一种具有α-葡萄糖苷酶抑制功效的中药材的高通量筛选方法与流程

文档序号:25999034发布日期:2021-07-23 21:14阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种具有α-葡萄糖苷酶抑制功效的中药材的高通量筛选方法,其特征在于:包括以下步骤:

体外高通量筛选模型构建:建立α-葡萄糖苷酶和底物pnpg的体外反应模型,利用酶标仪检测生成物pnp的吸光值变化,进而反映中药材对酶的抑制活性;

药材库的建立:选取不同种类的中药材,粉碎后用不同浓度的有机试剂进行提取,获得提取液,建立药材库;

活性筛选:对药材库中的提取液进行过滤,取上清液稀释后加入反应模型使用酶标仪记录起吸光度并绘制曲线,将样品吸光度曲线与空白吸光度曲线进行对照,计算抑制效果。

2.根据权利要求1所述一种具有α-葡萄糖苷酶抑制功效的中药材的高通量筛选方法,其特征在于:所述体外反应模型的反应底物组分为0.05-0.1mol/l、ph6.8-7.2的磷酸钠缓冲液50-150μl,0.8-1u/mlα-葡萄糖苷酶10~25μl,0.00193-0.00232mol/lpnpg溶液10-25μl。

3.根据权利要求1所述一种具有α-葡萄糖苷酶抑制功效的中药材的高通量筛选方法,其特征在于:所述药材库建立步骤中,药材粉碎粒度为20-100目。

4.根据权利要求3所述一种具有α-葡萄糖苷酶抑制功效的中药材的高通量筛选方法,其特征在于:所述药材库建立步骤中,分别用30%-90%浓度的乙醇溶液对药材进行提取,提取料液比为1:10-20,提取时间40-60min。

5.根据权利要求1所述一种具有α-葡萄糖苷酶抑制功效的中药材的高通量筛选方法,其特征在于:所述活性筛选步骤中,使用酶标仪对生成物吸光度进行测定时,测定波长为400-405nm。

6.根据权利要求5所述一种具有α-葡萄糖苷酶抑制功效的中药材的高通量筛选方法,其特征在于:所述活性筛选步骤中,每1min进行一次测定,持续90min。

7.根据权利要求1所述一种具有α-葡萄糖苷酶抑制功效的中药材的高通量筛选方法,其特征在于:所述活性筛选步骤中,用空白吸光度曲线下面积(auc空白)减去样品作用曲线下的积分面积(auc样品),得出曲线下净面积(netauc),曲线下净面积(netauc)与空白曲线下面积的比值即为抑制率,计算公式为:

抑制率%=(auc空白-auc样品)/auc空白×100。

8.根据权利要求7所述一种具有α-葡萄糖苷酶抑制功效的中药材的高通量筛选方法,其特征在于:当抑制率为正数时证明该样品中具有抑制α-葡萄糖苷酶的能力,也说明该药材具有降血糖的功效;反之,抑制率为负数时,说明该样品不具备抑制α-葡萄糖苷酶的能力。


技术总结
本发明公开了一种具有α‑葡萄糖苷酶抑制功效的中药材的高通量筛选方法,是先将待筛选的若干种中药材分别粉碎,再分别用有机溶剂提取,得若干上清液作为待测样本溶液;再在微孔板中加入反应体系;将空白对照样品和待测样本溶液一起置于酶标仪中震荡孵育,加入pNPG溶液摇匀测定各样品在400‑405nm处的吸光值;利用酶标仪自带软件记录吸光度值并绘制出空白对应样品及待测样品吸光度值变化曲线;得出样品曲线净面积Net AUC值;本发明方法一次可筛选几十种甚至上百种中药材,快速、准确率高,操作方便。

技术研发人员:康丹丹;赖富丽;杨跃军;徐剑;周俊强;陈志超;陈琪瑶;崔灵敏
受保护的技术使用者:劲牌有限公司
技术研发日:2021.05.21
技术公布日:2021.07.23
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