或蟹的肌肉加入蔗糖匀浆液中进行冰浴匀浆，制得虾 或蟹的肌肉勾衆液，将此勾衆液迅速加入第二反应体系中进行反应30min~60min，优选反 应30min，然后立刻向此反应液中加入终止液例如HCLO 4，终止反应。
[0028] 本发明还提出了一种用于虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定的反应体系，即第一反 应体系，其包括：80 ~85mM KC1，15 ~18mM MgC12,0. 5 ~0. 9mM EGTA，12 ~14mM 4-羟乙 基哌嗪乙磺酸，12 ~14mM DTT，3 ~6mM ΑΤΡ，0· 1 ~0· 2mM NAD+，0. 1 ~0· 2mM C〇A，0. 4 ~ 0. 6mM L-肉碱，0. 4~0. 6mM L-苹果酸，23~25 μ M细胞色素 C，以及40~50nM被14C标 记的脂肪酸溶液。其中，所述被14C标记的脂肪酸溶液包含被 14C标记的脂肪酸与牛血清蛋 白。其中，所述被14C标记的脂肪酸为被14C标记的棕榈酸、油酸、亚油酸、亚麻酸或花生四烯 酸之任意一种。
[0029] 优选地，所述反应体系包含 83. 3mM KC1，16. 7mM MgCl2,0. 7mM EGTA，13. 3mM H印es (4-羟乙基哌嗪乙磺酸），13. 3mM DTT，5mM ATP，0· 2mM NAD+，0· 2mM CoA，0· 5mM L-carnitine(肉喊），0.5mM L_malate(苹果酸），25μΜ cytochrome-c(细胞色素 C)和 50nM被14C标记的脂肪酸溶液。
[0030] 本发明还提出一种用于虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定的反应体系，即第二反应 体系，其包含：80 ~85mM KC1，15 ~18mM MgC12,0. 5 ~0. 9mM EGTA，12 ~14mM 4-羟乙基 哌嗪乙磺酸，12 ~14mM DTT，3 ~6mM ATP，0· 1 ~0· 2mM NAD+，0· 1 ~0· 2mM CoA，2 ~3mM KCN，0. 2~0. 4mM鱼藤酮，以及40~50nM被14C标记的脂肪酸溶液。其中，所述被14C标记 的脂肪酸溶液包含被 14C标记的脂肪酸与牛血清蛋白。其中，所述被14C标记的脂肪酸为被 14C标记的棕榈酸、油酸、亚油酸、亚麻酸或花生四烯酸之任意一种。
[0031] 优选地，所述反应体系包含 83. 3mM KC1，16. 7mM MgCl2,0. 7mM EGTA，13. 3mM H印es (4-羟乙基哌嗪乙磺酸），13. 3mM DTT，5mM ATP，0· 2mM NAD+，0· 2mM CoA，2. 6mM KCN， 0. 38mM rotenone (鱼藤酮）和50nM被14C标记的脂肪酸溶液。
[0032] 本发明还提出了一种用于虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定的试剂盒。所述试剂盒 包括前述第一反应体系，第二反应体系，虾蟹匀浆液，反应终止剂和闪烁液。所述试剂盒用 于线粒体与过氧化物酶体贝塔氧化反应速率测定和过氧化物酶体贝塔氧化反应速率测定。
[0033] 本发明提出的虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法，可以在体外精确灵敏的测定 机体在一定温度下对脂肪酸的利用效率，通过 14C标记的脂肪酸（例如棕榈酸、油酸、亚油 酸、亚麻酸或花生四烯酸），构建脂肪酸贝塔氧化反应体系，加入虾或蟹组织匀浆液在体外 进行脂肪酸贝塔氧化测定，可以准确测定机体在体外的脂肪酸贝塔氧化速率，进而反应机 体对脂肪酸的利用效率。本发明利用脂肪酸在体外被氧化分解的利用效率进行测定，间接 反映虾蟹组织对脂肪酸的利用偏好，测定机体对脂肪酸进行β氧化的效率，作为衡量机体 生存状态的直接敏感指标。利用本发明测定方法还可以评定机体对脂肪酸利用效率，进而 评定机体的代谢状况。
[0034] 水产养殖虾蟹类饲料中添加用油大都富含多种脂肪酸，在传统营养研宄中，若想 衡量某种脂肪酸对生物体内的利用效率，假如利用单一脂肪酸或富含单一脂肪酸的油类长 期饲喂对生物体存活、生长、发育繁殖不利，因此其利用效率无法进行探宄。而运用本发明 虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法可以在体外测定单一脂肪酸贝塔氧化速率，进而评定 机体对脂肪酸的利用效率，
[0035] 本发明利用某一种特定脂肪酸（例如：棕榈酸、油酸、亚油酸等）在体外被氧化分 解的利用效率进行测定，可以间接反映虾蟹组织对脂肪酸的利用偏好。饥饿状态下，机体主 要由线粒体内的脂肪酸β -氧化为相应的组织器官提供能量。而在绝大多数真核细胞内， 线粒体和过氧化物酶体共同合作对脂肪酸进行β氧化。因此测定机体对脂肪酸进行β氧 化的效率，可以作为衡量机体生存状态的直接敏感指标。饲喂某些药物来改变机体代谢状 态后，亦可以用本发明提出的虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法来评定机体对脂肪酸利 用效率，进而评定机体的代谢水平。
【附图说明】
[0036] 图1为本发明实施例中35°C下中华绒螯蟹肝胰腺线粒体和过氧化物酶体β氧化 速率。
[0037] 图2为本发明实施例中25°C下中华绒螯蟹肝胰腺线粒体和过氧化物酶体β氧化 速率。
[0038] 图3为本发明实施例中35 °C下中华绒螯蟹肌肉线粒体和过氧化物酶体β氧化速 率。
[0039] 图4为本发明实施例中25 °C下中华绒螯蟹肌肉线粒体和过氧化物酶体β氧化速 率。
[0040] 图5为本发明实施例中35°C下日本沼虾肝胰腺线粒体和过氧化物酶体β氧化速 率。
[0041] 图6为本发明实施例中25°C下日本沼虾肝胰腺线粒体和过氧化物酶体β氧化速 率。
[0042] 图7为本发明实施例中35°C下日本沼虾肌肉线粒体和过氧化物酶体β氧化速率。
[0043] 图8为本发明实施例中25°C下日本沼虾肌肉线粒体和过氧化物酶体β氧化速率。
【具体实施方式】
[0044] 结合以下具体实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的保护内容 不局限于以下实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变 化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。实施本发明的过程、 条件、试剂、实验方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知常识， 本发明没有特别限制内容。
[0045] 本发明提出了一种虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法，包括以下步骤：
[0046] ①配置用于线粒体和过氧化物酶体反应的第一反应体系；配置用于抑制线粒体活 性的第二反应体系；
[0047] ②分别向第一反应体系、第二反应体系中加入虾蟹匀浆液，进行反应；
[0048] ③分别向第一反应体系、第二反应体系中加入终止剂HCLO4，终止反应，过夜，抽滤 并取抽滤的上清液，加入闪烁液；
[0049] ④用入液闪仪测定其放射性强度。
[0050] 实施例
[0051] (1)实施动物：
[0052] 活力旺盛的20g左右中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis) 4只，活力旺盛的2. 3g左 右曰本沼虫下（Macrobrachium nipponense) 15 只。
[0053] (2)实施步骤：
[0054] ①分别配置两种反应体系，第一反应体系是保证线粒体和过氧化物酶体都反应， 第二反应体系抑制线粒体的活性。具体地，
[0055] 第一反应体系含有 83. 3mM KCl，16. 7mM MgCl2,0· 7mM EGTA，13. 3mM H印es (4-羟 乙基哌嗪乙磺酸），13. 3mM DTT，5mM ΑΤΡ，0· 2mM NAD+，0. 2mM C〇A，0. 5mM L-carnitine (肉 碱），0· 5mM L-malate (苹果酸），25 μ M cytochrome-c (细胞色素 C)，以及被14C标记的脂 肪酸溶液。
[0056] 其中，被14C标记的脂肪酸溶液为：50nM 14C标记棕榈酸（palmitic acid简称PA)， 50nM 标记油酸（oleic acid 简称 0A)