一种补体c3检测方法
【技术领域】：
[0001] 本发明属于生物技术领域，提供一种补体C3检测方法，具有灵敏度高，特异性强， 试剂配制简单的特点，值得进一步推广使用。
【背景技术】：
[0002] C3是血清中含量最高的补体成分，由巨噬细胞、单核细胞、淋巴组织、骨髓、腹膜和 肝脏等合成的一种β球蛋白，在C3转化酶的作用下，裂解成C3a和C3b两个片段，在补体 经典激活途径和旁路激活途径中均发挥重要作用。
[0003] C3是补体各成分中含量最高的一种，且是补体激活途径中最重要的环节，故其含 量的测定非常重要。C3增多与减少与总补体活性基本相符，但更为敏感。约70%-80%的 急性肾小球肾炎、狼疮性肾炎患者血清C3含量减少，病情缓解后可恢复正常，故C3的测定 不仅有助于诊断，还可以观察疗效和监测预后。C3降低还可见于自身免疫性疾病、新生儿呼 吸窘迫综合征、菌血症、组织损害和慢性肝炎。
[0004] 补体C3的检测方法有单向免疫扩散法、ELISA法、免疫透射比浊法等。单向免疫扩 散法费时，变异大，结果不易观察，测量直径不精确；ELISA法重复性不好，易出现假阳性， 受温度和时间影响最大；免疫透射比浊法相对优于之前两种方法，但存在所需抗血清量大 的缺点。本发明采用胶乳增强免疫比浊法，不仅灵敏度高，准确性好，不费时的优点，而且所 需的样本量极少，更加经济节约。
【发明内容】
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[0005] 本发明的目的在于，大量制备补体C3胶乳试剂，以提高补体C3检测效率，增强检 测准确性。
[0006] 本发明的技术方案：应用化学方法交联，通过水溶性碳化二亚胺（EDC)与N-羟基 琥珀酰亚胺（NHS)使羊抗人补体C3抗血清与羧化聚苯乙烯胶乳共价交联，形成补体C3胶 乳试剂。具体操作如下：
[0007] 补体C3胶乳试剂的制备：
[0008] 取粒径为10011111浓度为5%胶乳微球11111，加入100臟〇1/1，？册.0的磷酸盐缓冲 液9ml，混合均匀后分别加入5mg水溶性碳化二亚胺（EDC)与N-羟基琥珀酰亚胺（NHS)， 室温搅拌20min，2-8°C离心30min (转速12000)，用100mmol/L，PH6. 0的磷酸盐缓冲液洗 涤三次，除去上清液，取沉淀用100mm〇l/L，PH6. 0的磷酸盐缓冲液Iml重悬，并加入200 μ 1 羊抗人补体〇3抗血清，室温搅拌511，2-8°0离心3〇1^11(转速12000)，沉淀用含0.05%吐 温-20 (Tween 20)，100mm〇l/L，ΡΗ6. 0的磷酸盐缓冲液洗涤三次，除去上清液，所得沉淀用 100mm〇l/L，PH6. 0的磷酸盐缓冲液进行稀释，2-8°C密封保存。
[0009] 本检测方法的原理为将羊抗人补体C3抗体交联于胶乳微粒上，与待测样品中的 补体C3发生抗原-抗体反应，引起微粒凝集，形成一定的池度，在340nm波长下，通过同样 处理的校准品对照，定量检测出样品中补体C3的含量。
【附图说明】：
[0010] 图1分别采用本发明试剂与市售试剂A，采用奥林巴斯400全自动生化分析仪，对 50份样本（包含正常和异常样本），按各自参数进行测定，并对测定值进行相关分析。其 中X轴表示的是本发明试剂的测定值，Y轴表示的是市售试剂A的测定值。相关系数：r 2 = 0· 9948,线性方程为：y = L 041χ-0· 054。
[0011] 图2 :采用奥林巴斯400全自动生化分析仪，对5个梯度浓度的试剂进行测定，并 对测定值进行相关分析。其中X轴表示的是稀释浓度，Y轴表示的是测定值均值。相关系 数：r 2= 0· 9963,线性方程为：y = I. 0272X-0. 0007。
【具体实施方式】：
[0012] 实施例
[0013] 将本发明方法配制成试剂盒，进行与市售试剂盒进行性能比较：
[0014] 本发明试剂配成试剂盒的具体成分如下：
【主权项】
1. 本发明提供一种补体C3检测方法，所述检测方法基于胶乳增强免疫比浊法，为液体 双试剂，包括试剂Rl与R2,所述试剂Rl含PH6. O磷酸盐缓冲液，吐温-20 (Tween 20)，乙二 胺四乙酸二钠（EDTA-2Na)，氯化钠，聚乙二醇（PEG6000)，叠氮钠；试剂R2为含有补体C3胶 乳颗粒的溶液，其特点在于应用化学方法交联，通过水溶性碳化二亚胺（EDC)与N-羟基琥 珀酰亚胺（NHS)使羊抗人补体C3抗血清与羧化聚苯乙烯胶乳共价交联，形成补体C3胶乳 试剂。
2. 根据权利要求1所述化学交联方法制备补体C3胶乳试剂，其特征在于所用的羧化聚 苯乙稀胶乳粒径为l〇〇nm。
3. 根据权利要求1所述化学交联方法制备补体C3胶乳试剂，其特征在于羧化聚苯乙烯 胶乳与羊抗人C3抗血清共价交联过程中分别添加水溶性碳化二亚胺（EDC)与N-羟基琥珀 酰亚胺（NHS)。
4. 根据权利要求1所述，其特征在于样品中mAlb的计算公式为： 样品中补体C3浓度（g/L) = CsX AAtMAs 式中：ΛΑΤ以空白管吸光度为对照的样品管吸光度； Λ As以空白管吸光度为对照的校准管吸光度； Cs校准液中补体C3的浓度。
【专利摘要】本发明提供一种补体C3检测方法，所述检测方法基于胶乳增强免疫比浊法，为液体双试剂，包括试剂R1与R2，所述试剂R1含PH6.0磷酸盐缓冲液，吐温-20(Tween 20)，乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)，氯化钠，聚乙二醇(PEG6000)，叠氮钠；试剂R2为含有补体C3胶乳颗粒的溶液，其特点在于应用化学方法交联，通过水溶性碳化二亚胺(EDC)与N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)使羊抗人补体C3抗血清与羧化聚苯乙烯胶乳共价交联，形成补体C3胶乳试剂。本试剂灵敏度高，特异性强，试剂配制简单，值得进一步推广使用。
【IPC分类】G01N33-68, G01N21-33
【公开号】CN104833810
【申请号】CN201510226757
【发明人】王贤俊, 郑蓓蕾, 郭二豪, 江新涛
【申请人】王贤俊
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2015年5月2日