丙戊酸衍生物及其在免疫检测中的用途的制作方法

文档序号:20274862发布日期:2020-04-03 19:30阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种酶标记物,其包含以下或由以下组成:

-丙戊酸衍生物、和

-葡萄糖六磷酸脱氢酶;

所述的葡萄糖六磷酸脱氢酶和所述的丙戊酸衍生物共价结合;

所述的丙戊酸衍生物是式i所示的结构:

其中,n为1至10的整数,优选2至6的整数;

m为1至10的整数,优选1至5的整数;

优选,所述的丙戊酸衍生物是式ii所示的结构:

优选地,所述的葡萄糖六磷酸脱氢酶源自肠系膜明串珠菌leuconostocmesenteroides;

优选地,所述的丙戊酸衍生物在所述的葡萄糖六磷酸脱氢酶第254位氨基酸残基处共价结合。

2.一种丙戊酸衍生物,其是式i所示的结构:

其中

n为1至10的整数,优选2至6的整数;

m为1至10的整数,优选1至5的整数;

优选,所述丙戊酸衍生物是式ii所示的结构:

3.一种试剂,其包含选自以下的一种或组合:

权利要求2所述的丙戊酸衍生物、权利要求1所述的酶标记物。

4.一种酶标记物的制备方法,其包括步骤:

1)提供权利要求2所述的丙戊酸衍生物;

优选,在非质子性溶剂中提供权利要求2所述的丙戊酸衍生物;

2)提供葡萄糖六磷酸脱氢酶;

3)在18℃至28℃将所述丙戊酸衍生物和所述葡萄糖六磷酸脱氢酶接触1小时至4小时,使得所述丙戊酸衍生物和所述葡萄糖六磷酸脱氢酶发生偶联,得到酶标记物;

优选,在18℃至25℃将所述丙戊酸衍生物和所述葡萄糖六磷酸脱氢酶接触2小时至3小时,使得所述丙戊酸衍生物和所述葡萄糖六磷酸脱氢酶发生偶联,得到酶标记物;

4)任选,对所述酶标记物进行纯化;

步骤1)和2)可互换;

所述非质子性溶剂选自以下一种或组合:乙腈、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜;

优选,在步骤3)之前,所述葡萄糖六磷酸脱氢酶包含至少一个游离的巯基,

更优选,将所述葡萄糖六磷酸脱氢酶第254位的脯氨酸取代为半胱氨酸;

步骤3)中,所述丙戊酸衍生物和所述葡萄糖六磷酸脱氢酶的摩尔比范围为1:1至1:200;优选1:50;

优选地,所述的葡萄糖六磷酸脱氢酶源自肠系膜明串珠菌leuconostocmesenteroides;

优选地,所述的丙戊酸衍生物在所述的葡萄糖六磷酸脱氢酶第254位氨基酸残基处共价结合。

5.一种葡萄糖六磷酸脱氢酶变体,相较于肠系膜明串珠菌leuconostocmesenteroides的野生型葡萄糖六磷酸脱氢酶,其第254位或其等同位点的脯氨酸残基取代为半胱氨酸残基。

6.一种酶标记物,其是权利要求4所述方法制备得到的。

7.一种试剂,其包含权利要求1或6所述的酶标记物。

8.一种丙戊酸检测试剂盒,其包含:

-第一试剂,其包含缓冲液、抗丙戊酸抗体:

-第二试剂,其包含缓冲液、权利要求1或6所述的酶标记物;

-任选,质控品和/或校准品;

其中,

所述缓冲液选自:tapso、磷酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、tris缓冲液、硼酸缓冲液、mops缓冲液、hepes缓冲液;

所述缓冲液ph为5.0至8.5,优选7.0至8.0;

所述抗丙戊酸抗体源自:小鼠、大鼠、兔、骆驼、灵长类、马、羊、禽;

所述抗丙戊酸抗体选自:单抗、多抗、重组抗体、嵌合抗体、抗原结合片段;

所述质控品包含30μg/ml至120μg/ml丙戊酸;

所述校准品包含0μg/ml至150μg/ml丙戊酸。

9.根据权利要求8所述的丙戊酸检测试剂盒,其包含:

-第一试剂,其包含:

30mm至300mm缓冲液、

5mm至20mm葡萄糖-6-磷酸、

5mm至20mm氧化型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、

0.01μg/ml至10μg/ml抗丙戊酸单克隆抗体、

0.1g/l至5g/l稳定剂、

0.1g/l至5g/l表面活性剂、

0.1g/l至5g/l防腐剂;

-第二试剂,其包含:

30mm至300mm缓冲液、

0.01μg/ml至10μg/ml权利要求1或6所述的酶标记物、

0.1g/l至5g/l稳定剂、

0.1g/l至5g/l表面活性剂、

0.1g/l至5g/l防腐剂;

-任选,质控品和/或校准品;

其中,

所述稳定剂选自:牛血清白蛋白、海藻糖、蔗糖、甘露醇、甘油、甘氨酸、聚乙二醇6000或其组合,优选牛血清白蛋白;

所述防腐剂选自:叠氮化合物、mit、生物防腐剂pc;

优选,所述叠氮化合物是叠氮钠或叠氮锂;

优选,所述生物防腐剂pc是pc-300;

所述抗丙戊酸抗体是鼠源抗体。

10.选自以下的任一项或其组合在制备检测装置中的用途:

权利要求2所述的丙戊酸衍生物、权利要求1所述的酶标记物、权利要求6所述的酶标记物;权利要求5所述的葡萄糖六磷酸脱氢酶变体;

所述检测装置选自以下一种或组合:试剂、试剂盒、孔板、颗粒、微球、芯片、试纸。

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