一种气质法快速测定畜禽肉中β-兴奋剂的前处理方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种气质法快速测定畜禽肉中兴奋剂的前处理方法。
【背景技术】
[0002] 特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺属于e-肾上腺素能受体兴奋剂，均 具有促进动物体内营养物质由脂肪组织向肌肉组织转移的作用。但是动物在食用含特布 他林、克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺的饲料后，会造成药物在肌肉及组织中不同程度的 残留，人体过量的摄入这种药物会发生中毒等毒副作用，另外还可引起代谢紊乱，对糖尿病 人可发生酸中毒或酮中毒。因此很多国家对此类药物的最高残留量都有严格规定，由于近 年来我国加大了对克伦特罗使用的监管力度，有些不法分子转而非法使用特布他林、沙丁 胺醇、莱克多巴胺，影响了我国的畜禽产品的安全，严重威胁了人民的生命健康。因此对于 研宄猪肉为代表的动物组织中同时测定特布他林、沙丁胺醇莱、克多巴胺，克伦特罗4种 0-兴奋剂的检测技术具有重大而深远的现实意义。传统的处理方法在提取过程中一般采 用三种以上的溶剂，容易造成目标物的损失，实验的准确度低，步骤多，并且会造成环境的 污染。
【发明内容】
[0003] 本发明主要解决现有技术所存在的技术问题，从而提供一种气质法快速测定畜禽 肉中兴奋剂的前处理方法。
[0004]本发明是一种气质法快速测定畜禽肉中兴奋剂的前处理方法，仪器包括：气 相色谱--质谱联用仪、高速冷冻离心机、固相萃取小柱WCX、SCX、MCX、固相萃取装置和氮 吹仪；试剂包括：高氯酸、甲醇、氨水、甲苯、N，0-双三甲基硅烷三氟乙酰胺即BSTFA和纯度 彡98%的标准品。
[0005] 作为优选，所述气相色谱一质谱联用仪为安捷伦7890-5975C相色谱一质谱联用 仪，色谱、质谱结构精准。
[0006] 作为优选，所述标准品包括沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、硫酸特布他林和莱克多巴 胺，为四种兴奋剂。
[0007] 本发明一种气质法快速测定畜禽肉中0 _兴奋剂的前处理方法的步骤为： a、 标准溶液的配制：准确称取四种标准品lmg，用甲醇定容至10mL，配成0.lg/L的标 准储备液，至于4°C冰箱中避光保存。使用时用甲醇逐级稀释储备液，配制成50、100、500、 1000yg/L的标准溶液； b、 样品提取：准确称取捣碎的鲜肉2g于50mL离心管中，加入5%的高氯酸10mL，祸旋 混合，超声提取30min，于高速离心机10000r/min离心15min，倾出上清液后再用5%的高氯 酸10mL重复提取，合并上清液，待净化； c、 样品净化：依次用3mL甲醇和3mL去离子水活化平衡固相萃取小柱WCX，取1. 3上清 液以lmL/min的流速过柱，然后分别用3mL去离子水和3mL甲醇淋洗SPE柱，抽干后用5% 氨化甲醇5mL淋洗柱子，收集洗脱液，经氮吹干后备用； d、 衍生化：吹干物加入衍生化试剂BSTFA+1%TMCS80yL，于具塞试管中涡旋混合器充 分混匀，在80°C的烘箱中加热30min，氮气吹干，加甲苯0. 5mL溶解供GC-MS分析，同时标准 溶液氮气吹干，也按样品同步进行衍生化； e、 气相色谱或质谱： (1) 、检测气相色谱或质谱条件：HP-5ms石英毛细管柱的规格为 30mX0. 25mmX0. 25ym，进样口温度为280°C，载气为高纯氦气，纯度彡99. 999%; (2) 、以不分流方式进样，进样量为lyl; (3) 、进行升温，首先120°C保持lmin，以10°C/min上升至230°C，保持5min，再以10°C/ min上升至280°C，保持3min; (4) 、电子轰击源，电离电压为70eV，接口温度为280°C; (5) 、溶剂延迟lOmin; (6) 、选取SM模式，监测离子。
[0008] 作为优选，所述样品提取中捣碎的鲜肉要精确到0.Olg，结果更加准确。
[0009] 本发明的有益效果是：本发明采用气质法，建立了比现有文献报道都简单的动物 组织中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺等四种肾上腺素能受体兴奋剂的 前处理方法，在样品提取中主要采用高氯酸一种提取溶剂，不仅步骤少，可以避免目标物的 损失，提高了实验的准确度，溶剂用的种类少了可以避免因实验带来的环境污染。4种兴奋 剂在50-1000yg/L的范围具有良好线性，相关系数在0. 995以上，加标回收率在84. 32~ 103. 15%之间，RSD在1. 35~4. 78%之间，准确可靠在气相色谱定性的基础上，从结构上得 到化合物特征碎片离子质谱图，避免了假阳性结果的出现，并且其最低检出限和加标回收 率符合目前国内外检测要求。
【附图说明】
[0010] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本 发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以 根据这些附图获得其他的附图。
[0011] 图1为本发明一种气质法快速测定畜禽肉中e-兴奋剂的前处理方法中4种兴奋 剂的总离子流图。
【具体实施方式】
[0012] 一种气质法快速测定畜禽肉中兴奋剂的前处理方法，仪器包括：气相色 谱--质谱联用仪、高速冷冻离心机、固相萃取小柱WCX、SCX、MCX、固相萃取装置和氮吹仪； 试剂包括：高氯酸、甲醇、氨水、甲苯、N，0-双三甲基硅烷三氟乙酰胺即BSTFA和纯度彡98% 的标准品。
[0013] 所述气相色谱--质谱联用仪为安捷伦7890-5975C相色谱一质谱联用仪，色谱、 质谱结构精准。
[0014] 所述标准品包括沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、硫酸特布他林和莱克多巴胺，为四种 0-兴奋剂。
[0015] -种气质法快速测定畜禽肉中0 _兴奋剂的前处理方法的步骤为： a、 标准溶液的配制：准确称取四种标准品lmg，用甲醇定容至10mL，配成0.lg/L的标 准储备液，至于4°C冰箱中避光保存。使用时用甲醇逐级稀释储备液，配制成50、100、500、 1000yg/L的标准溶液； b、 样品提取：准确称取捣碎的鲜肉2g于50mL离心管中，加入5%的高氯酸10mL，祸旋 混合，超声提取30min，于高速离心机10000r/min离心15min，倾出上清液后再用5%的高氯 酸10mL重复提取，合并上清液，待净化； c、 样品净化：依次用3mL甲醇和3mL去离子水活化平衡固相萃取小柱WCX，取1. 3上清 液以lmL/min的流速过柱，然后分别用3mL去离子水和3mL甲醇淋洗SPE柱，抽干后用5% 氨化甲醇5mL淋洗柱子，收集洗脱液，经氮吹干后备用； d、 衍生化：吹干物加入衍生化试剂BSTFA+1%TMCS80yL，于具塞试管中涡旋混合器充 分混匀，在80°C的烘箱中加热30min，氮气吹干，加甲苯0. 5mL溶解供GC-MS分析，同时标准 溶液氮气吹干，也按样品同步进行衍生化； e、 气相色谱或质谱： (1) 、检测气相色谱或质谱条件：HP-5ms石英毛细管柱的规格为 30mXO. 25mmX0. 25ym，进样口温度为280°C，载气为高纯氦气，纯度彡99. 999%; (2) 、以不分流方式进样，进样量为lyl; (3) 、进行升温，首先120°C保持lmin，以10°C/min上升至230°C，保持5min，再以10°C/ min上升至280°C，保持3min; (4) 、电子轰击源，电离电压为70eV，接口温度为280°C; (5) 、溶剂延迟lOmin; (6) 、选取SM模式，监测离子。
[0016] 所述样品提取中捣碎的鲜肉要精确到0.Olg，结果更加准确。 试验结果： 1、 线性范围及方程
[0017] 将事先配制好的系列标准溶液（50、100、500、1000 1^/1)经方法(1进行衍生化后， 上机检测，绘制标准工作曲线，线性方程、线性范围及线性相关系数见表1，总离子流图见图 1〇 表1四种兴奋剂的线性方程
【主权项】
1. 一种气质法快速测定畜禽肉中e-兴奋剂的前处理方法，其特征在于：仪器包括：气 相色谱--质谱联用仪、高速冷冻离心机、固相萃取小柱WCX、SCX、MCX、固相萃取装置和氮 吹仪；试剂包括：高氯酸、甲醇、氨水、甲苯、N，O-双三甲基硅烷三氟乙酰胺即BSTFA和纯度 彡98%的标准品。
2. 根据权利要求1所述的一种气质法快速测定畜禽肉中0 _兴奋剂的前处理方法，其 特征在于：所述气相色谱一质谱联用仪为安捷伦7890-5975C气相色谱一质谱联用仪。
3. 根据权利要求1所述的一种气质法快速测定畜禽肉中0 _兴奋剂的前处理方法，其 特征在于：所述标准品包括沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、硫酸特布他林和莱克多巴胺。
4. 根据权利要求1所述的一种气质法快速测定畜禽肉中0 _兴奋剂的前处理方法，其 特征在于：该步骤为： a、 标准溶液的配制：准确称取四种标准品lmg，用甲醇定容至10mL，配成0. lg/L的标 准储备液，至于4°C冰箱中避光保存。使用时用甲醇逐级稀释储备液，配制成50、100、500、 1000 y g/L的标准溶液； b、 样品提取：准确称取捣碎的鲜肉2g于50mL离心管中，加入5%的高氯酸10mL，祸旋 混合，超声提取30min，于高速离心机10000r/min离心15min，倾出上清液后再用5%的高氯 酸IOmL重复提取，合并上清液，待净化； c、 样品净化：依次用3mL甲醇和3mL去离子水活化平衡固相萃取小柱WCX，取1. 3上清 液以lmL/min的流速过柱，然后分别用3mL去离子水和3mL甲醇淋洗SPE柱，抽干后用5% 氨化甲醇5mL淋洗柱子，收集洗脱液，经氮吹干后备用； d、 衍生化：吹干物加入衍生化试剂BSTFA+1%TMCS80 y L，于具塞试管中涡旋混合器充 分混匀，在80°C的烘箱中加热30min，氮气吹干，加甲苯0. 5mL溶解供GC-MS分析，同时标准 溶液氮气吹干，也按样品同步进行衍生化； e、 气相色谱或质谱： (1) 、检测气相色谱或质谱条件：HP-5ms石英毛细管柱的规格为 30mX0. 25mmX0. 25 ym，进样口温度为280°C，载气为高纯氦气，纯度彡99. 999% ; (2) 、以不分流方式进样，进样量为Iul ; (3) 、进行升温，首先120°C保持lmin，以10°C /min上升至230°C，保持5min，再以10°C / min上升至280°C，保持3min ; (4) 、电子轰击源，电离电压为70eV，接口温度为280°C ; (5) 、溶剂延迟IOmin ; (6) 、选取SM模式，监测离子。
5. 根据权利要求4所述的一种气质法快速测定畜禽肉中0 -兴奋剂的前处理方法，其 特征在于：所述样品提取中捣碎的鲜肉在称取过程中要精确到0. 〇lg。
【专利摘要】本发明涉及一种气质法快速测定畜禽肉中β-兴奋剂的前处理方法，研究了气相色谱-质谱测定畜禽肉中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺的简便、高效、准确的前处理技术。将绞碎的肉样品用5%高氯酸超声波提取，再以10000r/min离心15min后，上清液用WCX固相萃取柱进行富集净化，衍生化后检测。4种兴奋剂在50-1000μg/L的范围具有良好线性，相关系数在0.995以上，加标回收率在84.32～103.15%之间，RSD在1.35～4.78%之间，避免了假阳性结果的出现，并且其最低检出限和加标回收率符合目前国内外检测要求。
【IPC分类】G01N30-06
【公开号】CN104849377
【申请号】CN201510045683
【发明人】郑睿行, 方建军, 张旭, 鲍利锋, 梅凯, 王键
【申请人】衢州市质量技术监督检测中心
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2015年1月29日