一种高效液相色谱法测定甲磺草胺原药中甲磺草胺的方法与流程

本发明属于化学检测领域，特别涉及一种高效液相色谱法测定甲磺草胺原药中甲磺草胺的方法。

背景技术：

甲磺草胺属原卟啉原氧化酶抑制剂。通过抑制原卟啉原氧化酶，使植物细胞中产生过量原卟啉ix，后者是光敏剂，导致细胞内产生活性氧，最终导致细胞膜，液胞膜等破裂，细胞内溶物渗出，干枯死亡。土壤半衰期110-280天，茎叶处理、土壤处理均可。

该产品主要适用于玉米、大豆、小麦、大麦等田中防治1年生及多年生阔叶杂草如蓼、婆婆纳、苍耳、枝苋、藜、苘麻、猪殃殃、曼陀罗等。对幼龄禾本科杂草，也有一定抑制作用。

因此，需要对现有甲磺草胺原药中甲磺草胺分析方法进行改进，建立一个采用高效液相色谱法很好的测定甲磺草胺原料药含量，同时还能保证良好的线性范围，良好的稳定性，较好的准确度和精确度，而且研究的方法可以操作简单、快速完成测试，测定结果准确可靠，从而可以有效的控制甲磺草胺原料药的质量，保证用药的安全性和可靠性。

技术实现要素：

本发明要解决的技术问题是提供一种操作简单、可靠的高效液相色谱法测定甲磺草胺原药中甲磺草胺的方法。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案为：一种高效液相色谱法测定甲磺草胺原药中甲磺草胺的方法，其创新点在于：该方法包括如下步骤：

步骤1：空白试剂选取：选用色谱纯乙腈为空白试剂；

步骤2：配制标准溶液：称取甲磺草胺标样置于清洁干燥的容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，平行配制3份；

步骤3：配制样品溶液：称取甲磺草胺试样，置于清洁干燥的容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，平行配制2份；

步骤4：按照下列高效液相色谱条件进行测定：

仪器：带紫外检测器的岛津2010液相色谱仪；

紫外检测器：检测波长为260-300nm；

色谱柱：sb-phenyl色谱柱，以4.6×150mm，3.5μm粒径的填充剂填充；

流动相：以甲醇、乙腈和85％的磷酸水溶液的混合溶液作为流动相a，以甲醇为流动相b，以乙腈为流动相c；

流速：1.1-1.3ml/min；

柱温：20-30℃；

运行时间：30-35min；

进样量：5μl；

进样：空白试剂进针2针，每份标准溶液进针2针，每份样品溶液进针1针；

步骤5：按外标法，计算甲磺草胺的含量：以流动相a、流动相b和流动相c进行梯度洗脱，所述的梯度为：

进一步地，所述标准溶液的配制具体包括称取甲磺草胺标样100mg，置于清洁干燥的50ml容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。

进一步地，所述样品溶液的配制具体包括称取甲磺草胺试样100mg，置于清洁干燥的50ml容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。

进一步地，所述步骤4中甲醇、乙腈和85％的磷酸水溶液的体积比为21:21:58。

进一步地，所述甲醇采用色谱纯甲醇，乙腈采用色谱纯乙腈，磷酸采用色谱纯磷酸。

本发明的优点在于：本发明高效液相色谱法测定甲磺草胺原药中甲磺草胺的方法，能保证良好的线性范围，良好的稳定性，较好的准确度和精确度，且该测定方法操作简单，能够快速完成测试，测定结果准确可靠，从而可以有效的控制甲磺草胺原料药的质量，保证用药的安全性和可靠性。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

图1为实施例中甲磺草胺测定方法线性关系图。

具体实施方式

下面的实施例可以使本专业的技术人员更全面地理解本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。

本发明高效液相色谱法测定甲磺草胺原药中甲磺草胺的方法，该方法包括如下步骤：

步骤1：空白试剂选取：选用色谱纯乙腈为空白试剂；

步骤2：配制标准溶液：称取甲磺草胺标样置于清洁干燥的容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，平行配制3份；

步骤3：配制样品溶液：称取甲磺草胺试样，置于清洁干燥的容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，平行配制2份；

步骤4：按照下列高效液相色谱条件进行测定：

仪器：带紫外检测器的岛津2010液相色谱仪；

紫外检测器：检测波长为260-300nm；

色谱柱：sb-phenyl色谱柱，以4.6×150mm，3.5μm粒径的填充剂填充；

流动相：以甲醇、乙腈和85％的磷酸水溶液的混合溶液作为流动相a，以甲醇为流动相b，以乙腈为流动相c；

流速：1.1-1.3ml/min；

柱温：20-30℃；

运行时间：30-35min；

进样量：5μl；

进样：空白试剂进针2针，每份标准溶液进针2针，每份样品溶液进针1针；

步骤5：按外标法，计算甲磺草胺的含量：以流动相a、流动相b和流动相c进行梯度洗脱，所述的梯度为：

更具体的实施方式为标准溶液的配制具体包括称取甲磺草胺标样100mg，置于清洁干燥的50ml容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀；样品溶液的配制具体包括称取甲磺草胺试样100mg，置于清洁干燥的50ml容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀；步骤4中甲醇、乙腈和85％的磷酸水溶液的体积比为21:21:58；甲醇采用色谱纯甲醇，乙腈采用色谱纯乙腈，磷酸采用色谱纯磷酸。

下面通过具体的实施例来对本发明高效液相色谱法测定甲磺草胺原药中甲磺草胺的方法进行详细说明：

实施例1

本实施例高效液相色谱法测定甲磺草胺原药中甲磺草胺的方法，该方法包括如下步骤：

步骤1：空白试剂选取：选用色谱纯乙腈为空白试剂；

步骤2：配制标准溶液：称取甲磺草胺标样100mg置于清洁干燥的50ml容量瓶中，用色谱纯乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，平行配制3份；

步骤3：配制样品溶液：选取一个有代表性的甲磺草胺样品，取本品同一批号原料，称取甲磺草胺试样100mg，置于清洁干燥的50ml容量瓶中，用色谱纯乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，平行配制2份；

步骤4：按照下列高效液相色谱条件进行测定：

仪器：带紫外检测器的岛津2010液相色谱仪；

紫外检测器：检测波长为280nm；

色谱柱：sb-phenyl色谱柱，以4.6×150mm，3.5μm粒径的填充剂填充；

流动相：以色谱纯甲醇、色谱纯乙腈和85％的磷酸水溶液(1l二次蒸馏水中加入5滴85％的磷酸，磷酸为色谱纯磷酸)的混合溶液作为流动相a，以色谱纯甲醇为流动相b，以色谱纯乙腈为流动相c；

流速：1.2ml/min；

柱温：25℃；

运行时间：32in；

进样量：5μl；

进样：空白试剂进针2针，每份标准溶液进针2针，每份样品溶液进针1针；

步骤5：按外标法，计算甲磺草胺的含量：以流动相a、流动相b和流动相c进行梯度洗脱，所述的梯度为：

实施例2

本发明方法精密度试验：

通过选取一个有代表性的甲磺草胺样品，照实施例1含量测定项下方法对本品进行含量测定，计算含量。结果见表1。本试验表明，该方法相对标准偏差较小，即方法连续测试数次偏差较小，离散程度小，方法精密度高。

表1方法的精密度试验结果

实施例3

本发明方法的线性试验：

步骤1：取甲磺草胺标样200mg，精密称定，置50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释置刻度，摇匀。

步骤2：精密量取步骤1的标样溶液5ml于10ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释置刻度，摇匀。同法稀释色谱纯乙腈，获得8个不同浓度的乙腈稀释液，分别量取5μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以进样量(w)为横坐标，以其相应的甲磺草胺峰面积(a)为纵坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程。结果见表2，图1。本试验表明，该方法在0.31μg～20.06μg浓度范围内，r＝1,浓度和峰面积呈现良好的线性，即该方法在该浓度范围内的样品测试准确性较高。

表2甲磺草胺含量测定标准曲线(液谱法)

实施例4

本发明方法的准确度试验：

取甲磺草胺标样，配制浓度1.6mg/ml、2.0mg/ml、2.4mg/ml三个浓度的标样溶液，照含量测定项下方法对标样自身进行含量测定，计算含量，结果见表3。本试验通过加样回收来考察方法的准确性，考察了三个浓度的样品，回收率均在75％-125％之间，表明该方法回收率较好，即方法准确度较高。

表3准确度试验结果

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征以及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。