胺手性异构体杂质的含量为0.10％。
实施例3：
仪器与条件：
色谱柱：
流动相：ph＝1.5的hclo4溶液
流速：2.0ml/min
柱温：20℃
检测波长：205nm
进样体积：20μl
实施步骤：
1)供试样品溶液的制备：称取供试样品l-2-氨基丁酰胺25.42mg，加纯化水溶解，转移至25ml容量瓶，加纯化水定容至刻度，得到供试样品溶液；
2)对照品溶液的制备：量取上述供试样品溶液2ml，用流动相稀释至100ml，再量取稀释液10ml，用流动相稀释至100ml的样品溶液，得到对照品溶液；
3)空白试验：量取稀释液10μl，注入液相色谱仪，记录稀释液的色谱图；
4)供试样品溶液试验：取供试样品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，记录供试样品溶液的色谱图；
5)对照品溶液试验：取对照品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，记录对照品溶液的色谱图；
6)使用供试样品溶液的色谱峰扣除稀释液的色谱峰，与对照品溶液的色谱主峰面积进行对比，计算得到手性杂质的量。
结果显示：本实施例的色谱条件下，l-2-氨基丁酰胺保留时间为4.393min，r-2-氨基丁酰胺的保留时间为6.149min，各峰之间的分离度大于2.0，r-2-氨基丁酰胺手性异构体杂质的含量为0.13％。
对比例1：
同实施例1，不同之处在于流动相为ph＝3.5的hclo4溶液。供试样品同实施例1，实验结果显示，本实施例的色谱条件下，l-2-氨基丁酰胺保留时间为4.767min，r-2-氨基丁酰胺的保留时间为5.903min，各峰之间的分离度小于1.5，r-2-氨基丁酰胺手性异构体杂质的含量为0.11％。
对比例2：
同实施例1，不同之处在于柱温为25℃。供试样品同实施例1，实验结果显示，本实施例的色谱条件下，l-2-氨基丁酰胺保留时间为4.758min，r-2-氨基丁酰胺的保留时间为5.899min，各峰之间的分离度小于1.5，r-2-氨基丁酰胺手性异构体杂质的含量为0.12％。