盐酸克伦特罗仿生免疫柱及其检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物、材料、生物检测等交叉领域，特别是涉及一种盐酸克伦特罗仿 生免疫柱及其检测方法。
【背景技术】
[0002] 盐酸克伦特罗（Clenbuterol，CLB)是一种肾上腺类神经兴奋剂，临床上曾用于防 治支气管哮喘、慢性支气管炎等病症。CLB是"瘦肉精"的一种，生物利用率高，能够改变动 物体内的代谢途径，促进肌肉和骨骼中蛋白质的合成，加快生长速度，改善胴体品质，增加 瘦肉率。但是，CLB易于在动物体内蓄积，在肺、肝、肾等脏器及肌肉和脂肪组织中的残留量 较大，残留时间较长，且可通过食物链在人体内蓄积，对机体产生毒副作用，主要表现为心 律失常、肌肉震颤、头晕、乏力等，严重的可危及生命。我国和欧盟等多数国家都严禁CLB在 畜禽养殖中应用。
[0003] 盐酸克伦特罗的检测方法主要有仪器方法(高效液相色谱法、液相色谱-质谱联 用法等)和免疫分析方法（ELISA、胶体金试纸条等)。仪器分析法是一种准确、灵敏的检测方 法，但是需要昂贵的仪器和专业的操作人员、不适合大量样品的检测。免疫分析方法，具有 灵敏、快速、操作简单，以及单次检测样品量大，对于液体样品可直接检测，与仪器检测方法 具有较好的一致性。但是该方法中抗体制备周期较长，不易保存，需要试验动物等。
【发明内容】
[0004] 发明目的 针对现有技术的上述不足，本发明旨在提出一种操作简单、特异性强、成本低廉、可通 过颜色变化半定量样品中盐酸克伦特罗含量的仿生免疫柱及其检测方法。
[0005] 技术方案 本发明是通过以下技术方案来实现的： 盐酸克伦特罗仿生免疫柱，其特征在于：包括固相萃取柱、测试层、筛板、固相萃取小 柱转接头和注射器；固相萃取柱与注射器通过固相萃取小柱转接头连接，筛板分为上筛板 和下筛板，固相萃取柱内部为测试层，测试层的顶端装有上筛板，底端装有下筛板；测试层 为盐酸克伦特罗仿生抗体和石英砂的均匀混合物。
[0006] 固相萃取柱的体积为3mL;筛板为聚丙稀筛板，筛板的孔径为20微米。
[0007] 石英砂为100目。
[0008] 盐酸克伦特罗仿生抗体为通过分子印迹技术制备的分子印迹聚合物，所述分子印 迹技术为共价键聚合技术或非共价键聚合技术。
[0009] 一种如上所述盐酸克伦特罗仿生免疫柱的检测方法，其特征在于：该方法步骤如 下： (1) 活化：磷酸盐缓冲液（PBS)活化； (2) 上样：将盐酸克伦特罗溶液或样品溶液用移液器注入固相萃取柱，利用注射器的空 气压力将样品溶液压到测试层； (3) 洗柱：用含有吐温的PBS溶液洗柱； (4) 加入酶标探针； (5) 洗柱：用含有吐温的PBS溶液洗柱； (6) 显色：加入TMB单成分显色剂显色，最后根据测试层颜色深浅判断溶液中盐酸克伦 特罗的浓度，颜色越浅，表明样品中盐酸克伦特罗的含量越多。
[0010] 步骤（1)活化时所用的PBS的pH值为7. 4,活化所用的体积为lmL。
[0011] 步骤（2)中上样用盐酸克伦特罗溶液为甲醇溶液，体积为lmL，吸附时间为3分钟。
[0012] 步骤（3)中洗柱用的PBS溶液含有体积百分比0. 5%的吐温20,用量为lmL。
[0013] 步骤（4)加入的酶标探针为盐酸克伦特罗辣根过氧化物酶标记物，用量为lmL 2000倍稀释的PBS，吸附时间为4分钟。
[0014] 步骤（5)所用PBS为含有体积百分比0. 5%的吐温20,用量为4mL。
[0015] 步骤（6)TMB单成分显色剂的用量为400yL，显色时间为4分钟。
[0016] 优点及效果 本发明具有如下优点及有益效果： 本发明制备的盐酸克伦特罗仿生免疫柱制备简单、其检测时间短、检测成本低、可通过 颜色深浅半定量样品中盐酸克伦特罗的含量，对提高食品安全水平具有重要意义。
【附图说明】
[0017] 图1为本发明盐酸克伦特罗仿生免疫柱的示意图。
[0018] 图2为各部分连接好的盐酸克伦特罗仿生免疫柱示意图。
[0019] 参考图片是本发明的不同盐酸克伦特罗浓度仿生免疫柱检测结果颜色变化图； 1-4号柱盐酸克伦特罗的浓度分别为0、10、100、1000yg/L。
[0020] 附图标记说明： 1为固相萃取柱；2为盐酸克伦特罗分子印迹仿生抗体与石英砂的均匀混合物；3为固 相萃取柱的上筛板，4为固相萃取柱的下筛板；5为固相萃取小柱转接头；6为注射器；7为 活塞柄。
【具体实施方式】
[0021] 下面参照附图对本发明进行详细的说明： 本发明是一种盐酸克伦特罗仿生免疫柱，其特征在于：包括固相萃取柱1、测试层2、筛 板、固相萃取小柱转接头5和注射器6 ;固相萃取柱1与注射器6通过固相萃取小柱转接头 5连接，注射器6上方还设有活塞柄7,筛板分为上筛板3和下筛板4,固相萃取柱1内部为 测试层2,测试层2的顶端装有上筛板3,底端装有下筛板4 ;测试层2为盐酸克伦特罗仿生 抗体和石英砂的均匀混合物。
[0022] 固相萃取柱1的体积为3mL;筛板为聚丙烯筛板，筛板的孔径为20微米。
[0023] 石英砂为100目。
[0024] 盐酸克伦特罗仿生抗体为通过分子印迹技术制备的分子印迹聚合物，所述分子印 迹技术为共价键聚合技术或非共价键聚合技术。
[0025] 一种如上所述盐酸克伦特罗仿生免疫柱的检测方法，其特征在于：该方法步骤如 下： (1) 活化：磷酸盐缓冲液（PBS)活化； (2) 上样：将盐酸克伦特罗溶液或样品溶液用移液器注入固相萃取柱，利用注射器的空 气压力将样品溶液压到测试层； (3) 洗柱：用含有吐温的PBS溶液洗柱； (4) 加入酶标探针； (5) 洗柱：用含有吐温的PBS溶液洗柱； (6) 显色：加入TMB单成分显色剂显色，最后根据测试层颜色深浅判断溶液中盐酸克伦 特罗的浓度，颜色越浅，表明样品中盐酸克伦特罗的含量越多。
[0026] 步骤（1)活化时所用的PBS的pH值为7. 4,活化所用的体积为lmL。
[0027] 步骤（2)中上样用盐酸克伦特罗溶液为甲醇溶液，体积为lmL，吸附时间为3分钟。
[0028] 步骤（3)中洗柱用的PBS溶液含有体积百分比0. 5%的吐温20,用量为lmL。
[0029] 步骤（4)加入的酶标探针为盐酸克伦特罗辣根过氧化物酶标记物，用量为lmL 2000倍稀释的PBS，吸附时间为4分钟。
[0030] 步骤（5)所用PBS为含有体积百分比0. 5%的吐温20,用量为4mL;步骤（6)TMB单 成分显色剂的用量为400yL，显色时间为4分钟。
[0031] 下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。
[0032] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0033] 实施例1 盐酸克伦特罗仿生免疫柱的构成(如图2所示)包括固相萃取柱1、筛板(上筛板3、下筛 板4)、固相萃取小柱转接头5、注射器6、测试层2,所述测试层为盐酸克伦特罗仿生抗体和 石英砂的均匀混合物。
[0034] 将所述的下筛板4,测试层2,上筛板3依次装入固相萃取柱1中。