一种花生及其制品中烟酸含量的检测方法与流程

本发明涉及一种烟酸含量的检测方法，尤其是一种花生及其制品中烟酸含量的检测方法。

背景技术：

花生是我国的主要油料作物和经济作物之一，具有很高的营养价值。花生的主要成分是脂肪、蛋白质和碳水化合物，花生含有丰富的维生素b1、维生素b2、烟酸、维生素e等维生素，钙、铁、钾、钠等矿物质和人体必需氨基酸。此外，花生还含有黄酮类化合物、酚类化合物等功能活性成分，对人类的膳食营养具有重要的意义。花生具有“长生果”之称，对调节人体生理机能、延缓脑功能衰退、预防心脏病、动脉硬化有重要作用，特别是在降低血液中胆固醇含量、预防高血压和动脉硬化等方面有明显的功效。维生素作为维持生命不可缺少的营养素，越来越受人们的重视。但目前花生中维生素含量的报道较少，因此，检测花生及其制品中的烟酸能有效的为消费者提供健康合理的膳食信息。

赵姝研究了花生中烟酸的提取，并研究烟酸具有明显的降血脂效果，烟酸与叶酸同时使用不具有拮抗作用。gb5009.89-2016食品安全国家标准食品中烟酸和烟酰胺的测定，食品中烟酸和烟酰胺的高效液相色谱测定基质不合适花生及其制品，微生物技术的检测方法，步骤相对比较繁琐、复杂。

针对花生及其制品中烟酸项目的检测，国标方法及文献中主要采用微生物技术的检测方法，步骤相对比较繁琐、复杂。因此，有必要建立一种能有效定量检测花生及其制品中烟酸的方法，以提高分析检测的效率。

技术实现要素：

基于此，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而建立一种针对花生及其制品(ny/t420-2017绿色食品花生及制品)中烟酸的前处理方法，采用液相色谱法测定，旨在为食品安全国家标准提供新的技术支持，以提高分析检测的效率。

为实现上述目的，本发明所采取的技术方案为：一种花生及其制品中烟酸含量的检测方法，包括以下步骤：

(1)将花生及其制品样品进行前处理；

(2)利用高效液相分析仪对前处理后的样品进行检测分析；

高效液相分析条件如下：

色谱柱：athenac18-wp，4.6×150mm；

检测波长：261nm；柱温：25℃，流速：1.0ml/min，进样量：10μl；

流动相：甲醇、异丙醇、庚烷磺酸钠的混合水溶液。

优选地，所述流动相的ph为3～4；此选择更有利于目标物的分离。

优选地，将甲醇70ml、异丙醇20ml、庚烷磺酸钠1g，用910ml水溶液混匀后，调节ph至3～4，即为所述流动相；此选择可以更好的优化目标物的峰形。

优选地，所述前处理的过程为：取花生及其制品试样，加入盐酸溶液，摇匀、高压灭菌，待水解结束后冷却至40℃以下取出，调节ph至3.5～4.5，加入混合酶溶液，在37℃进行酶解，将酶解液转移、定容、摇匀、过滤，取上清液备用。

更优选地，相对于每克花生及其制品试样，盐酸溶液的体积为5.5～6.5ml。此选择不仅能充分提取，同时也为后续定容留取一定体积。

更优选地，所述盐酸溶液的浓度为0.1mol/l；此选择能更好的提取花生中烟酸。

优选地，所述高压灭菌的过程为：在高压灭菌锅中121℃下保持30min。可以抑制杂菌的生长，同时能更好的提取花生中的烟酸。

优选地，相对于每克花生及其制品试样，混合酶溶液的体积为0.2ml；能充分酶解花生中有机大分子。

优选地，在加入混合酶溶液前，用2.0mol/l乙酸钠溶液调节ph至3.5～4.5；此选择能保证最适酶活性。

相对于现有技术，本发明的有益效果为：

本发明检测方法，对花生及其制品中烟酸的加标回收率达到80～120％之间，24h内精密度和稳定性测试rsd<10％，方法重现性高，烟酸和烟酰胺检出限分别0.4289mg/kg和0.2519mg/kg，定量限1.4296mg/kg和0.8397mg/kg，能满足花生及其制品中烟酸进行定量分析。

本发明开发的检测方法，采用的前处理方法操作简便、快速。为食品安全国家标准提供新的技术支持和数据支撑，可为国家标准提供相应的配套检测标准。

附图说明

图1为本发明检测方法的工艺流程图；

图2为烟酸和烟酰胺标准溶液的液相色谱图；

图3为花生样品的液相色谱图。

具体实施方式

为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。

本实施例具体检测方法的技术路线及工艺流程如附图1所示，具体检测过程如下：

1)试样制备

固体样品用研磨机充分粉碎并搅拌均匀，取其中的200g装入样品瓶中，密封，试样于4℃避光保存。

2)前处理

称取花生及其制品试样10.0g于100ml锥形瓶中(带有软质塞子)，加60ml0.1mol/l盐酸溶液，充分摇匀，塞上软质塞子，高压灭菌锅中121℃保持30min。水解结束待冷却至40℃以下取出，轻摇数次，用ph计指示，用2.0mol/l乙酸钠溶液调节ph至4.0左右，加入2.0ml混合酶溶液，摇匀后，置于培养箱中37℃过夜(约16h)。将酶解液全部转移至100ml容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，过滤，取上清液备用。(操作过程避免强光照射)

3)高效液相色谱仪分析

检测波长：261nm；柱温：25℃；流速：1.0ml/min；进样量：10μl；流动相：甲醇70ml、异丙醇20ml、庚烷磺酸钠1g，用910ml水溶液混匀后，用高氯酸调节ph至3.5左右；色谱柱：athenac18-wp(4.6*150mm)。

具体分析结果如附图2、3所示，从附图2、3中可以看出，烟酸和烟酸胺的峰形较好，通过本实验方案的优化，花生中烟酸与杂质的分离效果显著，并且花生中烟酸的主要存在形式为烟酸。

本申请检测方法对花生及其制品中烟酸的加标回收率达到80～120％之间，24h内精密度和稳定性测试rsd<10％，方法重现性高，烟酸和烟酰胺检出限分别0.4289mg/kg和0.2519mg/kg，定量限1.4296mg/kg和0.8397mg/kg，能满足花生及其制品中烟酸进行定量分析。本发明开发的检测方法，采用的前处理方法操作简便、快速。为食品安全国家标准提供新的技术支持和数据支撑，可为国家标准提供相应的配套检测标准。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。