一种氧化酶检测试纸的制备方法与流程

本发明属于体外诊断试剂
技术领域：
，具体涉及一种氧化酶检测试纸的制备方法。
背景技术：
：生殖道感染是严重威胁女性身心健康的疾病，当女性机体免疫功能下降，内分泌功能紊乱，阴道的自然防御系统遭到破坏，阴道内微生态的有益菌减少，病原菌入侵导致感染性疾病的发生。在世界范围内，特别是发展中国家妇女患生殖道疾病的比例日益增大，常见的生殖道感染疾病有细菌性阴道炎(阴道加德纳菌、类杆菌等厌氧菌侵入)、霉菌性阴道炎(白色念珠菌侵入)、滴虫性阴道炎(阴道毛滴虫侵入)及淋病等。女性下生殖道感染是妇科门诊的常见病和多发病，常见的下生殖道感染主要有外阴阴道假丝酵母菌病(vvc)、细菌性阴道病(bv)、滴虫性阴道炎(tv)以及淋病(gu)。淋病是最常见的性传播疾病之一，在世界上广为流行，造成全球弥漫性危险，对人类的健康带来极大的危害。淋病的病原体是淋病奈瑟氏菌，又称作淋球菌，而人类是淋球菌的唯一天然宿主，其主要感染粘膜，尤其是对尿道粘膜有极强的亲和力。淋球菌入侵男、女尿道后，借助粘附因子粘附在上皮细胞表面进行繁殖。淋球菌感染后约有1％的男性无任何症状，75％的女性患者无症状，因此，仅凭无临床症状作为判断是否感染淋球菌的依据，漏诊率极高，尤其是女性，所以建立准确可靠的检测方法十分必要。淋球菌寄生于人体的生殖系统后，产生氧化酶，而氧化酶用于鉴定阴道分泌物中特定菌群，具有很高的敏感度和专属的特异性，阳性菌群包括福氏志贺氏4型、大肠杆菌、甲型副伤寒沙门氏菌、不动杆菌(洛菲氏生物型)、淋球菌奈瑟双球菌、卡他布拉汉氏菌(atcc252ss)和黄杆菌(cdc3552)、铜绿假单胞菌等；阴性菌群包括产碱假单胞菌、粪产碱杆菌、木糖氧化无色杆菌、金黄色葡萄球菌(国内株和国外引进(atcc25923)和肠球菌(atcc2523)、变形杆菌、痢疾杆菌、大肠埃希杆菌等，目前，医学上淋球菌检测则利用淋球菌特异性酶系统在试管内产生气泡的多少判断阴阳性，由于女性生殖道分泌物中杂菌较多，利用“气泡法”存在非特异性，干扰试剂检测，所以本法不利于女性生殖道分泌物的检测。目前面对淋球菌的检测方法主要集中于以下几种：1)直接涂片染色法：取尿道分泌物涂片后做革兰氏染色，在镜下可见中性粒细胞内有革兰氏双球菌；2)淋球菌的分离培养与鉴定培养法：分离与鉴定培养是目前世界卫生组织任务定推荐的筛选淋球菌的唯一方法，对症状轻微的男、女都很敏感。同时淋球菌抵抗力弱，对温湿度要求高，培养时操作技术非常重要，37℃烛缸法培养24小时后观察有圆形凸起、湿润光滑、半透明、灰白色的可疑菌落再进行鉴定实验；3)氧化酶试验：以细菌产生细胞内氧化酶为基础，氧化酶反应是由于细菌存在细胞色素氧化酶系统，试验的目的是检测细菌氧化酶的存在。最初用于鉴定奈瑟氏菌属的菌种，以后广泛用于区别肠杆菌科与非发酵菌。氧化酶法原理是淋球菌具有氧化酶，它产生的氧离子能将氧化酶试剂(盐酸四甲基对苯二胺或盐酸二甲基对苯二胺)氧化成醌类化合物，出现颜色反应。4)聚合酶链反应(pcr)，又称体外酶促扩增，是近几年发展起来的一项技术，是分子学技术的突破。它是在人工条件下模拟天然dna复制过程，对特定dna片段进行快速扩增，扩增后的产物能在分析仪下肉眼可见。该方法灵敏度高，特异性强，但是对所需试剂的质量和技术人员的素质要求高，且有极高的假阳性率和假阴性率，限制了其在基层医院的开展。技术实现要素：本发明要解决现有技术中的技术问题，提供一种氧化酶检测试纸的制备方法，制备得到的检测试纸具有检测快捷，特异性强，专属性高的优点。为了解决上述技术问题，本发明的技术方案具体如下：一种氧化酶检测试纸的制备方法，包括以下步骤：步骤1、浸液的制备所述浸液包括：底物、缓冲溶液和辅助试剂；将底物溶于带有缓冲溶液和辅助试剂的溶液中，制备得到所述浸液；所述底物为n,n,n,n-四甲基对苯二胺二盐酸盐衍生物或者n,n-二甲基对苯二胺二盐酸盐衍生物；所述缓冲溶液为磷酸二氢钠-磷酸缓冲液、甘氨酸-盐酸缓冲液或者邻苯二甲酸-盐酸缓冲液；所述辅助试剂为过氧化氢、抗坏血酸或者硫脲；步骤2、检测试纸的制备用步骤1制备的浸液、采用浸渍干燥机自动化干燥方法制备检测试纸；所述浸渍干燥机温度设定：开机后将设备温度主加热设定70-90℃，副加热设定50-70℃，待主机加热温度达到70-90℃，各干燥室温度达到58-62℃时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：6.0-12.0hz。在上述技术方案中，所述步骤2的具体步骤如下：步骤1、按开机流程将浸渍干燥机打开，将设备温度主加热设定70℃-90℃，副加热设定50-70℃，待主机加热温度达到70-90℃，各干燥室温度达到58-62℃时开始浸液；步骤2、将浸液使用的滤纸进行悬挂，浸液槽安装好；步骤3、将步骤1配制好的浸液倒入浸渍槽中，浸液量应在浸渍槽的1/2处，然后将剩余的浸液倒入盛药瓶中，调节浸液注入的速度，将盛药瓶密封；步骤4、开启走纸开关，用压纸轮将滤纸浸入浸液中，记录浸液位置高度；浸渍干燥机走速设定：6.0-12.0hz；步骤5、浸液烘干过程注意观察浸液剂量，干燥室温度符合要求；步骤6、浸液的滤纸全部从干燥室走出，关闭走纸开关，将滤纸做好标识，放入装有干燥剂的自封袋中并放入干燥器中待用。在上述技术方案中，所述主加热设定为75℃-85℃。在上述技术方案中，所述底物为n,n,n,n-四甲基对苯二胺二盐酸盐或者n,n-二甲基对苯二胺二盐酸盐。在上述技术方案中，所述底物的浓度为1.00-20.00mg/ml，所述缓冲溶液的浓度为0.01-2.00m、ph范围在1.0-5.0，所述辅助试剂的浓度为0.05-2.00mg/ml。在上述技术方案中，所述缓冲溶液的浓度为0.05-2.00m、ph范围在1.5-3.0。在上述技术方案中，检测体系ph值为1.5-3.0。在上述技术方案中，所述滤纸类型为7218型滤纸、31et型滤纸、3mm型滤纸、526型滤纸或者319型滤纸。本发明的有益效果是：本发明提供的一种氧化酶检测试纸的制备方法，所用浸液配方中缓冲液廉价易配易得；浸液中底物对氧化酶有极高的灵敏度；辅助试剂过氧化氢、抗坏血酸、硫脲可以大大延长试纸的储存能力，有助于提高试纸的准确度；磷酸二氢钠-磷酸缓冲液、甘氨酸-盐酸缓冲液缓冲液、邻苯二甲酸-盐酸缓冲液，为反应体系提供一个良好的反应环境。本发明提供的一种氧化酶检测试纸的制备方法，采用浸渍干燥机自动化干燥方法制备检测试纸，浸渍干燥方式具有便捷、省时、可自动化的优势，有效控制试纸制备过程中人工误差带来的影响，浸渍干燥机主副加热，对温度全面进行监控，温度设定在规定的范围内，可以大大减少试纸批次之间的误差，保证试纸制备的准确性、稳定性及均一性。本发明制备的氧化酶检测试纸可作为淋病检测的重要指标，医学上常用氧化酶试验和脯氨酸氨基肽酶试验均成阳性时，诊断分泌物中含有淋球菌。患者的分泌物中可能存在不动杆菌、动弯杆菌、阴道加德纳菌、淋病奈瑟氏球菌、铜绿单胞杆菌、杜克雷嗜血杆菌、b族链球菌、金黄色葡萄球菌、生殖道衣原体、解脲支原体这些细菌中的一种或几种，而氧化酶主要检测分泌物中的淋病奈瑟氏球菌、铜绿单胞杆菌(氧化酶阳性的细菌包括铜绿假单胞菌、霍乱弧菌以及莫拉菌属等，但在尿道生存的细菌只有淋病奈瑟氏球菌(neisseriagonorrhoeae,ng)，ng外其它氧化酶阳性微生物伴尿道炎的极为少见)，脯氨酸氨基肽酶则主要检测动弯杆菌、阴道加德纳菌、杜克雷嗜血杆菌，所以在患者分泌物中除了淋球菌外没有一种细菌的氧化酶和脯氨酸氨基肽酶同时呈现阳性。由此通过氧化酶和脯氨酸氨基肽酶的联合检测患者分泌物中的淋球菌，特异性强，准确度高，可以排除不动杆菌、动弯杆菌、阴道加德纳菌、铜绿单胞杆菌、杜克雷嗜血杆菌、b族链球菌、金黄色葡萄球菌、生殖道衣原体、解脲支原体的干扰，与脯氨酸氨基肽酶联合检测，相辅相成，并结合镜下革兰氏染色液法，使淋球菌的检测可高达到99％以上。本发明依据n,n,n,n-四甲基对苯二胺二盐酸盐为底物，阴道微生态环境中存在氧化酶，在氧气存在的条件下，氧化酶将细胞内的还原型细胞色素c氧化成氧化型细胞色素c，底物在此氧化型细胞色素c的作用下生成醌类化合物，释放出有色物质，呈色深度与氧化酶活性成正比。本发明中试剂配制简便，使用方便，容易操作，检测时不需要显微镜等特殊设备，结合迪瑞gmd-s600全自动妇科分泌物分析系统，在8-10min内即可出结果，具有检测速度快，灵敏度高、特异性好的优势，与类似产品相比操作简单，适宜普及。附图说明下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细说明。图1为本发明制备的氧化酶检测试纸成品结构示意图。图2为本发明采用浸渍干燥机自动化干燥方法制备检测试纸的干燥过程示意图。具体实施方式本发明的发明思想为：本发明的目的是提供一种氧化酶检测试纸的制备方法，本发明制备的氧化酶检测试纸，分散在试纸块中主要为固化的底物，所述底物为n,n,n,n-四甲基对苯二胺二盐酸盐等类似衍生物，也可以是n,n-二甲基对苯二胺二盐酸盐等类似衍生物。根据所用的底物不同，方法存在一定差异。通常革兰氏阴性菌(球菌和杆菌)有含与不含细胞色素c氧化酶之分。而被检病原淋病奈瑟氏球菌(ng)在生长过程中产生细胞色素c氧化酶，属于含有细胞色素c的革兰氏阴性菌，它也是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。在氧气存在的条件下，氧化酶将细胞内的还原型细胞色素c氧化成氧化型细胞色素c，反应原理如下：方法一：(以n,n,n,n-四甲基对苯二胺为底物)底物(n,n,n,n-四甲基对苯二胺)在此氧化型细胞色素c的作用下生成醌类化合物，出现颜色反应，若显蓝色，则呈阳性，反之则为阴性；阴道分泌物存在氧化酶，在近中性及偏碱性条件下，自身发生重氮化反应，最终生成络合物，其呈色深度与氧化酶活性呈正比；(1)当分泌物中不含有氧化酶时，不显色(标记为“-”)表示阴性，指示阴道状态正常；(2)当分泌物含有氧化酶时，显浅蓝色或蓝色(标记为“±”或“+”)，指示可能淋病感染；方法二：(以n,n-二甲基对苯二胺为底物)底物(n,n-二甲基对苯二胺)在此氧化型细胞色素c的作用下生成醌类化合物，出现颜色反应，若显红色，则呈阳性，反之则为阴性；阴道分泌物存在氧化酶，在近中性及偏碱性条件下，与重氮盐(α-萘酚)发生重氮化反应，最终生成络合物，其呈色深度与氧化酶活性呈正比，(1)当分泌物中不含有氧化酶时，不显色(标记为“-”)表示阴性，指示阴道状态正常；(2)当分泌物含有氧化酶时，显浅红色或红色(标记为“±”或“+”)，指示可能淋病感染；本发明中采用干化学试纸法(以n,n,n,n-四甲基对苯二胺二盐酸盐为底物)：所述固化的试纸块：所述试纸块的底物可以是n,n,n,n-四甲基对苯二胺二盐酸盐、n,n-二甲基对苯二胺二盐酸盐等，本发明中以n,n,n,n-四甲基对苯二胺二盐酸盐为底物，先将底物溶解于带缓冲能力及辅助试剂的浸液中，所述辅助试剂可以是稳定剂、还原剂。用浸液浸润滤纸，在进行浸渍干燥制备。所述浸液干燥的温度范围为70℃-90℃，最佳范围在75℃-85℃。所述带缓冲能力的浸液的缓冲ph范围在1.0-5.0，最佳范围在1.5-3.0，缓冲浓度在0.01-1.00m，最佳范围在0.05-2.00m。按照所述的最适的干燥条件，经一步浸渍干燥，再经过裁切即成为一步法检测氧化酶的检测干化学试纸块，用双面胶带将其固定到聚苯乙烯材质白瓷基片上即可制备成成品，其结构示意图参见图1。这种氧化酶干化学试纸的简易测定方法为：取稀释的样本，滴加一滴样本在试纸块上，于37℃温浴8-10min，观察过氧化酶纸块的颜色变化，试纸块有无色变成浅蓝色、蓝色，即判定为氧化酶阳性+。本发明提供一种氧化酶检测试纸的制备方法，包括以下步骤：步骤1、浸液的制备所述浸液包括：底物、缓冲溶液和辅助试剂；将底物溶于带有缓冲溶液和辅助试剂的溶液中，制备得到所述浸液；所述浸液中：缓冲溶液可以是0.05-2.00m的磷酸二氢钠-磷酸缓冲液、甘氨酸-盐酸缓冲液缓冲液或者邻苯二甲酸-盐酸缓冲液；所述底物可以是1.00-20.00mg/mln,n,n,n-四甲基对苯二胺二盐酸盐或者n,n-二甲基对苯二胺二盐酸盐；所述辅助试剂为稳定剂、还原剂，可以是0.05-2.00mg/ml过氧化氢、抗坏血酸或硫脲；检测体系ph值为1.5-3.0；滤纸类型：7218型滤纸，31et型滤纸，3mm型滤纸，526型滤纸和319型滤纸。本发明所用浸液配方优势分析：此方法为一步浸液法，操作方法简便、节省工时，灵敏度高，配方中缓冲液廉价易配易得；浸液中底物对氧化酶有极高的灵敏度；稳定剂/还原剂过氧化氢、抗坏血酸、硫脲可以大大延长试纸的储存能力，有助于提高试纸的准确度；磷酸二氢钠-磷酸缓冲液、甘氨酸-盐酸缓冲液缓冲液、邻苯二甲酸-盐酸缓冲液，为反应体系提供一个良好的反应环境。步骤2、检测试纸的制备用步骤1制备的浸液、采用浸渍干燥机自动化干燥方法制备检测试纸；所述浸渍干燥机温度设定：开机后将设备温度主加热设定70℃-90℃，副加热设定50-70℃，待主机加热温度达到70-90℃，各干燥室温度达到58-62℃时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：6.0-12.0hz。采用浸渍干燥机自动化干燥方法制备氧化酶检测试纸的浸渍干燥流程(浸渍干燥机自动化干燥方法)参见图2：步骤1、按开机流程将浸渍干燥机打开，将设备温度主加热设定70℃-90℃，副加热设定50-70℃，待主机加热温度达到70-90℃，各干燥室温度达到58-62℃时开始浸液；步骤2、将浸液使用的滤纸进行悬挂，浸液槽安装好；步骤3、将步骤1配制好的浸液倒入浸渍槽中，浸液量应在浸渍槽的1/2处，然后将剩余的浸液倒入盛药瓶中，调节浸液注入的速度，将盛药瓶密封；步骤4、开启走纸开关，用压纸轮将滤纸浸入浸液中，记录浸液位置高度；浸渍干燥机走速设定：6.0-12.0hz；步骤5、浸液烘干过程注意观察浸液剂量，干燥室温度符合要求；步骤6、浸液的滤纸全部从干燥室走出，关闭走纸开关，将滤纸做好标识，放入装有干燥剂的自封袋中并放入干燥器中待用。优选主加热设定75℃-85℃；上述浸渍干燥方式具有便捷、省时、可自动化的优势，有效控制试纸制备过程中人工误差带来的影响，浸渍干燥机主副加热，对温度全面进行监控，温度设定在规定的范围内，可以大大减少试纸批次之间的误差，保证试纸制备的准确性、稳定性及均一性。浸渍干燥机走速设定：6.0-12.0hz；走速的设定是根据试纸在验证过程中逐步确认，走速的快慢会影响试纸的干燥程度，对试纸的外观及准确度有一定影响。本发明制备的氧化酶检测试纸可作为淋病检测的重要指标，医学上常用氧化酶试验和脯氨酸氨基肽酶试验均成阳性时，诊断分泌物中含有淋球菌。患者的分泌物中可能存在不动杆菌、动弯杆菌、阴道加德纳菌、淋病奈瑟氏球菌、铜绿单胞杆菌、杜克雷嗜血杆菌、b族链球菌、金黄色葡萄球菌、生殖道衣原体、解脲支原体这些细菌中的一种或几种，而氧化酶主要检测分泌物中的淋病奈瑟氏球菌、铜绿单胞杆菌(氧化酶阳性的细菌包括铜绿假单胞菌、霍乱弧菌以及莫拉菌属等，但在尿道生存的细菌只有淋病奈瑟氏球菌(neisseriagonorrhoeae,ng)，ng外其它氧化酶阳性微生物伴尿道炎的极为少见)，脯氨酸氨基肽酶则主要检测动弯杆菌、阴道加德纳菌、杜克雷嗜血杆菌，所以在患者分泌物中除了淋球菌外没有一种细菌的氧化酶和脯氨酸氨基肽酶同时呈现阳性。由此通过氧化酶和脯氨酸氨基肽酶的联合检测患者分泌物中的淋球菌，特异性强，准确度高，可以排除不动杆菌、动弯杆菌、阴道加德纳菌、铜绿单胞杆菌、杜克雷嗜血杆菌、b族链球菌、金黄色葡萄球菌、生殖道衣原体、解脲支原体的干扰，与脯氨酸氨基肽酶联合检测，相辅相成，并结合镜下革兰氏染色液法，使淋球菌的检测可高达到99％以上。本发明依据n,n,n,n-四甲基对苯二胺二盐酸盐为底物，阴道微生态环境中存在氧化酶，在氧气存在的条件下，氧化酶将细胞内的还原型细胞色素c氧化成氧化型细胞色素c，底物在此氧化型细胞色素c的作用下生成醌类化合物，释放出有色物质，呈色深度与氧化酶活性成正比。本发明中试剂配制简便，使用方便，容易操作，检测时不需要显微镜等特殊设备，结合迪瑞gmd-s600全自动妇科分泌物分析系统，在8-10min内即可出结果，具有检测速度快，灵敏度高、特异性好的优势，与类似产品相比操作简单，适宜普及。本发明提供的氧化酶检测试纸的制备方法，此种方法简便快捷，特异性强，专属性高，据数据统计：其特异性高达80.4％，敏感性为96.4％，阳性预测值95.5％，阴性预测值84.1％，于临床诊断有良好的一致性，革兰氏染色和氧化酶试验作为淋球菌培养物的初步鉴定，阳性者(如标本来源于泌尿生殖道)经证实试验其符合率在98％以上，氧化酶试纸检测结果可达到99.45％。成为一种快速鉴别淋球菌和非淋球菌性阴道炎最为准确的检测方法。实施案例一：氧化酶检测试纸的制备浸液：0.10m磷酸二氢钠-磷酸缓冲液；5.00mg/mln,n,n,n-四甲基对苯二胺二盐酸盐；2.00mg/ml抗坏血酸；ph值为2.0；滤纸类型：31et型滤纸氧化酶试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度达到60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：10.0hz。实施案例二：氧化酶检测试纸的制备浸液：0.50m磷酸二氢钠-磷酸缓冲液；5.00mg/mln,n,n,n-四甲基对苯二胺二盐酸盐；2.00mg/ml抗坏血酸；ph值为2.0；滤纸类型：31et型滤纸氧化酶试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度达到60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：10.0hz。实施案例三：氧化酶检测试纸的制备浸液：1.00m磷酸二氢钠-磷酸缓冲液；5.00mg/mln,n,n,n-四甲基对苯二胺二盐酸盐；2.00mg/ml抗坏血酸；ph值为2.0；滤纸类型：31et型滤纸氧化酶试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度达到60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：10.0hz。实施案例四：氧化酶检测试纸的制备浸液：0.50m磷酸二氢钠-磷酸缓冲液；10.00mg/mln,n,n,n-四甲基对苯二胺二盐酸盐；2.00mg/ml抗坏血酸；ph值为2.0；滤纸类型：31et型滤纸氧化酶试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度达到60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：10.0hz。实施案例五：氧化酶检测试纸的制备浸液：0.50m磷酸二氢钠-磷酸缓冲液；15.00mg/mln,n,n,n-四甲基对苯二胺二盐酸盐；2.00mg/ml抗坏血酸；ph值为2.0；滤纸类型：31et型滤纸氧化酶试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度达到60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：10.0hz。实施案例六：氧化酶检测试纸的制备浸液：0.50m磷酸二氢钠-磷酸缓冲液；5.00mg/mln,n-二甲基对苯二胺二盐酸盐；2.00mg/ml抗坏血酸；ph值为2.0；滤纸类型：31et型滤纸氧化酶试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度达到60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：10.0hz。实施案例七：氧化酶检测试纸的制备浸液：0.50m磷酸二氢钠-磷酸缓冲液；10.00mg/mln,n-二甲基对苯二胺二盐酸盐；2.00mg/ml抗坏血酸；ph值为2.0；滤纸类型：31et型滤纸氧化酶试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度达到60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：10.0hz。实施案例八：氧化酶检测试纸的制备浸液：0.50m磷酸二氢钠-磷酸缓冲液；15.00mg/mln,n-二甲基对苯二胺二盐酸盐；2.00mg/ml抗坏血酸；ph值为2.0；滤纸类型：31et型滤纸氧化酶试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度达到60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：10.0hz。实施案例九：氧化酶检测试纸的制备浸液：0.50m磷酸二氢钠-磷酸缓冲液；5.00mg/mln,n,n,n-四甲基对苯二胺二盐酸盐；2.00mg/ml硫脲；ph值为2.0；滤纸类型：31et型滤纸氧化酶试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度达到60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：10.0hz。实施案例十：氧化酶检测试纸的制备浸液：0.50m磷酸二氢钠-磷酸缓冲液；5.00mg/mln,n-二甲基对苯二胺二盐酸盐；2.00mg/ml硫脲；ph值为2.0；滤纸类型：31et型滤纸氧化酶试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度达到60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：10.0hz。实施案例十一：氧化酶检测试纸的制备浸液：0.10m磷酸二氢钠-磷酸缓冲液；5.00mg/mln,n,n,n-四甲基对苯二胺二盐酸盐；2.00mg/ml抗坏血酸；ph值为2.0；滤纸类型：319型滤纸氧化酶试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度达到60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：10.0hz。实施案例十二：氧化酶检测试纸的制备浸液：1.00m磷酸二氢钠-磷酸缓冲液；5.00mg/mln,n,n,n-四甲基对苯二胺二盐酸盐；2.00mg/ml抗坏血酸；ph值为2.0；滤纸类型：319型滤纸氧化酶试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度达到60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：10.0hz。实施案例十三：氧化酶检测试纸的制备浸液：0.50m磷酸二氢钠-磷酸缓冲液；10.00mg/mln,n,n,n-四甲基对苯二胺二盐酸盐；2.00mg/ml抗坏血酸；ph值为2.0；滤纸类型：319型滤纸氧化酶试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度达到60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：10.0hz。实施案例十四：氧化酶检测试纸的制备浸液：0.50m磷酸二氢钠-磷酸缓冲液；15.00mg/mln,n,n,n-四甲基对苯二胺二盐酸盐；2.00mg/ml抗坏血酸；ph值为2.0；滤纸类型：319型滤纸氧化酶试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度达到60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：10.0hz。实施案例十五：氧化酶检测试纸的制备浸液：0.50m磷酸二氢钠-磷酸缓冲液；5.00mg/mln,n-二甲基对苯二胺二盐酸盐；2.00mg/ml抗坏血酸；ph值为2.0；滤纸类型：319型滤纸氧化酶试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度达到60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：10.0hz。实施案例十六：氧化酶检测试纸的制备浸液：0.05m甘氨酸-盐酸缓冲液；1.00mg/mln,n-二甲基对苯二胺二盐酸盐；0.05mg/ml过氧化氢；ph值为1.5；滤纸类型：7218型滤纸氧化酶试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：开机后将设备温度主加热设定75℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到75℃，各干燥室温度达到60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：6.0hz。实施案例十七：氧化酶检测试纸的制备浸液：2m邻苯二甲酸-盐酸缓冲液；20.00mg/mln,n-二甲基对苯二胺二盐酸盐；2.00mg/ml抗坏血酸；ph值为3.0；滤纸类型：526型滤纸氧化酶试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：开机后将设备温度主加热设定85℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到85℃，各干燥室温度达到60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：12.0hz。本发明实施例1制备的氧化酶的试纸性能评估①外观目测随机抽取制备试纸10条，以正常视力检查试纸外观性能指标，应符合要求：1)表面应平整、边缘无毛刺；2)测试块外观整齐、色泽均匀。10次目测结果均合格。②准确度检测取用制备的试纸对检测项目各浓度水平的参考溶液进行检测，每个浓度水平重复测定5次，阳性参考溶液不得出现阴性结果，阴性参考溶液不得出现阳性结果。(结果如表1所示)表1准确度数据测定次数阴性参考溶液阳性低值阳性高值rep1阴性弱阳性阳性rep2阴性弱阳性阳性rep3阴性弱阳性阳性rep4阴性弱阳性阳性rep5阴性弱阳性阳性③重复性检测随机抽取制备的试纸条10条，对第一个非阴性量级进行检测，所有检测结果不为阴性，第一个非阴性量级均应能准确检出。(结果如表2所示)表2检出限数据本发明实施例5制备的氧化酶的试纸性能评估①外观目测随机抽取制备试纸10条，以正常视力检查试纸外观性能指标，应符合要求：1)表面应平整、边缘无毛刺；2)测试块外观整齐、色泽均匀。10次目测结果均合格。②准确度检测取用制备的试纸对检测项目各浓度水平的参考溶液进行检测，每个浓度水平重复测定5次，阳性参考溶液不得出现阴性结果，阴性参考溶液不得出现阳性结果。(结果如表3所示)表3准确度数据③重复性检测随机抽取制备的试纸条10条，对第一个非阴性量级进行检测，所有检测结果不为阴性，第一个非阴性量级均应能准确检出。(结果如表4所示)表4检出限数据测定次数阳性低值rep1弱阳性rep2弱阳性rep3弱阳性rep4弱阳性rep5弱阳性rep6弱阳性rep7弱阳性rep8弱阳性rep9弱阳性rep10弱阳性本发明实施例8制备的氧化酶的试纸性能评估①外观目测随机抽取制备试纸10条，以正常视力检查试纸外观性能指标，应符合要求：1)表面应平整、边缘无毛刺；2)测试块外观整齐、色泽均匀。10次目测结果均合格。②准确度检测取用制备的试纸对检测项目各浓度水平的参考溶液进行检测，每个浓度水平重复测定5次，阳性参考溶液不得出现阴性结果，阴性参考溶液不得出现阳性结果。(结果如表5所示)表5准确度数据测定次数阴性参考溶液阳性低值阳性高值rep1阴性弱阳性阳性rep2阴性弱阳性阳性rep3阴性弱阳性阳性rep4阴性弱阳性阳性rep5阴性弱阳性阳性③重复性检测随机抽取制备的试纸条10条，对第一个非阴性量级进行检测，所有检测结果不为阴性，第一个非阴性量级均应能准确检出。(结果如表6所示)表6检出限数据本发明实施例10制备的氧化酶的试纸性能评估①外观目测随机抽取制备试纸10条，以正常视力检查试纸外观性能指标，应符合要求：1)表面应平整、边缘无毛刺；2)测试块外观整齐、色泽均匀。10次目测结果均合格。②准确度检测取用制备的试纸对检测项目各浓度水平的参考溶液进行检测，每个浓度水平重复测定5次，阳性参考溶液不得出现阴性结果，阴性参考溶液不得出现阳性结果。(结果如表7所示)表7准确度数据测定次数阴性参考溶液阳性低值阳性高值rep1阴性弱阳性阳性rep2阴性弱阳性阳性rep3阴性弱阳性阳性rep4阴性弱阳性阳性rep5阴性弱阳性阳性③重复性检测随机抽取制备的试纸条10条，对第一个非阴性量级进行检测，所有检测结果不为阴性，第一个非阴性量级均应能准确检出。(结果如表8所示)表8检出限数据本发明实施例13制备的氧化酶的试纸性能评估①外观目测随机抽取制备试纸10条，以正常视力检查试纸外观性能指标，应符合要求：1)表面应平整、边缘无毛刺；2)测试块外观整齐、色泽均匀。10次目测结果均合格。②准确度检测取用制备的试纸对检测项目各浓度水平的参考溶液进行检测，每个浓度水平重复测定5次，阳性参考溶液不得出现阴性结果，阴性参考溶液不得出现阳性结果。(结果如表9所示)表9准确度数据③重复性检测随机抽取制备的试纸条10条，对第一个非阴性量级进行检测，所有检测结果不为阴性，第一个非阴性量级均应能准确检出。(结果如表10所示)表10检出限数据测定次数阳性低值rep1弱阳性rep2弱阳性rep3弱阳性rep4弱阳性rep5弱阳性rep6弱阳性rep7弱阳性rep8弱阳性rep9弱阳性rep10弱阳性本发明实施例15制备的氧化酶的试纸性能评估①外观目测随机抽取制备试纸10条，以正常视力检查试纸外观性能指标，应符合要求：1)表面应平整、边缘无毛刺；2)测试块外观整齐、色泽均匀。10次目测结果均合格。②准确度检测取用制备的试纸对检测项目各浓度水平的参考溶液进行检测，每个浓度水平重复测定5次，阳性参考溶液不得出现阴性结果，阴性参考溶液不得出现阳性结果。(结果如表11所示)表11准确度数据测定次数阴性参考溶液阳性低值阳性高值rep1阴性弱阳性阳性rep2阴性弱阳性阳性rep3阴性弱阳性阳性rep4阴性弱阳性阳性rep5阴性弱阳性阳性③重复性检测随机抽取制备的试纸条10条，对第一个非阴性量级进行检测，所有检测结果不为阴性，第一个非阴性量级均应能准确检出。(结果如表12所示)表12检出限数据由检测结果显示本发明中所述的试纸，外观表面应平整、测试块外观整齐、色泽均匀，具有可观察性；检测阳性参考溶液、阴性参考溶液结果准确无偏差；重复性检测具有均一性和一致性，所有检测指标测试结果均符合产品要求。本发明产品具有检测速度快、可目测验视、灵敏度高、稳定性好的优势，与类似产品相比操作简单，适宜普及。显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。当前第1页12