一种氟虫腈的液相色谱检测方法与流程

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种氟虫腈的液相色谱检测方法。

背景技术：

氟虫腈属苯基吡唑类杀虫药，杀虫谱广，对害虫以胃毒作用为主，兼有触杀和一定的内吸作用，其作用机制在于阻碍昆虫γ-氨基丁酸控制的氯化物代谢，因此对蚜虫、叶蝉、飞虱、鳞翅目幼虫、蝇类和鞘翅目等重要害虫有很高的杀虫活性，对作物无药害。近年来，氟虫腈也广泛用于卫生杀虫剂。主要用于防杀蟑螂、蚂蚁等有害生物。氟虫腈有关物质及含量测定的现有技术还未纳入中国兽药典标准。

因此，需要一种新的有效的氟虫腈有关物及含量的质检测方法。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种氟虫腈的液相色谱检测方法，以解决现有氟虫腈有关物质及含量测定分离效率低、分析速度慢、检测灵敏性不好的技术问题。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案，一种氟虫腈的液相色谱检测方法，包括以下步骤：

(1)样品配制：

取氟虫腈样品，精密称定，置于容量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，制成供试品溶液；供试品溶液中氟虫腈样品浓度为0.7mg/ml；

取杂质a和杂质b，加溶剂使溶解，摇匀，制成杂质对照溶液；杂质对照溶液中杂质a的浓度为0.1mg/ml，杂质对照溶液中杂质b的浓度为0.1mg/ml；

杂质a为5-氨基-1-(2,6-二氯-4-三氟甲基苯基)-3-氰基-4(三氟甲硫基)吡唑，其结构式如下：

杂质b为5-氨基-1-(2,6-二氯-4-三氟甲基苯基)-3-氰基-4(三氟甲基磺酰基)吡唑，其结构式如下：

(2)检测：取杂质对照溶液、供试品溶液，各进样5μl，先后注入液相色谱仪，读取数据，得到杂质对照色谱图、供试品色谱图；

(3)分析：

如果供试品色谱图中的杂质一的保留时间等于或接近杂质对照色谱图中的杂质a的保留时间，那么判定供试品中含有杂质a；

如果供试品色谱图中的杂质二的保留时间等于或接近杂质对照色谱图中的杂质b的保留时间，那么判定供试品中含有杂质b；

根据供试品色谱图，得到氟虫腈与杂质的含量。

采用上述技术方案，具有以下有益效果：

第一，本发明方法可用于多种氟虫腈质量研究和控制的领域，涉及到的氟虫腈和以氟虫腈为主要成分的药物制剂有关物质检测均可应用本发明方法，如生产、检验和贮存过程中的质量控制、稳定性研究、强制降解研究中有关物质检测；本发明的检测方法分离效率高、分析速度快、检测灵敏性高，通过检测氟虫腈中杂质的含量，控制氟虫腈的质量，更好的控制产品的稳定性和质量。

第二，本发明所用高效液相色谱法，是现代化的检测方法，运用现代化的光电检测器，可以对各个成分进行定性定量检测。本发明的方法检测的专属性更好，如实施例2的图2，高效液相色谱图中分离出多个关键杂质，这些关键杂质与关键工艺参数密切相关，为工艺优化提供了可能，从而提供更高的经济效益。

第三，本发明的方法检测的灵敏度更好，如实施例1的图1，对杂质a的限度控制0.2％，此限度对其他未知杂质也适用，为提供质量标准更优的产品提供可靠的检测方法。

第四，本发明的高效液相色谱法可提供峰纯度数据，除被检出的杂质外，还可判断主峰中有没有包含其他杂质峰。

第五，本发明在保证各相关杂质与有效成分高效分离的基础上，使其具有良好的专属性，精密度和准确度，从而更好地实现对氟虫腈的工艺研究和质量控制，为生产工艺优化，扩大经济效益，提供质量更优的产品提供可靠的检测方法。

优选的，所述液相色谱仪的流动相为四氢呋喃:乙腈:甲醇:水的混合液，四氢呋喃:乙腈:甲醇:水的体积比为0.5:40:30:30。

优选的，所述液相色谱仪的色谱柱为十八烷基键和硅胶色谱柱，色谱柱尺寸为：150×4.6mm，1.8μm。

优选的，所述流速控制在0.5-2ml/min。

优选的，所述流速优选1.0ml/min。

优选的，所述柱温为20-30℃。

优选的，所述柱温为25℃。

优选的，所述液相色谱仪的检测器为紫外吸收检测器，检测波长为200-380nm。

优选的，所述检测波长为210nm。

附图说明

图1是实施例1中氟虫腈与已知杂质的混合色谱图。

图2是实施例2中氟虫腈自身对照检测色谱图。

图3是实施例2中氟虫腈样品检测色谱图。

图4是实施例3中氟虫腈样品检测色谱图。

图5是实施例4中空白溶液检测色谱图。

具体实施方式

为使本领域技术人员更好的理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例和附图对本发明的技术方案进一步阐述。

实施例1：对已知杂质的检测

试验仪器和色谱条件：

安捷伦(agilent)1260高效液相色谱仪

色谱柱：安捷伦(agilent)c18柱(150mm×4.6mm，1.8μm)

溶剂：乙腈：甲醇：纯化水混合液，三者体积比40:30:30

流动相：四氢呋喃：乙腈：甲醇：纯化水混合液，四者体积比0.5:40:30:30

流速设为1.0ml/min，柱温采用25℃，检测波长210nm。

实验步骤：

(1)样品配制：

杂质溶液：取1.5mg氟虫腈峰鉴别crs或工作对照品(含有杂质a和b)，加2.0ml溶剂使溶解，摇匀，制成杂质对照溶液。对照的浓度是，制成约0.1mg/ml。

氟虫腈溶液：取氟虫腈35mg置50ml量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

氟虫腈与已知杂质的混合：取杂质溶液1ml与氟虫腈溶液混合，作为供试品溶液。

(2)检测：取上述供试品溶液，进样5μl，记录色谱图。典型色谱图见图1。

图1是实施例1中氟虫腈与已知杂质的混合色谱图；图中可见，保留时间7.714分钟的杂质为a，保留时间8.366分钟的为杂质b，保留时间6.055分钟的为氟虫腈，杂质与主峰完全分离，杂质明显高于检出限，并且能够定量计算，此方法能够用于成品已知杂质的定量。实施例2：对氟虫腈含量的检测

试验仪器和色谱条件：

安捷伦(agilent)1260高效液相色谱仪

色谱柱：安捷伦(agilent)c18柱(150mm×4.6mm，1.8μm)

溶剂：乙腈：甲醇：纯化水混合液，三者体积比40:38:22

流动相：四氢呋喃：乙腈：甲醇：水混合液，四者体积比0.5:40:30:30

流速设为1.0ml/min，柱温采用25℃，检测波长210nm。

实验步骤：

(1)样品配制：

样品配制：氟虫腈35mg置50ml量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。样品浓度约0.1mg/ml。

自身对照溶液：量取供试品溶液1.0ml置100ml容量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀。再量取上述溶液1.0ml置10ml容量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀。自身对照是约0.1mg/ml。

(2)检测：分别取上述供试品溶液，进样5μl，记录色谱图。典型色谱图见图2，图3。

图2为氟虫腈自身对照的色谱图，关键杂质都能相互分离，可用于工艺研究中的关键工艺参数研究。图3为氟虫腈样品溶液，各杂质可以定量，将工艺参数与关键杂质联系，进行工艺优化。

实施例3：对样品的纯度检测

试验仪器和色谱条件：

安捷伦(agilent)1260高效液相色谱仪

色谱柱：安捷伦(agilent)c18柱(150mm×4.6mm，1.8μm)

溶剂：乙腈：甲醇：纯化水混合液，三者体积比40:30:30

流动相：四氢呋喃：乙腈：甲醇：水混合液，四者体积比0.5:30:40:30

流速设为1.0ml/min，柱温采用30℃，检测波长210nm。

(1)样品配制：

样品配制：氟虫腈35mg置50ml量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

(2)检测：取上述供试品溶液，进样5μl，分别记录色谱图。典型色谱图见图4

图4为氟虫腈样品的色谱图，色谱图峰纯度均符合要求。

实施例4：空白溶液的检测

试验仪器和色谱条件：

安捷伦(agilent)1260高效液相色谱仪

色谱柱：安捷伦(agilent)c18柱(150mm×4.6mm，1.8μm)

溶剂：乙腈：甲醇：纯化水混合液，三者体积比40:30:30

流动相：四氢呋喃：乙腈：甲醇：水混合液，四者体积比0.5:50:25:25

流速设为0.8ml/min，柱温采用30℃，检测波长210nm。

实验步骤：

(1)样品配制：

空白溶液配制：取溶剂1.5ml置安捷伦(agilent)进样瓶中。

(2)检测：取上述空白溶液，进样5μl，记录色谱图。

图5为空白溶液的色谱图。