一种酶促化学发光底物液的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及免疫检测技术领域，特别涉及一种酶促化学发光底物液。
【背景技术】
[0002] 化学发光分析技术是现代微量分析方法之一，具有灵敏度高、线性范围宽、检测速 度快、仪器设备简单等优点，已广泛应用于环境科学、生命科学、临床医学等领域，成为目前 化学分析领域的热点之一。
[0003] 鲁米诺（luminol，3-氨基邻苯二甲酰肼），是目前应用最广泛的化学发光试剂之 一，具有易合成、成本低等优点。在碱性溶液中，鲁米诺可被氧化剂（如过氧化脲、H2o2等） 氧化，其氧化产物可以吸收反应中产生的能量，生成激发态的3-氨基邻苯二甲酸根离子， 该离子从不稳定的高能态返回到低能态，将能量以光的形式释放，产生化学发光。鲁米诺氧 化产物发光为闪光型，即具有发光强度弱、持续时间短。而鲁米诺发光增强剂，可将其发光 时间、发光强度明显延长或提高。近二十多年来，已有大量关于鲁米诺发光增强剂文献报 道，包括取代酚、萘酚、六羟基苯并噻唑芳香胺，取代硼酸、牛血清白蛋白（BSA)，表面活性剂 如溴化十六烷基三甲基铵、SDS等。
[0004] 目前上市销售化学发光体外诊断试剂中的辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase，HRP)酶促化学发光底物系统，多采用鲁米诺-过氧化脲-增强剂系统，而过氧 化脲本身不稳定，易随存放时间延长而释放〇 2，现有的鲁米诺-增强体系其平台期亦无法满 足临床检测的高灵敏度、高特异性要求，发光底物系统的稳定性尚需提高，而进口发光底物 虽然灵敏度高、特异性强、平台期长，但其试剂成本较高，不便于广大基层临床医院使用。
【发明内容】
[0005] 为了弥补以上领域的不足，本发明提供了一种高效、稳定的HRP酶促化学发光底 物液。
[0006] 本发明所提供的酶促化学发光底物液，其特征在于：所述酶促化学发光底物液由 A液和B液两组组分构成；所述A液含氧化剂和稳定剂；所述B液含发光剂和增强剂；所述 氧化剂为过氧化脲；所述稳定剂为四聚磷酸钠、氟化钠和酒石酸钠；所述发光剂为鲁米诺； 所述增强剂为3-[(3_胆酰胺基丙基）二甲基铵]-1-丙磺酸、对乙酰氨基酚和2、4、6三（二 甲氨基甲基）苯酚。
[0007] 所述A液中氧化剂过氧化脲的浓度为l-10mM。
[0008] 所述A液中稳定剂的各组分质量百分比浓度为：0. 01-0. 05%四聚磷酸钠、 0? 03-0. 05 %氟化钠和0? 01-0. 1 %酒石酸钠。
[0009] 所述B液中发光剂鲁米诺的浓度为l-15mM。
[0010] 所述B液中增强剂的各组分质量百分比浓度为：0. 01-0. 05% 3-[ (3-胆酰胺基丙 基）二甲基铵]-1-丙磺酸、〇? 05-0. 2%对乙酰氨基酚和0? 01-0. 08% 2、4、6三（二甲氨基 甲基）苯酚。
[0011] 所述A液和B液的配方如下：
[0012] A液：
[0013] 过氧化脲，浓度为;
[0014] 四聚磷酸钠，质量百分比浓度为：0. 01-0. 05%;
[0015] 氟化钠，质量百分比浓度为：0? 03-0. 05%;
[0016] 酒石酸钠，质量百分比浓度为：0. 01-0. 1% ;
[0017] pH值为5. 0的柠檬酸缓冲液；
[0018] B液：
[0019] 鲁米诺，浓度为;
[0020] 3-[(3_胆酰胺基丙基）二甲基铵]-1-丙磺酸，质量百分比浓度为：0.01-0.05%;
[0021] 对乙酰氨基酚，质量百分比浓度为：0. 05-0. 2% ;
[0022] 2、4、6三（二甲氨基甲基）苯酚，质量百分比浓度为：0? 01-0. 08% ;
[0023] pH值为8. 4的硼酸缓冲液。
[0024] 优选地，所述A液和B液的配方如下：
[0025]A液：
[0026] 过氧化脲，浓度为：5mM;
[0027] 四聚磷酸钠，质量百分比浓度为：0. 03% ;
[0028] 氟化钠，质量百分比浓度为：0. 04% ;
[0029] 酒石酸钠，质量百分比浓度为：0. 06% ;
[0030] 10mMpH值为5. 0的柠檬酸缓冲液；
[0031] B液：
[0032] 鲁米诺，浓度为：10mM;
[0033] 3_[(3_胆酰胺基丙基）二甲基铵]-1-丙磺酸，质量百分比浓度为：0.03% ;
[0034] 对乙酰氨基酚，质量百分比浓度为：0. 1% ;
[0035] 2、4、6三（二甲氨基甲基）苯酚，质量百分比浓度为：0? 05% ;
[0036] 20mMpH值为8. 4的硼酸缓冲液。
[0037] 本发明还提供了一种化学免疫检测试剂盒，其含有本发明所述的酶促化学底物 液。
[0038] 本发明以优选的四聚磷酸钠、氟化钠、酒石酸钠组合配方，有效解决了氧化剂（过 氧化脲）在实际存放过程不稳定问题；以优选的3-[ (3-胆酰胺基丙基）二甲基铵]-1-丙 磺酸、对乙酰氨基酚、2、4、6三（二甲氨基甲基）苯酚组合配方，增强了鲁米诺-过氧化脲体 系的发光强度、延长其发光持续时间，且其成本较低，可广泛用于临床医院体外诊断配套试 剂，为临床医院提供稳定、灵敏度高、发光平台期长、成本低化学发光底物系统。
[0039] 该化学发光底物液具有稳定、灵敏度高、发光平台期长、成本低等优点，适于临床 医院用于体外诊断配套试剂。
【附图说明】
[0040] 图1为本发明实施例1、2和3的酶促发光底物液与进口发光底物液平台期比较结 果。
[0041] 图2本发明实施例3的酶促发光底物液与进口发光底物液检测PCT校准品建立校 准曲线。
[0042] 图3为本发明实施例3的酶促发光底物液与进口化学发光底物液用于PCT试剂盒 检测的临床样本相关性结果。
【具体实施方式】
[0043] 实施例1、制备本发明酶促化学发光底物液1
[0044] (1)制备酶促化学发光底物液A液：
[0045] 称取0. 0094g过氧化脲（Sigma公司289132)、0.Olg四聚磷酸钠（上海汇凯公司 7727-67-5)、0? 03g氟化钠（国药试剂10019608)、0?Olg酒石酸钠（国药试剂30169816)、 0? 172g柠檬酸（C6H807 *H20 国药试剂 10007108)、0? 347g柠檬酸钠（Na3C6H507 ? 2H20 国药试 剂10019428)，调整pH至5.0,用纯化水定容至100ml。
[0046] 以上方法制备得到的酶促化学发光底物液A液中各组分的浓度如下：
[0047] 过氧化脲，浓度为：ImM;
[0048] 四聚磷酸钠，质量百分比浓度为：0? 01% ;
[0049] 氟化钠，质量百分比浓度为：0. 03% ;
[0050] 酒石酸钠，质量百分比浓度为：〇. 01% ;
[0051] 10mMpH值5. 0的柠檬酸缓冲液；
[0052] (2)制备酶促化学发光底物液B液：
[0053] 称取 0? 0177g鲁米诺（Sigma公司SA851102)、0?OlgCHAPS(Sigma公司 3〇942602)、0.058对乙酰氨基酚（国药试剂30001224)、0.01 82、4、6三（二甲氨基甲基） 苯酚（北京恒业公司90-72-2)、0? 0858g硼砂（国药试剂10020808)、0? 0680g硼酸（国药 试剂10004808)，调整pH至8. 4,用纯化水定容至100ml。
[0054] 以上方法制备得到的酶促化学发光底物液B液中各组分的浓度如下：
[0055] 鲁米诺，浓度为：ImM;
[0056] 3_[(3_胆酰胺基丙基）二甲基铵]-1-丙磺酸，质量百分比浓度为：0.01% ;
[0057] 对乙酰氨基酚，质量百分比浓度为：0. 05% ;
[0058] 2、4、6三（二甲氨基甲基）苯酚，质量百分比浓度为：0? 01% ;
[0059] 20mMpH值为8. 4的硼酸缓冲液。
[0060] 酶促化学发光底物液A液与酶促化学发光底物液B液按1:1 (体积比）比例使用。
[0061] 实施例2、制备本发明酶促化学发光底物液2
[0062] (1)制备酶促化学发光底物液A液：
[0063] 称取0? 094g过氧化脲（Sigma公司289132)、0? 05g四聚磷酸钠（上海汇凯公司 7727-67-5)、0? 05g氟化钠（国药试剂10019608)、0?lg酒石酸钠（国药试剂30169816)、 0? 172g柠檬酸（C6H807 *H20 国药试剂 10007108)、0? 347g柠檬酸钠（Na3C6H507 ? 2H20 国药试 剂10019428)，调整pH至5.0,用纯