一种准确评定玉米黄曲霉毒素b1含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种准确评定玉米黄曲霉毒素B1含量的方法，属于饲料技术领域。 (二）
【背景技术】
[0002] 霉菌毒素是霉菌在饲料、饲料原料等上生长的过程中所产生的有毒的次级代谢产 物，包括霉菌使饲料的成分转变而形成的有毒物质。霉菌毒素能够干扰许多靶器官和系统， 尤其是肝脏、肾脏、神经系统、内分泌系统和免疫系统等，引发人类和动物疾病。研究表明当 植物受到霉菌毒素的侵害时，会进行自我保护，将非极性的毒素与糖、氨基酸或硫酸盐等结 合，转化为极性更强的代谢产物，储存在液泡中或结合在器官、组织、细胞器等的生物大分 子上，从而产生霉菌毒素的结合态。常规的霉菌毒素检测方法只能检测到游离态的霉菌毒 素，不能检测结合态的霉菌毒素，因而这部分结合态的毒素也被称为隐蔽性毒素。现有的 研究表明，结合态的霉菌毒素经动物消化后会被部分或全部释放出来，危害畜禽的健康，因 此，建立一种将结合态霉菌毒素释放，准确地评定饲料及饲料原料中霉菌毒素含量的方法 具有重要的意义。 (三）
【发明内容】
[0003] 为了解决上述问题，本发明提供了一种准确评定玉米黄曲霉毒素B1含量的方法， 目的是提供一种通过体外酶消化与ELISA测定相结合的准确测定玉米黄曲霉毒素B1含量 且适于生产应用的方法，可以为养殖生产中饲料质量的保障提供支持。
[0004] 本发明是这样实现的：将粉碎后玉米样品进行体外消化，取消化后的消化液以 ELSIA方法进行其中黄曲霉毒素B1含量的测定，从而确定玉米样品中黄曲霉毒素B1的含 量。
[0005] -种准确评定玉米黄曲霉毒素B1含量的方法，包括以下步骤：
[0006] (1)将玉米样品粉碎，过60目筛；
[0007] (2)准确称取步骤1)所述样品1. 0g(精确到0· OOOlg)，加入浓度为1. Omg/mL的 胃蛋白酶水溶液10~15mL(pH = 2)，密封，35~40°C水浴恒温振荡（160~200r/min)消 化3h ;
[0008] (3)向步骤2)所述消化3h后的样品中加入浓度为1. 0m〇l/L NaOH溶液0. lmL中 和；
[0009] (4)向步骤3)所述中和后的样品中加入浓度为2. 5mg/mL胰酶水溶液10~15mL， 混合均匀后转移到12000~14000D的透析袋中，封口；
[0010] (5)将步骤4)所述封口后的透析袋放入200ml磷酸盐缓冲液（pH = 7. 6)中，35~ 40°C水浴恒温振荡（180~200r/min)消化4h ;
[0011] (6)取步骤5)所述消化4h后、透析袋外消化液，以ELISA方法检测消化液中黄曲 霉毒素B1的含量，检测操作按市售黄曲霉毒素B1检测试剂盒说明书方法进行。
[0012] 本发明的使用效果是：作为一种通过体外酶消化方法将玉米原料中结合态霉菌毒 素有效释放，可综合评定结合态和游离态霉菌毒素含量的方法，适用于生产中饲料原料和 饲料中黄曲霉毒素B1含量的准确测定，能真实地反映饲料原料及饲料中黄曲霉毒素B1的 实际含量，可以有效保障饲料质量。 (三）【具体实施方式】
[0013] 实施例1
[0014] (1)采集发霉玉米样品1个，粉碎机粉碎，过60目筛；
[0015] (2)准确称取步骤（1)所述样品1. 0362g，加入浓度为1. Omg/mL胃蛋白酶水溶液 10mL(pH = 2)，密封，37°C水浴恒温振荡（180r/min)消化3h ;
[0016] (3)向步骤⑵所述消化3h后的样品中加入浓度为1. Omol/L NaOH溶液0. lmL中 和；
[0017] (4)向步骤⑶所述中和后的样品中加入浓度为2. 5mg/mL胰酶水溶液10mL，混合 均匀后转移到12000~14000D的透析袋中，封口；
[0018] (5)将步骤⑷所述封口后的透析袋放入200ml磷酸盐缓冲液（pH = 7. 6)中，37 °C 水浴恒温振荡（180r/min)消化4h ;
[0019] (6)取步骤（5)所述消化4h后、透析袋外消化液，以ELISA方法检测消化液中黄曲 霉毒素B1的含量（黄曲霉毒素B1检测试剂盒购自江苏省苏微微生物研究有限公司），检测 操作按试剂盒说明书方法进行；使用试剂盒测定消化液中的黄曲霉毒素B1的含量，根据消 化液中黄曲霉毒素B1的含量通过简单的消化液体积的换算折算成每克玉米中的量，即可 得到每g玉米样品中黄曲霉毒素B1的含量。
[0020] (7)检测得到所采集发霉玉米样品黄曲霉毒素B1的含量为875. 4ng/g。
[0021] 实施例2
[0022] (1)采集的6份不同来源的发霉玉米样品，按照上述本发明的方法分别进行玉米 样品体外消化和黄曲霉毒素B1含量的测定，同时以黄曲霉毒素B1检测试剂盒直接检测对 应的未经体外消化玉米样品中黄曲霉毒素B1含量。检测所用黄曲霉毒素B1检测试剂盒均 购自江苏省苏微微生物研究有限公司。
[0023] (2)试验结果
[0024] 试验结果表明，玉米样品按本发明方法进行体外消化后再经ELISA方法检测的黄 曲霉毒素B1含量较未经体外消化、直接ELISA方法检测的黄曲霉毒素B1含量显著升高（表 1)，结果证明黄曲霉毒素B1在玉米内存在结合态和游离态两种形式，结合态霉菌毒素经消 化后会被释放出来，从而转变为游离态的霉菌毒素。
[0025] 表1本发明方法与直接ELISA检测方法测定玉米样品黄曲霉毒素B1含量，ng/g
[0026]
【主权项】
1. 一种准确评定玉米黄曲霉毒素B1含量的方法，其特征在于利用体外消化的方法有 效释放玉米中的结合态黄曲霉毒素B1，结合ELISA方法准确评定黄曲霉毒素B1的含量；包 括以下步骤： (1)将玉米样品粉碎，过60目筛； ⑵准确称取步骤1)所述样品1. 〇g，加入浓度为1. 0mg/mL、pH= 2的胃蛋白酶水溶液 10~15mL，密封，35~40°C水浴、160~200r/min恒温振荡消化3h; (3)向步骤2)所述消化3h后的样品中加入浓度为1.Omol/LNaOH溶液0.lmL中和； ⑷向步骤3)所述中和后的样品中加入浓度为2. 5mg/mL胰酶水溶液10~15mL，混合 均匀后转移到12000~14000D的透析袋中，封口； (5) 将步骤4)所述封口后的透析袋放入200mlpH= 7. 6的磷酸盐缓冲液中，35~40°C 水浴180~200r/min恒温振荡消化4h; (6) 取步骤5)所述消化4h后、透析袋外消化液，以ELISA方法检测消化液中黄曲霉毒 素B1的含量。
【专利摘要】本发明涉及一种准确评定玉米黄曲霉毒素B1含量的方法，是将粉碎后玉米样品进行两步酶法(胃蛋白酶—胰酶)体外消化，取消化后的消化液以ELSIA方法进行其中黄曲霉毒素B1含量的测定，从而确定玉米样品中黄曲霉毒素B1的含量。取消化液以ELSIA方法进行黄曲霉毒素B1含量的测定，确定玉米样品中黄曲霉毒素B1的含量。目的是提供一种通过体外酶消化与ELISA测定相结合的快速准确测定玉米黄曲霉毒素B1含量且适于生产应用的方法，可以为养殖生产中饲料质量的保障提供支持。
【IPC分类】G01N33/558
【公开号】CN105353120
【申请号】CN201510938305
【发明人】林海, 焦洪超, 范国燕, 赵景鹏, 王晓鹃
【申请人】山东农业大学
【公开日】2016年2月24日
【申请日】2015年12月15日