1]S5、将步骤S4中西林瓶进行抽真空和压盖处理，以使样品杯在真空环境中存储；
[0042]其中，真空度优选为5?10Pa。这样，可保证冻干试剂与外界环境分离，避免试剂因接触空气中的氧气和水分而失效，稳定了试剂的性能，有利于试剂的长期储存。
[0043]S6、将样品杯从西林瓶中取出，置于血栓弹力图仪中，将采集后的全血样本加入样品杯内；
[0044]S7、启动血栓弹力图仪对样品杯中混合有抗氧化混合激活试剂的全血样本进行检测，以定量得出纤维蛋白原和血小板的复合强度值。纤维蛋白原和血小板的复合强度值是通过纤维蛋白原和血小板的振幅值体现出来的。
[0045]S8、根据现有的常规手段获取纤维蛋白原的强度值，从纤维蛋白原和血小板的复合强度值中去除纤维蛋白原的强度值以获取血小板的强度值。
[0046]在血小板检测实验时，可直接取来步骤S5中真空压盖好的西林瓶，打开西林瓶，取出其中的样品杯，将样品杯放置在血栓弹力图仪上，然后将患者的全血进行采集，将采集的全血样本注入样品杯中，进行检测即可获取纤维蛋白原和血小板的复合强度值，然后去除通过常规手段获取纤维蛋白原的强度值，即可以得到血小板的强度值，实现对血小板的检测。
[0047]在实际应用中，患者服用抗血小板药物阿司匹林后通过本发明的方法检测出血小板的功能值，然后将患者的纤维蛋白原功能值减掉，就可以得到患者服用阿司匹林后的血小板功能净值，通过与患者未服药血小板净值对比，可得出患者在服药后的血小板抑制比例，从而间接反映患者抗血小板药物阿司匹林疗效，指导心血管疾病患者临床治疗及愈后。
[0048]通过本发明的方法在临床检测过程中无需加入激活试剂，无需进行血液标本的预处理过程,血样采集后可直接检测。血栓弹力图仪会自动分析检测患者全血样本的血小板振幅、纤维蛋白振幅、凝血酶振幅，通过特定分析公式可得出患者的抗血小板药物抑制率，定量分析患者药物作用效果，快速指导心脑血管患者临床诊断、治疗及愈后，为临床提供必要的药效监测依据。
[0049]进一步地，在步骤S6中，通过加样枪将全血样本加入样品杯内并进行混吸，以使抗氧化混合激活试剂与全血样本充分混合。其中，混吸的次数一般为三次。
[0050]优选地，在步骤S3中，在抗氧化混合激活试剂中混入固相试剂后放入样品杯中；
[0051]其中，所述固相试剂包括蔗糖、海藻糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖和聚乙二醇(PEG)中的一种或多种，固相试剂与抗氧化混合激活试剂的体积比值范围为1%-10%。固相试剂可充分与样品杯底部均匀结合，并且该固相试剂与血液混合后有很好的扩散效果，在标本加入后快速在血液中溶解，保证了血样检测的稳定性。
[0052]实施例二
[0053]如图1所示，在实施例一的基础上，实施例二公开了一种血小板检测方法的样品杯2和西林瓶I。
[0054]具体地，样品杯2包括杯身和杯盖3，杯盖3主体为中空圆柱体，圆柱体顶端具有周向延伸的边沿，杯盖3主体伸入到杯腔中；样品杯2装在西林瓶I内，西林瓶I的瓶口设置有密封塞4，密封塞4的下端压装在样品杯的杯盖3上，西林瓶I上端装有易拉盖6，易拉盖6与密封塞4之间设有圆盖5，样品杯的杯盖3内的中空腔用于固定金属针头，配合血栓弹力图仪的使用；密封塞4的下端压装在样品杯的杯盖3上，在样品杯2和西林瓶I存储和转移的过程中防止样品杯2移动。
[0055]使用时，首先将样品杯2放置于西林瓶I中；其次，将纤维蛋白原激活试剂、血小板激活试剂及缓冲液定量加入到样品杯2内的空腔中，并将样品杯的杯盖3装在样品杯的杯身上；然后，将样品杯2和西林瓶I放置于冻干机上进行冻干；最后，在真空条件下压上密封塞4进行封装，然后装上圆盖5和易拉盖6。
[0056]综上所述，本发明提供的血小板检测方法中，将纤维蛋白原激活剂和花生四烯酸混合后通过缓冲液进行溶解配制形成混合试剂，然后混入抗氧化试剂形成抗氧化混合激活试剂后，再在其中加入固定试剂，将制得的试剂放入样品杯中，样品杯放入西林瓶中，对西林瓶进行抽真空和压盖处理，以使样品杯在真空环境中存储；临床检测过程中，直接拿出装有样品杯中的西林瓶，打开西林瓶取出样品杯即可通过血栓弹力图仪对全血样本进行测试，方便地获取血小板测试结果，该方法操作简便，不需要称量、计算、复溶、多次加样等繁琐操作步骤，检测结果不受外界操作干扰，抗氧化剂能有效降低花生四烯酸的氧化速率，使花生四烯酸处于一个惰性环境中，提高检测准确性；其中的固相试剂可充分与样品杯底部均匀结合，并且该固相试剂与血液混合后有很好的扩散效果，在血样标本加入后快速在血液中溶解，保证了血样检测的稳定性。
[0057]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种血小板检测方法，其特征在于:其包括以下步骤: 51、将纤维蛋白原激活剂和血小板激活剂混合后通过缓冲液进行溶解配制形成混合试剂； 52、在混合试剂中加入抗氧化试剂形成抗氧化混合激活试剂； 53、将抗氧化混合激活试剂放入样品杯中； 54、将样品杯放入西林瓶中，并将该西林瓶进行冷冻以使样品杯中的抗氧化混合激活试剂冻干和粘附在样品杯的杯底； 55、将步骤S4中西林瓶进行抽真空和压盖处理，以使样品杯在真空环境中存储； 56、将样品杯从西林瓶中取出，置于血栓弹力图仪中，将采集后的全血样本加入样品杯内； 57、启动血栓弹力图仪对样品杯中混合有抗氧化混合激活试剂的全血样本进行检测，以定量得出纤维蛋白原和血小板的复合强度值。 58、从纤维蛋白原和血小板的复合强度值中去除纤维蛋白原的强度值以获取血小板的强度值。2.根据权利要求1所述的血小板检测方法，其特征在于:步骤S6中，通过加样枪将全血样本加入样品杯内并进行混吸，以使抗氧化混合激活试剂与全血样本充分混合。3.根据权利要求1所述的血小板检测方法，其特征在于:步骤SI中，所述血小板激活剂为花生四烯酸，花生四烯酸在混合试剂中的浓度为I?lOmol/L。4.根据权利要求1所述的血小板检测方法，其特征在于:所述缓冲试剂包括三羟甲基氨基甲烷、磷酸缓冲液、乙磺酸和柠檬酸中的一种或多种，所述混合试剂的PH值为7.0?8.0。5.根据权利要求1所述的血小板检测方法，其特征在于:所述纤维蛋白原激活剂包括凝血酶、蛇毒类凝血酶、巴曲酶和立止血中一种或几种。6.根据权利要求1所述的血小板检测方法，其特征在于:步骤SI中，所述纤维蛋白原激活剂在混合试剂中的浓度为0.1?10U/ml。7.根据权利要求1所述的血小板检测方法，其特征在于:步骤S2中，所述抗氧化试剂包括抗坏血酸、异抗坏血酸、维生素E、硫辛酸和二硫苏糖醇中的一种或多种，所述抗氧化试剂在抗氧化混合激活试剂中的浓度为I?15mol/L。8.根据权利要求1所述的血小板检测方法，其特征在于:在步骤S3中，在抗氧化混合激活试剂中混入固相试剂后放入样品杯中。9.根据权利要求8所述的血小板检测方法，其特征在于:所述固相试剂包括蔗糖、海藻糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖和聚乙二醇中的一种或多种，固相试剂与抗氧化混合激活试剂的体积比值范围为1%-10%。
【专利摘要】本发明涉及血液检测技术领域，尤其涉及一种血小板检测方法。该血小板检测方法包括将纤维蛋白原激活剂和血小板激活剂混合后通过缓冲液进行溶解配制形成混合试剂；在混合试剂中加入抗氧化试剂形成抗氧化混合激活试剂；将抗氧化混合激活试剂放入样品杯中；将样品杯放入西林瓶中，并对该西林瓶进行冷冻、抽真空和压盖处理；将样品杯从西林瓶中取出，置于血栓弹力图仪中，将采集后的全血样本加入样品杯内；启动血栓弹力图仪对样品杯中混合有抗氧化混合激活试剂的全血样本进行检测；从纤维蛋白原和血小板的复合强度值中去除纤维蛋白原的强度值以获取血小板的强度值。该方法操作简便、检测结果不受外界干扰以及检测结果准确性高。
【IPC分类】G01N33/86
【公开号】CN104914254
【申请号】CN201410086000
【发明人】魏明明, 邱笑违, 陈永强
【申请人】北京乐普医疗科技有限责任公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2014年3月10日