心肾两项荧光免疫层析试纸条、测试板及试剂盒的制作方法

本实用新型涉及生物技术的荧光免疫层析检测领域，特别涉及一种心肾两项荧光免疫层析试纸条、测试板及试剂盒。

背景技术：

心肾两项是对B型钠尿肽(B-type natriuretic peptide,BNP)和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(Neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)的简称。BNP 是一种心脏神经内分泌激素，可特异性的在心室容量负荷过重、压力负荷过重及室壁张力增加的情况下由心室肌细胞分泌，对于定量判断患者是否患有心力衰竭，具有重要临床意义，并且与心衰的严重程度、预后也存在密切相关。NGAL是脂质运载蛋白家族成员，心脏手术后2小时内显著升高，对术后急性肾损伤预测敏感度、特意性均较高，是术后急性肾损伤的早期生物标志物。

在临床中，对BNP和NGAL的检测可以对心衰患者的临床治疗提供有价值的指导，并可对患者再入院及死亡风险进行评估。还可以对需要进行影像学检查的患者的心肾功能进行评估，防止造影剂对患者产生较大健康风险。

目前，心肾两项的检测主要采用ELLISA或者化学发光等技术，但这些现有的测定方法和工具只能单独检测，也就是说无法同时检测这两项指标，并且还需要对待检的血液样本进行预处理，这导致检测时间较长，耽误了诊断和治疗时间。此外，现有的测定方法和工具抗干扰性能不佳，待检血液样本中的生物大分子多种多样，可以与测定工具，如测试板的样品垫和检测条等发生非特异性吸附，导致检测的准确性和稳定性降低，使测定值偏离实际值，医生依据这种不准确的测定结果得出的诊断结果可能是错误的，延误治疗。

综上所述，现有心肾两项的检测方法和工具存在无法对两项指标同时检测，且需要对待检血液样品进行预处理而费时费力，检测准确性和稳定性低，测定值偏离实际值影响诊断结果的问题。因此，需要设计一种能够对心肾两项进行快速、便捷、准确、可靠的试纸条、测试板及试剂盒。

技术实现要素：

本实用新型的目的在于，提供一种心肾两项荧光免疫层析试纸条、测试板及试剂盒，结合荧光免疫分析仪实现对待检样品中心肾两项的快速、便捷、准确、可靠的检测。

为了解决上述技术问题，本实用新型提供一种心肾两项荧光免疫层析试纸条，该心肾两项荧光免疫层析试纸条包括样品垫、检测膜和吸水垫。

所述样品垫包括玻璃纤维膜。

所述检测膜包括硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜。更进一步地，检测膜为硝酸纤维素膜。

所述吸水垫包括吸水纸。

所述玻璃纤维、硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜和吸水纸均为市售的商品。

所述样品垫、检测膜和吸水垫顺次搭接。如附图1和附图2所示，样品垫与检测膜的一端搭接，检测膜的另一端与吸水垫搭接。相互搭接的样品垫与检测膜、检测膜与吸水垫的上下位置关系可以互换，不局限于附图2所示的上下位置关系。

所述样品垫与检测膜、检测膜与吸水垫之间接触的区域可以不使用任何辅助固定用品，例如将样品垫、检测膜和吸水垫放入卡槽中保持其特定的位置关系。也可以使用粘接的方式保持其特定的位置关系。

所述样品垫、检测膜和吸水垫的外形尺寸为常规，以能够实现测定目标为限。

所述样品垫的制备方法如下：步骤1)浸泡：将样品垫放入封闭剂组合物的溶液中浸泡0.5小时～2.0小时；步骤2)干燥：将步骤1)的样品垫取出，于20℃～40℃中干燥3小时～7小时。

所述封闭样品垫所用的封闭剂组合物包括聚氧乙烯蓖麻油、聚乙烯醇、海藻糖、蔗糖和缓冲液，聚氧乙烯蓖麻油、聚乙烯醇、海藻糖和蔗糖在所述缓冲液中的质量浓度百分比为(0.25％～0.55％):(0.05％～0.30％):(1.0％～6％):(10％～20％)；

所述缓冲液包括磷酸缓冲液，其磷酸根浓度为40mmol/L至100mmol/L，其pH 值为6.0至8.0。

采用上述封闭方法制备的样品垫具有较低的非特异性吸附作用，对待检样本中的目标物质吸附少，保证了目标物质与荧光抗体的结合，提高了检测的准确度；使样品垫与荧光抗体之间的吸附作用力处于合理区间，提高免疫层析试纸使用中荧光抗体的解吸率，降低了检测限，提高了检测精度；使免疫层析试纸适用于对全血样本的检测，无需对全血样本进行预处理，简化了检测过程。

所述样品垫上涂布有B型钠尿肽荧光抗体和偶中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白荧光抗体，可分别简称为“BNP荧光抗体”和“NGAL荧光抗体”，也可分别称为“偶联荧光微球的B型钠尿肽单克隆抗体”和“偶联荧光微球的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体”。

所述样品垫上的BNP荧光抗体和NGAL荧光抗体的涂布量均为0.1μg～2μg。

所述BNP荧光抗体和NGAL荧光抗体，其B型钠尿肽单克隆抗体、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体和荧光微球是市场上销售的商品抗体和荧光材料。

所述BNP荧光抗体和NGAL荧光抗体的制备方法均使用本领域常规技术制备，以BNP荧光抗体为例，具体步骤如下：先用透析的方法去除B型钠尿肽单克隆抗体试剂中的叠氮化钠；然后用浓度50mM的pH6.0的2-(N-吗啉代)乙磺酸(MES) 缓冲液将抗体稀释到1mg/mL；将微球加入到浓度50mM的pH6.0的2-(N-吗啉代) 乙磺酸(MES)缓冲液中，超声振荡10min，使其分散；在上述悬浮液中加入1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，使其终浓度为10mg/mL，在26℃下孵育15min，将微球活化；将微球悬浮液离心，去除上清液，再加入等体积的浓度 50mM的pH6.0的2-(N-吗啉代)乙磺酸(MES)缓冲液，重新悬浮微球，离心并去除上清液；再用等体积的浓度50mM的pH6.0的2-(N-吗啉代)乙磺酸(MES) 缓冲液，重新悬浮微球，加入上述抗体溶液，26℃下反应5h，期间不停振荡或者搅拌；加入乙醇胺，混合振荡15min；最后将含有BNP荧光抗体悬浮液离心，去除上清液，待用。NGAL荧光抗体的制备方法与BNP荧光抗体的制备方法相同，仅将相关步骤的B型钠尿肽单克隆抗体替换为中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体即可。

本实用新型所述的BNP荧光抗体和NGAL荧光抗体(荧光抗体)还经过封闭步骤。

以BNP荧光抗体的封闭为例，所述的封闭步骤包括：将洗涤后的BNP荧光抗体悬浮于封闭剂组合物的溶液中进行封闭。

所述封闭BNP荧光抗体所用的封闭剂组合物包括聚氧乙烯蓖麻油、聚乙烯醇、海藻糖、蔗糖和缓冲液，聚氧乙烯蓖麻油、聚乙烯醇、海藻糖和蔗糖在所述缓冲液中的质量浓度百分比为(0.02％～0.25％):(0.05％～0.30％):(1.0％～6％):(10％～20％)；

所述缓冲液包括磷酸缓冲液，其磷酸根浓度为10mmol/L至40mmol/L，其pH 值为6.0至8.0。

NGAL荧光抗体的封闭步骤与BNP荧光抗体的封闭相同。

经上述封闭方法处理后的荧光抗体具有特殊的性质，能够使荧光抗体在试纸条制备过程中吸附于样品垫上，而在使用试纸条检测过程中使荧光抗体容易地从样品垫上解吸下来，随样品中的液体或者测试液体移动到检测膜，并移动到相应位置，使试纸条具备较好检测能力。经所述的封闭方法处理后，使荧光抗体的非特异性吸附作用降低，减少了对血液样品中其他生物大分子物质的吸附，可以使检测准确度和稳定性提高。

所述检测膜上依次设置有第一检测线、第二检测线和质控线，第一检测线、第二检测线和质控线相互平行，其中第一检测线靠近样品垫，质控线远离样品垫。

所述质控线与吸水垫之间的距离、第二检测线与质控线之间的距离、第一检测线与第二检测线之间的距离均为本领域的常规设置。

所述第一检测线、第二检测线分别涂布有B型钠尿肽单克隆抗体、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体中的任意一种，且第一检测线、第二检测线所涂布的单克隆抗体互不相同。

例如，作为一个示例，第一检测线涂布有B型钠尿肽单克隆抗体，第二检测线涂布有中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体；作为另一示例，第一检测线涂布有中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体，第二检测线涂布有B型钠尿肽单克隆抗体。

所述第一检测线、第二检测线上涂布的单克隆抗体的量为0.1μg～2.0μg。

所述质控线涂布有羊抗鼠IgG多克隆抗体。

所述质控线上涂布的羊抗鼠IgG多克隆抗体的量为0.1μg～3.0μg。

所述羊抗鼠IgG多克隆抗体为市场上销售的商品抗体。

所述检测膜的制备工艺如下：以连续状态运行的划膜、划膜后干燥工序，以及设置于划膜后干燥工序之后、以连续状态运行的膜封闭、封闭后干燥工序；所述划膜、划膜后干燥工序的运行时间为2～4min，所述膜封闭、封闭后干燥工序的运行时间为3～6min。

所述检测膜的制备工艺的步骤如下：

a、划膜、划膜后干燥：

a1、划膜：取NC膜卷安置在出卷盘上，然后经过划膜仪，将稀释至所需浓度的抗体溶液在NC膜上划线或喷线；

a2、划膜后干燥：NC膜后端进行划线的同时，已完成划线的NC膜前端即刻进入到提前预热至干燥温度的干燥塔内，完成干燥；

b、膜封闭、封闭后干燥工序

b1、膜封闭：将经步骤a2干燥后的NC膜，匀速通过加有封闭液的浸液槽，对 NC膜进行封闭；

所述封闭液主要由封闭组分、表面活性剂组分溶解于pH7.0～8.0、50～60mM的 PB溶液中制成；所述封闭组分包括PEG4000、牛血清蛋白、明胶、甲醛、酪蛋白中的至少一种，所述封闭组分在封闭液中的质量百分含量为0.5～1.0％；所述表面活性剂组分包括tween-20、Pluranic L64、Cremophor EL、Surfynol 485、Tetronic 1307、 TRITON X-100中的至少一种，所述表面活性剂组分在封闭液中的质量百分含量为 0.5～1.0％；

b2、封闭后干燥：NC膜后端进行封闭的同时，已完成封闭的NC膜前端即刻进入到提前预热至干燥温度的干燥塔内，完成干燥后收卷。

所述步骤a2、b2中所述干燥温度均为35～40℃。

所述封闭液主要由封闭组分PEG4000、表面活性剂组分Surfynol 485溶解于pH 7.0、50mM的PB溶液中并调节封闭液pH至7.0制得；所述PEG4000、Surfynol 485 在封闭液中的质量百分含量分别为0.5％、0.6％。

所述封闭液中的表面活性剂组分还包括Pluranic L64，所述Pluranic L64在封闭液中的质量百分含量为0.2％。

使用上述具有高灵敏度、低检测限特性的检测膜，可以有效避免因血液样品中 BNP和NGAL浓度较低而显示检测值为零，无法作出正确的医学判断，影响诊断和治疗的情况；也可以有效避免假阳性的诊断结果(例如，血液样品中BNP实际浓度约为110pg/mL，其他测试板的检测值显示为90pg/mL，低于诊断标准100pg/mL，而被诊断为阴性的情况)，造成误诊，耽误治疗最佳时间的情况。

采用上述样品垫封闭方法得到的样品垫能够减少对待测物质的非特异性吸附。采用上述荧光抗体封闭方法得到的荧光抗体能够减少对干扰物质的吸附，并且能够与样品垫较好的分离，进入检测膜。采用上述检测膜制备方法制备的检测膜具有高灵敏度、低检测限的特性，可使检测膜能够有效避免其他物质的干扰，对BNP和 NGAL的检测具有更高的特异性。上述样品垫、荧光抗体和检测膜的特性使荧光免疫层析测定BNP的最低检测限达到5pg/mL，其检测范围为5pg/mL～5000pg/mL，线性相关系数r≥0.95；NGAL的最低检测限达到60ng/mL，其检测范围为60ng/mL～ 1300ng/mL，线性相关系数r≥0.95；并且测定结果的准确度较高，其标准偏差不超过 6％。

为了解决上述技术问题，本实用新型还提供一种心肾两项荧光免疫层析测试板，该心肾两项荧光免疫层析测试板包括卡壳和设置在卡壳内的试纸条。

所述卡壳包括上壳和下壳上壳上设置有加样孔和观察窗，所述加样孔对应试纸条的样品垫，所述观察窗对应检测膜上的第一检测线、第二检测线和质控线。

所述下壳上侧设置有固定试纸条的卡槽，其形状与放置其中的试纸条相同。

所述加样孔和观察窗的形状包括但不限于附图4所示的形状，例如加样孔还可以是椭圆形或者四边形等，观察窗还可以是长椭圆形，四角具有弧度的长方形等。

所述卡壳的上壳和下壳可以采用可拆卸式拼接而成，其内部的试纸条可以根据需要更换，卡壳可重复利用；也可以采用焊接的方式，例如用超声焊接的方式将上壳和下壳焊接起来。

所述上壳的上表面还喷涂有二维码，供荧光免疫分析仪识别到待检测的测试卡，省去了人工输入等操作，提高了检测速度，节省了操作时间，确保了检测分析的准确性。

所述设置在卡壳内的试纸条是前文所述心肾两项荧光免疫层析试纸条。

使用所述测试板进行心肾两项浓度测定时，所需的待检样品量极少，例如仅需 100μL～300μL。

为了解决上述技术问题，本实用新型还提供一种心肾两项荧光免疫层析试剂盒，该心肾两项荧光免疫层析试剂盒包括心肾两项荧光免疫层析测试板、样品管和射频识别卡。

所述试剂盒中装有多个测试板和样品管，测试板和样品管还可以分别独立包装，以避免不必要的外界污染，影响检测的准确性和稳定性。

所述射频识别卡内储存有标准曲线。

本实用新型所述试剂盒检测原理及过程如下：将规定体积的待测血液样品加到样品垫上，待测血液样品中的BNP会与偶联荧光微球的BNP单克隆抗体结合，形成荧光抗体-BNP复合物，NGAL会与偶联荧光微球的NGAL单克隆抗体结合，形成荧光抗体-NGAL复合物，此时样品垫上还有未与BNP结合的偶联荧光微球的BNP 单克隆抗体和未与NGAL结合的偶联荧光微球的NGAL单克隆抗体。荧光抗体-BNP 复合物、荧光抗体-NGAL复合物、未与BNP结合的偶联荧光微球的BNP单克隆抗体和未与NGAL结合的偶联荧光微球的NGAL单克隆抗体通过毛细作用层析至第一检测线和第二检测线处，第一检测线上固定的BNP单克隆抗体与荧光抗体-BNP复合物的BNP上另一位点结合，形成偶联荧光微球的BNP单克隆抗体-BNP-BNP单克隆抗体复合物，该复合物被保留在第一检测线上；第二检测线上固定的NGAL单克隆抗体与荧光抗体-NGAL复合物的NGAL上另一位点结合，形成偶联荧光微球的 NGAL单克隆抗体-NGAL-NGAL单克隆抗体复合物，该复合物被保留在第二检测线上。而未与BNP结合的偶联荧光微球的BNP单克隆抗体不与第一检测线上固定的 BNP单克隆抗体结合，未与NGAL结合的偶联荧光微球的NGAL单克隆抗体不与第二检测线上固定的NGAL单克隆抗体结合，它们均可以越过第一检测线和第二检测线，层析至质控线，被质控线上的羊抗鼠IgG多克隆抗体捕获，在质控线形成羊抗鼠IgG多克隆抗体-偶联荧光微球的BNP单克隆抗体复合物和羊抗鼠IgG多克隆抗体-偶联荧光微球的NGAL单克隆抗体复合物。由于偶联荧光微球的BNP单克隆抗体被保留在第一检测线上，偶联荧光微球的NGAL单克隆抗体被保留在第二检测线上，偶联荧光微球的BNP单克隆抗体和联荧光微球的NGAL单克隆抗体被保留在质控线上，血液样品中BNP和NGAL浓度高，则结合到第一检测线和第二检测线的荧光物质多；血液样品中BNP和NGAL浓度低，则结合到质控线的荧光物质多，所以可以使用荧光免疫分析仪检测两条线上的荧光强度，将荧光强度值代入标准曲线方程进行计算，可以得到血液样品中BNP和NGAL的浓度。

本实用新型提供的心肾两项荧光免疫层析试纸条、测试板及试剂盒，克服了现有技术心肾两项检测过程中无法同时对BNP和NGAL的浓度进行检测，并且需要对待检样品进行离心去除血细胞等预处理，使检测时间延长的缺陷；还克服了样品垫对BNP和NGAL非特异性吸附较强，使检测值低于实际值，严重影响诊断结果的不足，能够实现对待检样品中心肾两项的快速、便捷、准确、可靠的检测。

附图说明

图1为本实用新型的心肾两项荧光免疫层析试纸条的结构示意图；

图2为本实用新型的心肾两项荧光免疫层析试纸条的侧面示意图；

图3为本实用新型的心肾两项荧光免疫层析试纸条和测试板下壳8的相对位置示意图；

图4为本实用新型的测试板上壳7示意图；

图5为本实用新型的心肾两项荧光免疫层析测试卡的立体示意图；

其中：

1、样品垫，2、检测膜，3、吸水垫，4、第一检测线，5、第二检测线，6、质控线，7、上壳，8、下壳，9、加样孔，10、观察窗。

本实用新型的效果

采用本实用新型的心肾两项荧光免疫层析试纸条、测试板及试剂盒的有益效果是：①大幅缩短了心肾两项BNP和NGAL的检测时间，实现了心肾两项的同时快速检测，从而可尽早对心肾衰竭等危重病症进行确诊，为相关病症的有效救治争取了时间；②提高了对心肾两项BNP和NGAL检测的准确性，减少临床诊断错误的比例；③无需对待检血液样品进行预处理，简化了心肾两项检测的操作步骤，节省了检测时间；④所需样品量少。

具体实施方式

实施例1

采用附图5所示本实用新型的心肾两项荧光免疫层析测试板，其上壳7和下壳8 是通过超声波焊接，其内部设置有如附图1所示的心肾两项荧光免疫层析试纸条，样品垫1和吸水垫3放置在下层，检测膜2放置在样品垫1和吸水垫3的上侧，样品垫1与检测膜2、检测膜2与吸水垫3搭接在一起，即有部分重叠，如附图2所示。试纸条放置在下壳8上侧的卡槽内，如附图3所示。试纸条的样品垫1采用玻璃纤维膜，为使用本实用新型所述的样品垫处理方法得到的玻璃纤维样品垫；偶联荧光微球的BNP单克隆抗体和偶联荧光微球的NGAL单克隆抗体经本实用新型记述的封闭方法处理后，涂布在样品垫1上。试纸条的检测膜2使用硝酸纤维素膜，检测膜2 上设置有第一检测线4、第二检测线5和质控线6，第一检测线4上涂布有BNP单克隆抗体，第二检测线5上涂布有NGAL单克隆抗体，质控线6上涂布有羊抗鼠IgG 多克隆抗体，然后采用本实用新型记述的方法进行封闭处理。第一检测线4、第二检测线5与质控线6平行设置，且都平行于检测膜2的短边，其中第一检测线4靠近样品垫1，质控线6远离样品垫1。在测试板上壳7上侧的观察窗10长边的侧面还喷涂有二维码，储存有测试板识别相关信息。上述测试板放置在试剂盒中，其中还有样品管和射频识别卡，射频识别卡中储存有标准曲线相关数据。

使用试剂盒中的样品管，吸取含BNP浓度为1667pg/mL，含NGAL浓度为300 ng/mL的标准品200μL，将吸取的标准品全部滴加到测试板加样孔9中，将测试板放入荧光免疫分析仪中，荧光免疫分析仪通过扫描测试板上的二维码读取相关信息，荧光免疫分析仪自动调整测定参数(如层析温度、层析时间、荧光激发波长、检测波长等)，若分析仪中储存了该批号的标准曲线，则读取测试板上相关的荧光强度，并直接在荧光免疫分析仪的显示屏可显示出该标准品的浓度。若分析仪中没有读取的批号的标准曲线，则提示操作人员录入射频卡中的相关信息，将储存有标准曲线的射频识别卡放置在荧光免疫分析仪的读卡处，荧光免疫分析仪读取相关标准曲线 (一张卡一个批次信息，同批次的产品只需往分析仪内写入一次批次信息，也可在第一次使用该批次试剂盒时先写入批次信息)，录入后分析仪继续扫描测试板上的荧光值，将荧光强度值代入标准曲线方程进行计算，荧光免疫分析仪的显示屏可显示出BNP和NGAL的浓度。整个检测过程仅耗时约16分钟。

采用同一批次的心肾两项荧光免疫层析测试板对上述含BNP和NGAL的固定浓度标准品进行15次平行测定。再使用方法成熟、稳定性好的测定BNP的ELISA试剂盒和测定NGAL的ELISA试剂盒对同一含BNP和NGAL的固定浓度标准品的 BNP和NGAL浓度分别进行检测，同样各进行15次平行测定。计算两种检测手段得到的测定结果的相关性，两种方法对BNP测定结果的相关系数R＝0.9941，对NGAL 测定结果的相关系数R＝0.9876，表明两者相关性良好，本实用新型的心肾两项荧光免疫层析测试板的测定结果能够达到成熟的ELISA试剂盒的测定结果。但与成熟的 ELISA试剂盒测定方法相比，使用本实用新型的心肾两项荧光免疫层析测试板避免了样品预处理的步骤，减少人工操作，避免了人员操作带来的误差，且测定时间大幅缩短，还可以对BNP和NGAL进行同时测定，实现了BNP和NGAL的快速检测，使用的待检血液样品量仅为200μL。

实施例2

采用附图5所示本实用新型的心肾两项荧光免疫层析测试板，其上壳7和下壳8 是通过卡扣连接，其内部设置有心肾两项荧光免疫层析试纸条，样品垫1和吸水垫3 放置在下层，检测膜2放置在样品垫1和吸水垫3的上侧，样品垫1、检测膜2和吸水垫3的宽度相同，样品垫1与检测膜2、检测膜2与吸水垫3搭接并粘接在一起，即有部分重叠，如附图2所示。试纸条粘在下壳8上侧适当位置，该适当位置是指试纸条的样品垫1和检测膜2上第一检测线4、第二检测线5和质控线6分别与上壳 7的加样孔9和观察窗10相对应。试纸条的样品垫1采用玻璃纤维膜，为使用本实用新型所述的样品垫处理方法得到的玻璃纤维样品垫；偶联荧光微球的BNP单克隆抗体和偶联荧光微球的NGAL单克隆抗体经本实用新型记述的封闭方法处理后，涂布在样品垫1上。试纸条的检测膜2使用硝酸纤维素膜，检测膜2上设置有第一检测线4、第二检测线5和质控线6，第一检测线4上涂布有NGAL单克隆抗体，第二检测线5上涂布有BNP单克隆抗体，质控线6上涂布有羊抗鼠IgG多克隆抗体，然后采用本实用新型记述的方法进行封闭处理。第一检测线4、第二检测线5与质控线 6平行设置，且都平行于检测膜的短边，其中第一检测线4靠近样品垫1，质控线6 远离样品垫1。在测试板上壳7上侧的观察窗10长边的侧面还喷涂有二维码，储存有测试板识别相关信息。上述测试板放置在试剂盒中，其中还有样品管和射频识别卡，射频识别卡中储存有标准曲线相关数据。

使用试剂盒中的样品管，吸取待检血液样品200μL，将吸取的样品全部滴加到测试板加样孔9中，将测试板放入荧光免疫分析仪中，荧光免疫分析仪通过扫描测试板上的二维码读取相关信息，荧光免疫分析仪自动调整测定参数(如层析温度、层析时间、荧光激发波长、检测波长等)，测定得到该样品对应的荧光响应值。将储存有标准曲线的射频识别卡放置在荧光免疫分析仪的读卡处，荧光免疫分析仪读取相关标准曲线。通过该样品对应的荧光响应值和相关标准曲线的计算，荧光免疫分析仪的显示屏可显示出BNP和NGAL的浓度。整个检测过程仅耗时约16分钟。对该血液样品平行测定7次，计算测定结果的平均值，然后计算其标准偏差，结果显示，BNP测定结果的标准偏差为6.6％，NGAL测定结果的标准偏差为7.1％，表明其具有良好的稳定性。

由此可知，本实用新型所述的心肾两项荧光免疫层析测试板可直接对未经离心处理去除血细胞的血液样品进行测定，避免了样品预处理的步骤，测定时间大幅缩短，实现了BNP和NGAL的快速检测，且使用的待检血液样品量仅为200μL。

对比例1

采用本领域技术人员知晓的现有技术对样品垫、荧光抗体、检测膜进行制备和处理，然后组装成心肾两项荧光免疫层析测试板，对经离心得到的血清样品进行7 次平行测定。计算测定结果的平均值，然后计算其标准偏差，结果显示测定结果的标准偏差为15.1％，表明其测定的稳定性较差。

综上所述，采用本实用新型的心肾两项荧光免疫层析试纸条、测试板及试剂盒能够获得与目前成熟稳定的ELISA试剂盒方法测定结果的准确性和稳定性基本相同的效果，并且还能够对BNP和NGAL进行同时检测，大幅缩短了心肾两项的检测时间，实现了BNP和NGAL的快速检测。还克服了现有技术的荧光免疫层析法对BNP 和NGAL检测的准确性不足和稳定性不够的缺点。无需对待检血液样品进行预处理，简化了BNP和NGAL检测的操作步骤，节省了检测时间。