一种微柱凝集抗人球蛋白检测卡的制作方法

本实用新型涉及一种微柱凝集抗人球蛋白检测卡，属于医学
技术领域：
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背景技术：
：抗人球蛋白实验是由Coombs等于1945年实用新型的经典的血清学方法，又称为Coombs实验，主要用于检测IgG、IgA等抗体参与的抗原反应，也可以测定补体组分C3、C4片段参与的免疫反应，包括直接抗人球蛋白实验DAT和间接抗人球蛋白实验IAT。微柱凝胶抗人球蛋白检测卡是近来逐渐兴起的一项免疫检测新方法，是不完全抗体与相应抗原的红细胞，在含有抗人球蛋白凝胶介质中进行的抗人球蛋白的试验。该法是凝胶柱与抗人球蛋白实验检测法相结合的产物，1984年法国Dr.YvesL即ierre首先实用新型此方法，微柱凝胶介质实验技术是分子筛技术和免疫技术相结合的产物，其实质是一种红细胞抗原与相应抗体在微柱管中利用凝胶介质的凝集反应。该技术基于游离的红细胞和凝集细胞是否能通过特殊结构的凝胶介质，从而使不同状态的红细胞得以分离这一原理进行。特定配比的葡聚糖凝胶分装于特制的微柱中，其上层为“反应池”(红细胞抗原与相应抗体结合区)，下层为“分离池”。在一定的离心力作用下，没有与抗体结合的游离红细胞因体积小而能通过凝胶层，沉淀于底部，形成“细胞扣”，即是阴性反应；与特异性抗体结合或凝聚的红细胞因体积大而被凝聚阻滞不能通过凝聚层，留于凝聚介质的顶部或悬浮于凝胶中，即是阳性反应。与传统试管法抗球蛋白试验比较，微柱凝胶抗人球蛋白检测卡省略了传统的试管液体介质繁琐的洗涤程序，也省去了必须在阴性结果试管中加入不完全抗体致敏的红细胞以确认阴性结果是否正确的步骤，具有标本用量少、操作简便、省时、人为因素小、易于标准化及自动化、结果易判读并可长期保存等优点，适于大批量标本的检测。在国外微柱凝胶抗人球蛋白检测卡已成为常规广泛应用于血型鉴定、不规则抗体检测及交叉配血等各种血型血清学试验。近年来，国内已开始采用进口微柱凝胶抗人球蛋白卡进行不规则抗体的筛选和鉴定、致敏红细胞的检测等，但由于其售价高、设备昂贵，严重影响其在国内普及，此外，还存在如下缺陷：一是，售价高、设备昂贵，严重影响其在国内普及；二是，当操作者为新入职工作者时，有可能把握不准抗体筛选红细胞的浓度(红细胞需要配成1％浓度)，从而导致结果不准,增加实验误差。三是，当操作者极度疲劳，尤其是独自一人上班时，有将其它红细胞当做不规则抗体添加的风险，从而增加实验误差。四是，耗时长，步骤多，不能排除无临床意义的抗体的干扰。鉴于此，有必要提供一种新型的微柱凝集抗人球蛋白检测卡，以解决现有技术的不足。技术实现要素：本实用新型的目的之一，是提供一种微柱凝集抗人球蛋白检测卡。本实用新型的微柱凝集抗人球蛋白检测卡，结构简单，可以减少人为误差，提高结果准确性，特异性高，灵敏度高，重复性好，操作简便快捷。本实用新型解决上述技术问题的技术方案如下：一种微柱凝集抗人球蛋白检测卡，包括卡体，所述卡体为顶部敞口的中空结构，所述卡体内设有隔板，所述卡体的内部通过所述隔板分为左右两个检测室，所述两个检测室内分别设有三个微柱凝胶管和五个微柱凝胶管，所述卡体的顶部设有封盖所有所述微柱凝胶管管口的密封膜，且所述密封膜在所述隔板处断开，所述密封膜位于所述卡体的左右两端分别设有易撕条，所述卡体的正面和反面对应所述两个检测室的位置设有标志贴，其中一个所述标志贴的中间位置设有书写条。在上述技术方案的基础上，本实用新型还可以做如下改进。进一步，所述卡体的材料为聚氨树脂。进一步，所述两个检测室分别为第一检测室和第二检测室，其中，所述第一检测室内设有的三个所述微柱凝胶管分别为用于检测不规则抗体Ⅰ的微柱凝胶管、用于检测不规则抗体Ⅱ的微柱凝胶管和用于检测不规则抗体Ⅲ的微柱凝胶管；所述第二检测室内设有的五个所述微柱凝胶管分别为用于交叉配血的第一主测微柱凝胶管、用于交叉配血的第一次测微柱凝胶管、用于交叉配血的第二主测微柱凝胶管、用于交叉配血的第二次测微柱凝胶管，以及对照微柱凝胶管。采用上述进一步的有益效果是：第一检测室内设有用于检测不规则抗体Ⅰ的微柱凝胶管、用于检测不规则抗体Ⅱ的微柱凝胶管和用于检测不规则抗体Ⅲ的微柱凝胶管，实验操作者无需配置不规则抗体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及抗原试剂，也无需添加不规则抗体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及抗原试剂到上述三个微柱凝胶管中，只需直接添加患者的血清或血浆到上述三个微柱凝胶管中，离心后，就可以直接观察实验结果。第二检测室内设有用于交叉配血的第一主测微柱凝胶管、用于交叉配血的第一次测微柱凝胶管、用于交叉配血的第二主测微柱凝胶管、用于交叉配血的第二次测微柱凝胶管，以及对照微柱凝胶管，主要是检测受血者血清中有无破坏供血者红细胞的抗体，保证受血者与供血者的血液间无可检出的不相配合的抗原、抗体成分。进一步，每个所述微柱凝胶管的装量均为150μl-200μl。采用上述进一步的有益效果是：上述装量，既可以满足2人份的检测需要，也可以防止微柱管里的标本在离心时飞溅出来。更进一步，所述用于检测不规则抗体Ⅰ的微柱凝胶管中，含有抗体筛选红细胞Ⅰ、抗原试剂、红细胞保养液、混悬于缓冲液中的葡聚糖、混悬于缓冲液中的防腐剂和混悬于缓冲液中的抗人球蛋白。更进一步，所述用于检测不规则抗体Ⅱ的微柱凝胶管中，含有抗体筛选红细胞Ⅱ、抗原试剂、红细胞保养液、葡聚糖、混悬于缓冲液中的葡聚糖、混悬于缓冲液中的防腐剂和混悬于缓冲液中的抗人球蛋白。更进一步，所述用于检测不规则抗体Ⅲ的微柱凝胶管中，含有抗体筛选红细胞Ⅲ、抗原试剂、红细胞保养液、葡聚糖、混悬于缓冲液中的葡聚糖、混悬于缓冲液中的防腐剂和混悬于缓冲液中的抗人球蛋白。更进一步，所述抗原试剂中含有抗原D、C、E、c、e、M、N、S、s、P1、Lea、Leb、K、k、Fya、Fyb、JKa和JKb。更进一步，所述用于交叉配血的第一主测微柱凝胶管、所述用于交叉配血的第一次测微柱凝胶管、所述用于交叉配血的第二主测微柱凝胶管、所述用于交叉配血的第二次测微柱凝胶管和所述对照微柱凝胶管中，均含有混悬于缓冲液中的葡聚糖、混悬于缓冲液中的防腐剂和混悬于缓冲液中的抗人球蛋白。更进一步，所述葡聚糖为交联葡聚糖G50、交联葡聚糖G75、交联葡聚糖G100的一种或几种。进一步，所述密封膜由底胶层、铝箔层及塑料薄膜层组成；所述底胶层和所述塑料薄膜层分别涂覆于所述铝箔层的两面，且所述底胶层封盖住所述微柱凝胶管的管口。采用上述进一步的有益效果是：实验时，先撕开密封膜，添加完待检标本血液后，再黏上密封膜。设有密封膜，既可以防止微柱管里的试剂挥发产生气溶胶，也可以防止微柱管里的标本在离心时飞溅出来。进一步，所述书写条的表面粗糙。采用上述进一步的有益效果是：书写文字更加方便。一、本实用新型的微柱凝集抗人球蛋白检测卡的技术参数：于2-25℃室温、避光条件下保存，有效期为一年，在有效期内使用。本实用新型的微柱凝集抗人球蛋白检测卡用于不规则抗体筛查、交叉配血或直接抗人球蛋白试验(DirectAntiglobulinTest，DAT)。具有如下技术标准：1、外观每个微柱凝胶管内的凝胶呈均匀的淡蓝绿色或乳白色，胶面上端有1mm-5mm澄清透明液体，凝胶之间无气泡或其它异物。2、灵敏度与按照体积比1:32稀释的抗DIgG试剂致敏的红细胞反应，产生肉眼可见的凝集反应；检测Rh血型系统的IgG型抗D抗体效价和Duffy系统的IgG型抗Fya抗体效价均不低于同步间接抗人球蛋白试管法测定结果；检测补体或C3D抗体致敏的红细胞产生阳性反应。3、特异性抗IgG组分特异性：检测Rh血型系统的IgG型抗D抗体，与O型RhD阳性红细胞产生阳性凝集反应，而与O型RhD阴性红细胞产生阴性反应；检测Duffy系统的IgG型抗Fya抗体，与O型Fya阳性红细胞产生阳性凝集反应，而与O型Fya阴性红细胞产生阴性反应；抗C3D组分特异性：与C3D抗体致敏的红细胞产生阳性反应，与既无IgG型抗体又无C3D致敏的红细胞产生阴性反应。二、本实用新型的微柱凝集抗人球蛋白检测卡用于不规则抗体筛查的使用方法：步骤1：取待检血浆或血清50μl，分别加入用于检测不规则抗体Ⅰ的微柱凝胶孔、用于检测不规则抗体Ⅱ的微柱凝胶孔和用于检测不规则抗体Ⅲ的微柱凝胶孔中，步骤2：先于900rpm离心2min，再于1500rpm离心3min，取出肉眼判定结果。结果判断标准，如图4所示。原理说明：阳性结果：红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中，为阳性反应。阴性结果：红细胞抗原无相应的抗体结合，不出现特异性抗原抗体复合物，红细胞沉于微柱凝胶的尖底部，为阴性反应。反应强度：特异性红细胞抗原抗体复合物位于胶表面，为强阳性反应；复合物在胶中，为弱阳性反应；愈靠近胶底部颗粒愈小，反应愈弱。具体如表1所示。表1反应强度表反应强度现象及说明4+红细胞复合物(凝集)位于凝胶表面3+大部分红细胞复合物位于凝胶表面，少部分位于凝胶中部2+大部分细胞复合物位于凝胶中部，少部分位于凝胶中上部1+红细胞复合物位于凝胶中下部±与同一卡中阴性管结果对照，如与阴性结果有差别，即为±-红细胞完全沉积在凝胶管尖底部完全溶血凝胶和液体无凝集或未凝集的红细胞，液体出现透明清澈红色不完全溶血残留红细胞在胶表面、胶中或胶底部，液体出现透明清澈红色混合凝集红细胞复合物位于凝胶表面和凝胶底部三、本实用新型的微柱凝集抗人球蛋白检测卡用于交叉配血试验的使用方法：步骤1：分离全血中的人血红细胞和血清(或血浆)，用生理盐水或LISS溶液将待检红细胞配制成0.8-1％(体积百分比)红细胞溶液，待用。步骤2：取待检供血者红细胞溶液50μl和待检受血者血浆50μl加入到用于交叉配血的第一主测微柱凝胶管，取待检受血者红细胞溶液50μlμ和待检供血者血浆50μl加入到用于交叉配血的第一次测微柱凝胶管，依次类推到用于交叉配血的第二主测微柱凝胶管、用于交叉配血的第二次测微柱凝胶管，取患者的红细胞和血浆各50μl加入到对照微柱凝胶管中。步骤3：结果判读标准：红细胞悬浮于凝胶表面或凝胶中为阳性结果，红细胞全部沉降至微管底部为阴性结果。结果判读标准，如图4所示。四、本实用新型的微柱凝集抗人球蛋白检测卡用于直接抗人球蛋白试验(DAT)的使用方法：步骤1：分离全血中的人血红细胞和血清(或血浆)，用生理盐水或LISS溶液将待检红细胞配制成0.8-1％(体积百分比)红细胞溶液，待用。步骤2：取待检红细胞溶液50μl，加入用于交叉配血的第一主测微柱凝胶管、用于交叉配血的第一次测微柱凝胶管、用于交叉配血的第二主测微柱凝胶管或用于交叉配血的第二次测微柱凝胶管中的任一管中；步骤3：先于900rpm离心2min，再于1500rpm离心3min，取出肉眼判定结果。结果判断标准，如图4所示。本实用新型的有益效果：(1)本实用新型的微柱凝集抗人球蛋白检测卡，结构简单，可以减少人为误差，提高结果准确性，特异性高，灵敏度高，重复性好，操作简便快捷。(2)本实用新型的微柱凝集抗人球蛋白检测卡，尽可能多的检测出有临床意义的抗体，尽可能少的检测出无临床意义的抗体，并尽快完成抗体检测。(3)有技术的抗人球蛋白检测过程中，实验操作者一般先添加红细胞，然后，再加患者的血清或血浆。本实用新型的微柱凝集抗人球蛋白检测卡，在其中的3个微柱凝胶管中事先分别添加好了抗体筛选红细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及红细胞保养液，有益于延长了抗原抗体反应，减少了因抗原抗体反应时间较短和漏检某些弱型抗体的情况，提高了正确的检出率。附图说明图1为本实用新型的微柱凝集抗人球蛋白检测卡的后视图。图2为本实用新型的微柱凝集抗人球蛋白检测卡的前视图。图3为图1中部件5的局部放大图。其中，各标号所代表的部件如下：1、卡体，2、隔板，3、检测室，31、第一检测室，32、第二检测室，4、微柱凝胶管，41、用于检测不规则抗体Ⅰ的微柱凝胶管，42、用于检测不规则抗体Ⅱ的微柱凝胶管，43、用于检测不规则抗体Ⅲ的微柱凝胶管，44、用于交叉配血的第一主测微柱凝胶管，45、用于交叉配血的第一次测微柱凝胶管，46、用于交叉配血的第二主测微柱凝胶管，47、用于交叉配血的第二次测微柱凝胶管，48、对照微柱凝胶管，5、密封膜，51、底胶层，52、铝箔层，53、塑料薄膜层，6、易撕条，7、标志贴，8、书写条。图4为使用本实用新型的微柱凝集抗人球蛋白检测卡的结果判断图。其中，从左至右的微柱凝胶管，分别代表实验结果为4+、3+、2+、1+、±、-、完全溶血、不完全溶血和混合凝集。具体实施方式以下结合具体附图对本实用新型的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本实用新型，并非用于限定本实用新型的范围。如图1-图2所示，本实施例的微柱凝集抗人球蛋白检测卡，包括卡体1，所述卡体1为顶部敞口的中空结构，所述卡体1内设有隔板2，所述卡体1的内部通过所述隔板2分为左右两个检测室3，所述两个检测室3内分别设有三个微柱凝胶管4和五个微柱凝胶管4，所述卡体1的顶部设有封盖所有所述微柱凝胶管4管口的密封膜5，且所述密封膜5在所述隔板2处断开，所述密封膜5位于所述卡体1的左右两端分别设有易撕条6，所述卡体1的正面和反面对应所述两个检测室3的位置设有标志贴7，其中一个所述标志贴7的中间位置设有书写条8。所述卡体1的材料为聚氨树脂。所述两个检测室3分别为第一检测室31和第二检测室32，其中，所述第一检测室31内设有的三个所述微柱凝胶管4分别为用于检测不规则抗体Ⅰ的微柱凝胶管41、用于检测不规则抗体Ⅱ的微柱凝胶管42和用于检测不规则抗体Ⅲ的微柱凝胶管43；所述第二检测室32内设有的五个所述微柱凝胶管4分别为用于交叉配血的第一主测微柱凝胶管44、用于交叉配血的第一次测微柱凝胶管45、用于交叉配血的第二主测微柱凝胶管46、用于交叉配血的第二次测微柱凝胶管47，以及对照微柱凝胶管48。第一检测室31内设有用于检测不规则抗体Ⅰ的微柱凝胶管41、用于检测不规则抗体Ⅱ的微柱凝胶管42和用于检测不规则抗体Ⅲ的微柱凝胶管43，实验操作者无需配置不规则抗体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及抗原试剂，也无需添加不规则抗体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及抗原试剂到上述三个微柱凝胶管中，只需直接添加患者的血清或血浆到上述三个微柱凝胶管中，离心后，就可以直接观察实验结果。第二检测室32内设有用于交叉配血的第一主测微柱凝胶管44、用于交叉配血的第一次测微柱凝胶管45、用于交叉配血的第二主测微柱凝胶管46、用于交叉配血的第二次测微柱凝胶管47，以及对照微柱凝胶管48，主要是检测受血者血清中有无破坏供血者红细胞的抗体，保证受血者与供血者的血液间无可检出的不相配合的抗原、抗体成分。每个所述微柱凝胶管4的装量均为150μl-200μl。上述装量，既可以满足2人份的检测需要，也可以防止微柱管里的标本在离心时飞溅出来。所述用于检测不规则抗体Ⅰ的微柱凝胶管41中，含有抗体筛选红细胞Ⅰ、抗原试剂、红细胞保养液、混悬于缓冲液中的葡聚糖、混悬于缓冲液中的防腐剂和混悬于缓冲液中的抗人球蛋白。所述用于检测不规则抗体Ⅱ的微柱凝胶管42中，含有抗体筛选红细胞Ⅱ、抗原试剂、红细胞保养液、葡聚糖、混悬于缓冲液中的葡聚糖、混悬于缓冲液中的防腐剂和混悬于缓冲液中的抗人球蛋白。所述用于检测不规则抗体Ⅲ的微柱凝胶管43中，含有抗体筛选红细胞Ⅲ、抗原试剂、红细胞保养液、葡聚糖、混悬于缓冲液中的葡聚糖、混悬于缓冲液中的防腐剂和混悬于缓冲液中的抗人球蛋白。所述抗原试剂中含有抗原D、C、E、c、e、M、N、S、s、P1、Lea、Leb、K、k、Fya、Fyb、JKa和JKb。所述用于交叉配血的第一主测微柱凝胶管44、所述用于交叉配血的第一次测微柱凝胶管45、所述用于交叉配血的第二主测微柱凝胶管46、所述用于交叉配血的第二次测微柱凝胶管47和所述对照微柱凝胶管48中，均含有混悬于缓冲液中的葡聚糖、混悬于缓冲液中的防腐剂和混悬于缓冲液中的抗人球蛋白。所述葡聚糖为交联葡聚糖G50、交联葡聚糖G75、交联葡聚糖G100的一种或几种。如图3所示，所述密封膜5由底胶层51、铝箔层52及塑料薄膜层53组成；所述底胶层51和所述塑料薄膜层53分别涂覆于所述铝箔层52的两面，且所述底胶层51封盖住所述微柱凝胶管4的管口。实验时，先撕开密封膜，添加完待检标本血液后，再黏上密封膜。设有密封膜，既可以防止微柱管里的试剂挥发产生气溶胶，也可以防止微柱管里的标本在离心时飞溅出来。所述书写条8的表面粗糙。书写文字更加方便。以上所述仅为本实用新型的较佳实施例，并不用以限制本实用新型，凡在本实用新型的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。当前第1页1 2 3