本发明属于食品检测技术领域，尤其涉及一种奶糖中抗生素的固相萃取检测方法。
背景技术：
牛奶在人们日常生活中消耗量逐渐增加，其安全问题也越来越受到关注。近年来，抗生素作为抗菌药和促生长剂被广泛应用于养殖业，抗生素的乱用会造成牛奶中抗生素的残留，通过食物链可进入人体，带来健康风险。同时，过量抗生素还会诱导产生抗生素抗性基因，加速抗生素耐药性的传播。研究表明长期食用抗生素会破坏人肠道细菌平衡，降低免疫力，甚至可能具有致畸、致突变、致癌不良影响，因此检测奶糖中的抗生素具有重要的意义。
因为奶糖中基质复杂且抗生素含量低，因此需要采用合适的样品前处理方法以降低基质干扰同时对抗生素进行富集。目前，牛奶中抗生素萃取的样品前处理方法主要包括液相萃取和固相萃取，而液相萃取有机溶剂消耗多，绿色环保，难以除去基质干扰，且富集效果不佳。传统的固相萃取则萃取时间长。因此开发高效、灵敏的奶糖中抗生素的固相萃取检测方法对保证奶糖的安全具有重要的意义。
技术实现要素：
为了解决奶糖样品前处理方法中有机溶剂消耗大，萃取时间长且灵敏度低的问题。本发明提供了一种高效、灵敏的奶糖中抗生素的固相萃取检测方法。
为了实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：
一种奶糖中抗生素的固相萃取检测方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）称取1.0g奶糖，加入8ml乙腈-水混合溶液搅拌溶解后过100-300nm的超滤膜得奶糖样品溶液；
（2）向奶糖样品溶液中加入20-30mg磁性纳米复合物材料后，在25-30℃条件下超声5min后，利用磁铁将磁性纳米材料吸附并倒掉上清液；
（3）利用洗脱液超声洗涤用磁铁将磁性纳米材料2min后，利用磁铁将磁性纳米材料吸附后收集上清液；
（4）利用氮吹仪将上清液蒸干后，加入50μl甲醇将样品溶解后，利用高效液相色谱-紫外检测器对样品进行分析，测量抗生素的浓度。
优选的，步骤（1）中所述的乙腈-水混合溶液中乙腈与水的体积比为1：9-10。
优选的，步骤（1）中所述的超滤膜制备方法为：将1.0g聚醚砜溶于5mln-甲基-2-吡咯烷酮-离子液体的混合溶液中得到浇铸溶液，将浇铸溶液铺在玻璃板上并在空气中放置3min后，再将玻璃板在水溶液中浸泡2-3h制备得到孔径为100-300nm的聚醚砜超滤膜。
优选的，超滤膜制备方法中所述的离子液体为咪唑类型的离子液体。
优选的，步骤（2）中所述的磁性纳米复合物材料制备方法为：将5.0g低共熔溶剂在氮气中200-300℃条件下碳化得到含氨基的碳纳米量子点，将200mg碳纳米量子点、300mg氧化石墨烯分散于20ml0.16mol/l的fecl3和0.08mol/l的fecl2混合溶液后，在45-60℃条件下向溶液中缓慢滴加氨水，直至体系ph为10后,继续反应3h后，利用磁铁吸附磁性材料，并分别用乙醇、水洗涤两次干燥后既得磁性纳米复合物材料。
优选的，磁性纳米复合物材料制备方法中所述的低共熔溶剂为氯化胆碱-尿素，甜菜碱-尿素,氯化胆碱-甘氨酸等含有氨基的低共熔溶剂；所述的磁性纳米复合物材料的粒径为200-400nm。
优选的，步骤（3）中所述的洗脱液为体积比为1:1-3的甲醇-乙腈混合液，所述洗脱液的体积为1-1.5ml。
本发明方法灵敏度高，与现有技术相比，本发明所述的一种奶糖中抗生素的固相萃取检测方法具有以下有益效果。本发明采用离子液体修饰的超滤膜，使得超滤膜不仅能除去奶糖样品溶液中大量的蛋白质杂质，同时又避免了杂质堵塞超滤膜；采用碳纳米量子点/石墨烯材料多抗生素实现了高效萃取；对材料进行磁性修饰，避免采用离心的步骤。前处理方法操作简单且不需使用大型仪器，且方法联合高效液相色谱-紫外检测器的灵敏度低，可以多纳克级别的抗生素进行定量检测。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明，但实施例并不是对本发明技术方案的限定，所有基于本发明教导所作出的变化或等同替换，均应属于本发明的保护范围。
实施例一
（1）称取1.0g奶糖，加入8ml乙腈-水（1：10体积比）混合溶液搅拌溶解后过100-300nm的咪唑离子液体修饰的聚醚砜超滤膜得奶糖样品溶液；
（2）向奶糖样品溶液中加入20mg磁性纳米复合物材料后，在30℃条件下超声5min后，利用磁铁将磁性纳米材料吸附并倒掉上清液；
（3）利用1.5ml1:1体积比的甲醇-乙腈洗脱液超声洗涤用磁铁将磁性纳米材料2min后，利用磁铁将磁性纳米材料吸附后收集上清液；
（4）利用氮吹仪将上清液蒸干后，加入50μl甲醇将样品溶解后，利用高效液相色谱-紫外检测器对样品进行分析，测量喹诺酮类、磺胺类、四环素类抗生素的浓度。
实施例二
（1）称取1.0g奶糖，加入8ml乙腈-水（1：9体积比）混合溶液搅拌溶解后过100-300nm的咪唑离子液体修饰的聚醚砜超滤膜得奶糖样品溶液；
（2）向奶糖样品溶液中加入20mg磁性纳米复合物材料后，在25℃条件下超声5min后，利用磁铁将磁性纳米材料吸附并倒掉上清液；
（3）利用1.5ml1:2体积比的甲醇-乙腈洗脱液超声洗涤用磁铁将磁性纳米材料2min后，利用磁铁将磁性纳米材料吸附后收集上清液；
（4）利用氮吹仪将上清液蒸干后，加入50μl甲醇将样品溶解后，利用高效液相色谱-紫外检测器对样品进行分析，测量喹诺酮类、磺胺类、四环素类抗生素的浓度。
对比例1
（1）称取1.0g奶糖，加入8ml乙腈-水（1：9体积比）混合溶液搅拌溶解后过100-300nm的商品化的聚醚砜超滤膜得奶糖样品溶液；
（2）向奶糖样品溶液中加入20mg商品化的活性炭后，在25℃条件下超声5min后，8000rpm条件下离心5min后倒掉上清液；
（3）利用1.5ml1:2体积比的甲醇-乙腈洗脱液超声洗涤活性炭2min后，000rpm条件下离心5min后收集上清液；
（4）利用氮吹仪将上清液蒸干后，加入50μl甲醇将样品溶解后，利用高效液相色谱-紫外检测器对样品进行分析，测量喹诺酮类、磺胺类、四环素类抗生素的浓度。
对比例2
（1）称取1.0g奶糖，加入8ml乙腈-水（1：9体积比）混合溶液搅拌溶解后过100-300nm的商品化的聚醚砜超滤膜得奶糖样品溶液；
（2）向奶糖样品溶液中加入20mg商品化的三氧化二铝后，在25℃条件下超声5min后，8000rpm条件下离心5min后倒掉上清液；
（3）利用1.5ml1:2体积比的甲醇-乙腈洗脱液超声洗涤三氧化二铝2min后，8000rpm条件下离心5min后收集上清液；
（4）利用氮吹仪将上清液蒸干后，加入50μl甲醇将样品溶解后，利用高效液相色谱-紫外检测器对样品进行分析，测量喹诺酮类、磺胺类、四环素类抗生素的浓度。
方法性能考察
（1）以仪器信/噪比的3倍作为检测限和信噪比的10倍作为定量限，检测实施例1、2和对比例1、2方法的灵敏度；
（2）以如下公式计算方法的萃取效率，检测实施例1、2和对比例1、2方法的萃取效果。
公式中v,c分别表示甲醇将样品溶解后样品的体积以及析的抗生素浓度，m表示样品中某种分析的抗生素的质量。
实施例1，2和对比例1，2中方法的灵敏度和萃取率
从表中可以看出，相比与商品化的超滤膜以及吸附萃取材料，本发明使用的超滤膜以及吸附萃取材料对样品前处理后，方法的灵敏度更高且萃取效果更好，具有更好的应用前景。
对于本领域的普通技术人员而言，具体实施例只是对本发明进行了示例性描述，显然本发明具体实现并不受上述方式的限制，只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的各种非实质性的改进，或未经改进将本发明的构思和技术方案直接应用于其它场合的，均在本发明的保护范围之内。