一种基于氧化石墨烯和纳米金的单碱基突变检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种单碱基突变检测方法，具体为一种基于氧化石墨烯和纳米金的单碱基突变检测方法，属于DNA分子检测技术领域。
【背景技术】
[0002]单碱基突变是DNA或RNA中的序列碱基的替换而产生的一种基因变异种类，这种突变的碱基将会影响到DNA的功能而产生各类遗传疾病。人类基因组中I %的等位基因会出现单碱基突变，因此对其的早期诊断以达到对特定遗传疾病的治疗具有至关重要的作用。研制具有快速、简单且具有高靶向性的单碱基突变检测方法非常有价值和必要。
[0003]目前已经报道的单碱基突变检测的方法有很多种，如microarray-basedsequencing，primer extens1n，ligat1n-based method，enzyme invasive cleavage 等酶辅助的方法以及DNA杂交的方法。酶辅助方法具有很高的灵敏度以及强的特异性，但酶抗外界稳定性差，操作过程复杂和严格的实验条件等缺点，限制了其在复杂样品检测中的应用。DNA杂交由于在测试过程中无需酶的参与，抗环境干扰能力大大提升，同时由于碱基互补配对具有很强的特异性，实现了单碱基突变的检测。
[0004]在DNA杂交检测单碱基突变的方法中，主要集中在对某个点的检测而对于突变位置的检测却鲜有报道。目前已报道的突变位置的检测均是通过内嵌染料进行的电化学的方法[Ankan Dutta Chowdhury，Nidhi Agnihotri，Amitabha De,Munna Sarkar.Sensors andactuators B:Chemical 2014，202，917-923 ;T.Garcia，M.Revenga-Parra，H.D.Abruna，F.Pariente，E.Lorenzo，Analytical chemistry，2008，80，77-84.]，要利用电化学工作站对由于突变点的存在而产生的电化学信号的变化进行捕捉，而其他方法并未见可对突变点位置进行检测。
【发明内容】
[0005]本发明要解决上述技术问题，提出一种基于氧化石墨烯和纳米金的单碱基突变检测方法，将具有单碱基突变的DNA序列与其正常互补序列进行配对修饰于纳米金粒子上，利用由于DNA序列存在单碱基突变点位置的不同而产生的空间位阻效应和静电作用达到调控纳米金与氧化石墨烯吸附作用，因此不仅可以检测单碱基突变，也能达到对突变位置的检测，以解决【背景技术】中绣制纹路困难的技术问题。
[0006]为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案:
[0007]本发明提供一种基于氧化石墨烯和纳米金的单碱基突变检测方法，利用DNA修饰过的纳米金对氧化石墨烯的吸附具有差异来检测单碱基突变，将双链DNA接枝到纳米金粒子表面，利用具有修饰的纳米金在氧化石墨烯上吸附动力学的差别，实现用紫外分光光度计实时研宄单碱基突变的状况。
[0008]本发明的步骤为:首先将3 μ M DNA与1nM纳米金在Tris-HCl且pH = 7的缓冲液中孵育，然后加入IM NaCl盐溶液，待沉降后离心15000rpm 30min。其中，3μΜ DNA与1nM纳米金在Tris-HCl且pH = 7的缓冲液中孵育时间为8小时。
[0009]将将一次孵育所得溶液离心15000rpm 30min的溶液再加入3 μ M待测DNA，然后进一步二次孵育8小时，再对孵育8小时后的溶液离心15000rpm 30min。
[0010]将二次孵育所得溶液加入95.2 μ g/mL氧化石墨烯，然后立即进行紫外光谱动力学测定，测定520nm处吸光度变化，判断单碱基突变是否突变以及突变点的位置。
[0011]与现有技术相比，本发明具有的有益效果是:本发明为一种基于氧化石墨烯和纳米金的单碱基突变检测方法，实现了对突变点位置的检测，不需要复杂仪器，仅用紫外分光光度计即可实现定位，用比色法可实现定性分析。
【具体实施方式】
[0012]以下本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
[0013]一种基于氧化石墨烯和纳米金的单碱基突变检测方法，其特征在于，利用DNA修饰过的纳米金对氧化石墨烯的吸附具有差异来检测单碱基突变，将双链DNA接枝到纳米金粒子表面，利用具有修饰的纳米金在氧化石墨烯上吸附动力学的差别，实现用紫外分光光度计实时研宄单碱基突变的状况。
[0014]首先将3μΜ DNA与1nM纳米金在Tris-HCl且pH = 7的缓冲液中孵育，然后加入IMNaCl盐溶液，待沉降后离心15000rpm 30min。其中，3μΜ DNA与1nM纳米金在Tris-HCl且pH = 7的缓冲液中孵育时间为8小时。
[0015]将一次孵育所得溶液离心15000rpm 30min的溶液再加入3 μ M待测DNA，然后进一步二次孵育8小时，再对孵育8小时后的溶液离心15000rpm 30min。
[0016]将二次孵育所得溶液加入95.2 μ g/mL氧化石墨烯，然后立即进行紫外光谱动力学测定，测定520nm处吸光度变化，判断单碱基突变是否突变以及突变点的位置。
[0017]本发明为一种基于氧化石墨烯和纳米金的单碱基突变检测方法，实现了对突变点位置的检测，不需要复杂仪器，仅用紫外分光光度计即可实现定位，用比色法可实现定性分析。
[0018]最后应说明的是:以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种基于氧化石墨稀和纳米金的单碱基突变检测方法，其特征在于，利用DNA修饰过的纳米金对氧化石墨烯的吸附具有差异来检测单碱基突变，将双链DNA接枝到纳米金粒子表面，利用具有修饰的纳米金在氧化石墨烯上吸附动力学的差别，实现用紫外分光光度计实时研宄单碱基突变的状况。2.根据权利要求1所述的一种基于氧化石墨烯和纳米金的单碱基突变检测方法，其特征在于，首先将3 μ M DNA与1nM纳米金在Tris-HCl且pH = 7的缓冲液中孵育，然后加入IM NaCl盐溶液，待沉降后离心15000rpm 30min。3.根据权利要求2所述的一种基于氧化石墨烯和纳米金的单碱基突变检测方法，其特征在于，3 μ M DNA与1nM纳米金在Tris-HCl且pH = 7的缓冲液中孵育时间为8小时。4.根据权利要求2所述的一种基于氧化石墨烯和纳米金的单碱基突变检测方法，其特征在于，将一次孵育所得溶液离心15000rpm 30min的溶液再加入3 μΜ待测DNA，然后进一步二次孵育8小时，再对孵育8小时后的溶液离心15000rpm 30min。5.根据权利要求4所述的一种基于氧化石墨烯和纳米金的单碱基突变检测方法，其特征在于，将二次孵育所得溶液加入95.2 μ g/mL氧化石墨烯，然后立即进行紫外光谱动力学测定，测定520nm处吸光度变化，判断单碱基突变是否突变以及突变点的位置。
【专利摘要】本发明公开了一种基于氧化石墨烯和纳米金的单碱基突变检测方法，利用DNA修饰过的纳米金对氧化石墨烯的吸附具有差异来检测单碱基突变，将双链DNA接枝到纳米金粒子表面，利用具有修饰的纳米金在氧化石墨烯上吸附动力学的差别，实现用紫外分光光度计实时研究单碱基突变的状况，本发明为一种基于氧化石墨烯和纳米金的单碱基突变检测方法，实现了对突变点位置的检测，不需要复杂仪器，仅用紫外分光光度计即可实现定位，用比色法可实现定性分析。
【IPC分类】G01N21/31
【公开号】CN104964934
【申请号】CN201510271333
【发明人】郑斌, 程盛, 朱金苗, 姚东宝, 梁好均, 朱文娟
【申请人】合肥师范学院
【公开日】2015年10月7日
【申请日】2015年5月22日