一种血小板检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及血液检测技术领域，尤其涉及一种血小板检测方法。
【背景技术】
[0002]血栓弹力图于1948年由德国人Harter发明。1980年代开始广泛用于临床指导术中输血取得了良好效果，现已成为当今监测凝血功能的最重要指标。血栓弹力图仪能够输出血凝时间R、血凝速率Angel及血块强度MA等凝血参数以及纤溶整个过程。血栓弹力图监测血凝块的物理特性基于以下原理:将一特制静止盛有血液的圆柱形杯以4° 45'的角度旋转，每一次转动持续10秒。通过一根由螺旋丝悬挂且浸泡在血样中的针来监测血样的运动。纤维蛋白和血小板复合物将杯和针粘在一起后，杯旋转所产生的旋转力能传递至血样中的针。纤维蛋白和血小板复合物的强度能影响针运动的幅度，以致强硬的血凝块能使针的运动与杯的运动同步进行。因此，针的运动幅度与已形成的血凝块的强度有直接关系。当血凝块回缩或溶解时，针与血凝块的联结解除，杯的运动不再传递给针。针的旋转被机电传感器转换成电子信号，这一电子信号能用电脑来监测。
[0003]目前，纤维蛋白原和血小板功能检测通常通过血栓弹力图实验进行的。其中，血栓弹力图血小板功能检测试剂是由普通杯检测试剂、纤维蛋白激活剂、血小板激活剂(如花生四烯酸)组成的。现有的血小板功能检测的方法包括:在临床检测时，临时配制纤维蛋白原激活剂和血小板激活剂并将两者混合形成混合试剂；将混合试剂放入西林瓶中制备成冻干粉；根据需要将定量的混合试剂用蒸馏水复溶；在复溶后的混合试剂中加入全血样本；通过血栓弹力图仪对全血样本的动态凝固过程进行监测，从而定量计算出患者的纤维蛋白原和血小板的复合强度；通过血栓弹力图仪测得纤维蛋白原的强度，从纤维蛋白原和血小板的复合强度中去除纤维蛋白原的强度即可获取血小板的强度。
[0004]然而，现有的通过血栓弹力图实验进行血小板功能检测时，在样本检测过程中会伴随称量、计算、复溶、多次加样等多步试剂重构和试剂加样过程，操作极其复杂，之前方法结果特异性低，检测结果经常受到外界操作的干扰，同时它的检测准确性差，血小板激活剂(如花生四烯酸)很容易氧化，导致血小板激活失效，在临床检测中会出现纤维蛋白原假阴性结果，给临床造成误判，指导患者药物治疗的效果不佳。
[0005]因此，针对以上不足，本发明提供了一种血小板检测方法。
【发明内容】
[0006](一)要解决的技术问题
[0007]本发明的目的是提供一种血小板检测方法以解决现有的血小板检测方法存在的操作复杂、检测结果易受外界干扰和检测准确性差的问题。
[0008](二)技术方案
[0009]为了解决上述技术问题，本发明提供了一种血小板检测方法，其包括以下步骤:
[0010]S1、将纤维蛋白原激活剂和血小板激活剂混合后通过缓冲液进行溶解配制形成混合试剂；
[0011]S2、在混合试剂中加入抗氧化试剂形成抗氧化混合激活试剂；
[0012]S3、将抗氧化混合激活试剂放入样品杯中；
[0013]S4、将样品杯放入西林瓶中，并将该西林瓶进行冷冻以使样品杯中的抗氧化混合激活试剂冻干和粘附在样品杯的杯底；
[0014]S5、将步骤S4中西林瓶进行抽真空和压盖处理，以使样品杯在真空环境中存储；
[0015]S6、将样品杯从西林瓶中取出，置于血栓弹力图仪中，将采集后的全血样本加入样品杯内；
[0016]S7、启动血栓弹力图仪对样品杯中混合有抗氧化混合激活试剂的全血样本进行检测，以定量得出纤维蛋白原和血小板的复合强度值。
[0017]S8、从纤维蛋白原和血小板的复合强度值中去除纤维蛋白原的强度值以获取血小板的强度值。
[0018]其中，步骤S6中，通过加样枪将全血样本加入样品杯内并进行混吸，以使抗氧化混合激活试剂与全血样本充分混合。
[0019]其中，步骤SI中，所述血小板激活剂为花生四烯酸，花生四烯酸在混合试剂中的浓度为I?10mol/L。
[0020]其中，所述缓冲试剂包括三羟甲基氨基甲烷、磷酸缓冲液、乙磺酸和柠檬酸中的一种或多种，所述混合试剂的pH值为7.0?8.0。
[0021]其中，所述纤维蛋白原激活剂包括凝血酶、蛇毒类凝血酶、巴曲酶和立止血中一种或几种。
[0022]其中，步骤SI中，所述纤维蛋白原激活剂在混合试剂中的浓度为0.1?10U/ml。
[0023]其中，步骤S2中，所述抗氧化试剂包括抗坏血酸、异抗坏血酸、维生素E、硫辛酸和二硫苏糖醇中的一种或多种，所述抗氧化试剂在抗氧化混合激活试剂中的浓度为I?15mol/L。
[0024]其中，在步骤S3中，在抗氧化混合激活试剂中混入固相试剂后放入样品杯中。
[0025]其中，所述固相试剂包括蔗糖、海藻糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖和聚乙二醇中的一种或多种，固相试剂与抗氧化混合激活试剂的体积比值范围为1%-10%。
[0026](三)有益效果
[0027]本发明的上述技术方案具有如下优点:本发明提供的血小板检测方法中，将纤维蛋白原激活剂和血小板激活剂混合后通过缓冲液进行溶解配制形成混合试剂，然后混入抗氧化试剂形成抗氧化混合激活试剂后，再在其中加入固定试剂，将制得的试剂放入样品杯中，样品杯放入西林瓶中，对西林瓶进行抽真空和压盖处理，以使样品杯在真空环境中存储；临床检测过程中，直接拿出装有样品杯中的西林瓶，打开西林瓶取出样品杯即可通过血栓弹力图仪对全血样本进行测试，可方便地获取血小板测试结果，该方法操作简便，不需要称量、计算、复溶、多次加样等繁琐操作步骤，检测结果不受外界操作干扰，抗氧化剂能有效降低血小板激活剂的氧化速率，使血小板激活剂处于一个惰性环境中，同时样品杯中的样品在存储时处于真空环境下，提高样品杯内试剂的稳定性，进而可提高血小板检测结果的准确性。
【附图说明】
[0028]图1是本发明实施例血小板检测方法中样品杯和西林瓶的结构剖视图。
[0029]图中，1:西林瓶；2:样品杯；3:杯盖；4 封塞；5:圆盖；6:易拉盖。
【具体实施方式】
[0030]下面结合附图和实施例对本发明的【具体实施方式】作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0031]在本发明的描述中，除非另有说明，“多种”的含义是两种或两种以上。术语“上”、“下”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
[0032]实施例一
[0033]本发明提供的血小板检测方法包括以下步骤:
[0034]S1、将纤维蛋白原激活剂和血小板激活剂混合后通过缓冲液进行溶解配制形成混合试剂；
[0035]其中，混合试剂的pH值为7.0-8.0 ;纤维蛋白原激活剂包括凝血酶、蛇毒类凝血酶、巴曲酶和立止血中一种或几种，纤维蛋白原激活剂在混合试剂中的浓度为0.1?1U/ml ;血小板激活剂为花生四烯酸，花生四烯酸在混合试剂中的浓度为I?lOmol/L ;缓冲试剂包括三羟甲基氨基甲烷(Tris)、磷酸缓冲液(PBS)、乙磺酸和柠檬酸中的一种或多种。
[0036]S2、在混合试剂中加入抗氧化试剂形成抗氧化混合激活试剂；
[0037]其中，抗氧化试剂包括抗坏血酸、异抗坏血酸、维生素E、硫辛酸和二硫苏糖醇中的一种或多种，所述抗氧化试剂在抗氧化混合激活试剂中的浓度为I?15mol/L ;抗氧化剂能有效降低花生四烯酸的氧化速率，使花生四烯酸处于一个惰性环境中。
[0038]S3、将抗氧化混合激活试剂放入样品杯中；样品杯包括杯身和杯盖，该样品杯优选为可放置在血栓弹力图仪上、便于实验测试的样品杯。
[0039]S4、将样品杯放入西林瓶中，并将该西林瓶进行冷冻以使样品杯中的抗氧化混合激活试剂冻干和粘附在样品杯的杯底；
[0040]其中，西林瓶上密封有密封塞，将西林瓶放置在冻干机托盘上，启动冻干机进行冻干，冻干时间为24小时，其中可在冻干机上同时放置多个装有样品杯的西林瓶。
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