一种二乙二醇丙酸甲酯化修饰剂检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种检测方法，尤其涉及一种快速，简便，准确的二乙二醇丙酸甲酯化 修饰剂检测方法。
【背景技术】
[0002] 聚乙二醇（PEG)是迄今为止已知聚合物中蛋白和细胞吸收水平最低的聚合物，由 于PEG无毒及良好的生物相容性，药物的PEG修饰是将活化的PEG通过化学方法偶联到药 物上的过程，PEG化后能改善药物的理化性质和生物学活性，改进了药物动力学和药效等性 质，显著增强药物的溶解性和稳定性，减少免疫原性和抗原性，降低毒副作用，增加了体内 生物活性和疗效等功效，这种技术现已开始应用于蛋白质（肽类）、酶、抗体及小分子药物 中。
[0003] 该修饰剂广泛应用于各类药物的修饰研究与应用，当前国内外对聚乙二醇修饰剂 的检测分析还未见报道。本发明根据二乙二醇丙酸甲酯化修饰剂的结构特性，采用离子排 阻高效液相色谱进行定量检测分析。
【发明内容】
[0004] 本发明提供了一种快速，简便，准确的二乙二醇丙酸甲酯化修饰剂检测方法。
[0005] 为了实现上述目地，本发明采用以下技术方案： 一种二乙二醇丙酸甲酯化修饰剂检测方法，所述检测方法包括以下步骤： a) 制备标准品贮备液：称取二乙二醇丙酸甲酯95-105mg，加水溶解并定容lOOOmL，得 到标准贮备液，在0-4°C下保存； b) 标准液配制：分别吸取步骤1)得到的标准储备液l、2、3、4、5mL于100mL容量瓶中， 加水定容； 3) 绘制标准曲线：将步骤b)的标准液根据浓度由低至高依次进行离子排阻高效液相 色谱检测并绘制标准曲线； 4) 测定：吸取待测样品lmL加纯水稀释到浓度为1-5yg/mL，然后将待测样品溶液注入 离子排阻高效液相色谱进行检测，参照标准曲线，依据定量离子进行峰面积定量计算。本发 明快速，简便，准确，条件温和易于操作，可用于PEG微量与半微量测定，可以应用于PEG修 饰剂及PEG修饰药物的含量测定与质量控制。
[0006] 作为优选，二乙二醇丙酸甲酯的结构式为：
【主权项】
1. 一种二乙二醇丙酸甲酯化修饰剂检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步 骤： a) 制备标准品贮备液：称取二乙二醇丙酸甲酯95-105mg，加水溶解并定容lOOOmL，得 到标准贮备液，在0-4°C下保存； b) 标准液配制：分别吸取步骤1)得到的标准储备液l、2、3、4、5mL于100mL容量瓶中， 加水定容； 3) 绘制标准曲线：将步骤b)的标准液根据浓度由低至高依次进行离子排阻高效液相 色谱检测并绘制标准曲线； 4) 测定：吸取待测样品lmL加纯水稀释到浓度为1-5yg/mL，然后将待测样品溶液注入 离子排阻高效液相色谱进行检测，参照标准曲线，依据定量离子峰面积大小进行定量计算。
2. 根据权利要求1所述的一种二乙二醇丙酸甲酯化修饰剂检测方法，其特征在于，二 乙二醇丙酸甲酯的结构式）
3. 根据权利要求2所述的一种二乙二醇丙酸甲酯化修饰剂检测方法，其特征在于，二 乙二醇丙酸甲酯是由二乙二醇与丙烯酸甲酯在催化剂作用下制备而成的，制备条件为：压 力 0? 1-0. 8Mpa，反应温度 10-220°C。
4. 根据权利要求3所述的一种二乙二醇丙酸甲酯化修饰剂检测方法，其特征在于，二 乙二醇与丙烯酸甲酯的质量比为1:1-1.85。
5. 根据权利要求3所述的一种二乙二醇丙酸甲酯化修饰剂检测方法，其特征在于，溶 齐IJ为乙醚、乙醇、丙酮、乙腈中的一种、催化剂为纳米金催化齐IJ、纳米银催化齐IJ、氧化铈、纳米 氧化镁中的一种或几种，溶剂的用量为二乙二醇与丙烯酸甲酯总质量的10-20%。
6. 根据权利要求2或3或4所述的一种二乙二醇丙酸甲酯化修饰剂检测方法，其特征 在于，二乙二醇与丙烯酸甲酯在开始反应前，先超声震动1-3小时，超声功率为65-85kw，震 动半小时后加入催化剂，催化剂的用量为二乙二醇与丙烯酸甲酯总质量的〇. 5-1. 1%。
7. 根据权利要求1所述的一种二乙二醇丙酸甲酯化修饰剂检测方法，其特征在于，离 子排阻高效液相色谱的检测条件为：色谱柱：Bi〇-radHPX-87H(5um，300_x7.8mm);流动 相：pHl. 0 - 3. 0硫酸溶液，流速：0. 4-1. 2mL/min;进样量为20uL;柱温40-60°C;采用紫外 检测器，检测波长为190-220nm。
【专利摘要】本发明涉及一种二乙二醇丙酸甲酯化修饰剂检测方法，所述检测方法包括以下步骤：制备标准品；标准液配制；绘制标准曲线；测定：将待测样品溶液注入离子排阻高效液相色谱进行检测，参照标准曲线，依据定量离子进行峰面积定量计算。本发明快速，简便，准确,条件温和易于操作，可用于PEG微量与半微量测定，可以应用于PEG修饰剂及PEG修饰药物的含量测定与质量控制。
【IPC分类】G01N30-02
【公开号】CN104614451
【申请号】CN201410739263
【发明人】施立钦, 邱从平, 华旭
【申请人】宁波北仑大港科技创新服务中心
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2014年12月8日