一种信号放大方法及相关装置的制造方法
【技术领域】
[0001 ]本发明设及一种用于检测祀物质的信号放大方法及相关装置。
【背景技术】
[0002] 简单、灵敏、有效的检测技术在疾病诊断、新药开发、生化防御等领域意义重大。中 国专利CN 01822390.7公开了一种检测分析物的测试条测试法，该方法是首先对检测抗体 (祀向试剂)进行生物素(配体)化修饰，示踪颗粒标记了抗生物素抗体(标记物），运样在检 测过程中会形成"树枝状"结构，使检测信号得W放大。基于运一原理制备的乙肝表面抗原 检测试纸条较Abbott公司的乙肝表面抗原检测试纸条更为灵敏。中国专利CN200880132189 公开了一种免疫层析测试中信号放大的方法W及使用该方法的免疫层析试剂盒，该方法采 用两种不同粒径的偶联物超灵敏检测祀物质的信号方法，也是采用了树枝状信号放大技 术。
[0003] 现有的检测祀物质(或分析物)的信号放大方法只能针对一种祀物质进行分析，但 在检测领域，往往需要对样品中的多种祀物质进行超灵敏检测，方可作出准确可靠的判断， 现有的检测方法往往是每个项目单独检测，然后综合各个检测结果，得出检测结论，且需要 准备多种试纸条并采用多份样品进行测试。现有的联检方法都是在各个单检体系中寻找一 个折衷的体系建立起来的，运个折衷的体系往往是W牺牲检测灵敏性为代价的，所W目前 已有的联合同时检测方法的灵敏性往往不够理想，无法满足现实需要。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是提供一种用于检测祀物质的信号放大方法及相关 装置，该信号放大方法不但能够高灵敏检测祀物质，而且实现了多种祀物质的同时检测。 [000引本发明所要解决的技术问题通过W下技术方案予W实现： 一种检测祀物质的信号放大方法，包括： 将具有能特异性结合不同祀物质的多种第一分子的偶联体与多种祀物质结合，偶联体 还包括连接体、和与多种第一分子和连接体结合的第一颗粒； 桥接体与偶联体的连接体结合，桥接体包括能特异性结合偶联体的连接体的第二分 子； 通过能特异性结合不同祀物质的多种第Ξ分子分别捕获与桥接体结合后的偶联体上 的多种祀物质。
[0006] -种检测祀物质的信号放大方法，包括： 将具有能特异性结合不同祀物质的多种第一分子的偶联体与多种祀物质结合，偶联体 还包括与多种第一分子结合的第一颗粒； 桥接体与偶联体的第一分子结合，所述桥接体包括能特异性结合偶联体的多种第一分 子的第二分子； 通过能特异性结合不同祀物质的多种第Ξ分子分别捕获与桥接体结合后的偶联体上 的多种祀物质。
[0007] 优选地，所述祀物质为蛋白质分子、蛋白质分子复合物、核酸、核酸复合物中的任 意一种。
[0008] -种检测祀物质的免疫层析试纸，包括依次搭接粘贴在底板上的样品垫、第一结 合垫、层析膜、吸水垫;所述第一结合垫包被有偶联体和桥接体，其中该偶联体包括能特异 性结合不同祀物质的多种第一分子、连接体及与多种第一分子和连接体结合的第一颗粒， 桥接体包括能特异性结合偶联体的连接体的第二分子;所述层析膜上不同区域的检测线固 定有能特异性结合不同祀物质的多种第Ξ分子。
[0009] -种检测祀物质的免疫层析试纸，包括依次搭接粘贴在底板上的样品垫、第一结 合垫、层析膜、吸水垫;所述第一结合垫包被有偶联体和桥接体，其中该偶联体包括能特异 性结合不同祀物质的多种第一分子、和与多种第一分子结合的第一颗粒，桥接体包括能特 异性结合偶联体的连接体的第二分子;所述层析膜上不同区域的检测线固定有能特异性结 合不同祀物质的多种第Ξ分子。
[0010] -种检测祀物质的免疫层析试纸，包括依次搭接粘贴在底板上的样品垫、第二结 合垫、第Ξ结合垫、层析膜、吸水垫;所述第Ξ结合垫包被有偶联体，该偶联体包括能特异性 结合不同祀物质的多种第一分子、连接体及与多种第一分子和连接体结合的第一颗粒，所 述第二结合垫包被有具有能特异性结合偶联体的连接体的第二分子的桥接体;所述层析膜 上不同区域的检测线固定有能特异性结合不同祀物质的多种第Ξ分子。
[0011] -种检测祀物质的免疫层析试纸，包括依次搭接粘贴在底板上的样品垫、第二结 合垫、第Ξ结合垫、层析膜、吸水垫;所述第Ξ结合垫包被有偶联体，该偶联体包括能特异性 结合不同祀物质的多种第一分子、和与多种第一分子结合的第一颗粒;所述第二结合垫包 被有具有能特异性结合偶联体的多种第一分子的第二分子的桥接体;所述层析膜上不同区 域的检测线固定有能特异性结合不同祀物质的多种第Ξ分子。
[0012] 优选地，所述第二结合垫与第Ξ结合垫调换位置顺序。
[0013] -种检测祀物质的免疫层析装置，包括反应微孔和免疫层析试纸，该免疫层析试 纸包括依次搭接粘贴在底板上的样品垫、第四结合垫、层析膜、吸水垫;所述反应微孔含有 偶联体，该偶联体包括能特异性结合不同祀物质的多种第一分子、连接体及与多种第一分 子和连接体结合的第一颗粒;所述第四结合垫包被有具有能特异性结合偶联体的连接体的 第二分子的桥接体，所述层析膜上不同区域的检测线固定有能特异性结合不同祀物质的多 种第Ξ分子。
[0014] -种检测祀物质的免疫层析装置，包括反应微孔和免疫层析试纸，该免疫层析试 纸包括依次搭接粘贴在底板上的样品垫、第四结合垫、层析膜、吸水垫;所述反应微孔含有 偶联体，该偶联体包括能特异性结合不同祀物质的多种第一分子、和与多种第一分子结合 的第一颗粒;所述第四结合垫包被有具有能特异性结合偶联体的多种第一分子的第二分子 的桥接体，所述层析膜上不同区域的检测线固定有能特异性结合不同祀物质的多种第Ξ分 子。
[0015] -种祀物质的免疫渗滤装置，由渗滤卡、封闭液、偶联体、桥接体、洗涂液组成，其 中渗滤卡由卡底、吸水垫料、渗滤膜、卡盖依次叠加组成，该免疫渗滤装置的检测方法包括 W下步骤： 1) 往渗滤膜上滴加一滴封闭液； 2) 液体滤过之后，滴加一滴血清样本； 3) 血清滤完之后，滴加一滴洗涂液； 4) 滤完之后滴加一滴权利要求1或2所述的偶联体、一滴权利要求1或2所述的桥接体； 5) 等液体滤完之后，滴加一滴洗涂液； 6) 滤完之后，观察结果； 其中，渗滤膜上不同区域的检测点固定有能特异性结合不同祀物质的多种第Ξ分子。
[0016] 本发明具有如下有益效果： 本发明的信号放大方法将具有能特异性结合不同祀物质的多种第一分子与样品中不 同祀物质结合后与桥接体结合，随后由位于固相上的能特异性结合不同祀物质的多种第Ξ 分子捕获固定，从而得到信号放大效果，不但能够高灵敏检测祀物质，而且实现了多种祀物 质的同时检测。同样，也使用该信号放大方法制造出了高灵敏度且同时检测多种祀物质的 免疫层析试纸条或免疫层析装置，其层析膜上不同区域上设有多个检测线，各个检测线的 夹屯、反应不会相互影响，达到了一份液体样品同时检测多种祀物质，且在同样条件下进行， 既节约了检测时间，也减小了检测误差，同时降低了检测成本。
【附图说明】
[0017] 图1为本发明同时检测两种祀物质的信号放大的原理示意图； 图2为本发明一种使用该信号放大方法同时检测多种祀物质的免疫层析试纸的结构示 意图； 图3为本发明另一种使用该信号放大方法同时检测多种祀物质的免疫层析试纸的结构 示意图。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合附图及实施例对本发明进行详细的说明，实施例仅是本发明的优选实施 方式，不是对本发明的限定。
[0019] 本发明所提及的术语"连接体"表示通过特异性反应(如:抗原-抗体反应、核酸杂 交反应)与第Ξ分子特异性结合使得偶联体与桥接体结合的材料;术语"桥接体"表示通过 特异性反应(如:抗原-抗体反应、核酸杂交反应)与偶联体上的连接体或第一分子进行特异 性结合将偶联体桥接在一起形成树枝状结构的材料。
[0020] 本发明的信号放大方法中，偶联体包括多种第一分子、连接体及与多种第一分子 和连接体结合的第一颗粒，多种第一分子能分别特异性结合不同的祀物质;桥接体包括能 特异性结合偶联体的连接体的第二分子;在检测时，偶联体上多种第一分子与样品中的不 同祀物质结合，随后桥接体的第二分子与偶联体的连接体结合将偶联体桥接在一起形成多 个树枝状结构，该树枝状结构上含有多种不同的祀物质，位于固相上的能特异性结合不同 祀物质的多种第Ξ分子捕获该树枝状结构上的多种祀物质(偶联体的第一分子与位于固相 上的第Ξ分子分别结合同一祀物质上的不同位点），进而达到放大信号的目的。当桥接体的 第二分子可与偶联体的第一分子结合，则偶联体上可不含有连接体。
[0021] 所述祀物质可W为蛋白质分子、蛋白质分子复合物、核酸、核酸复合物中的任意一 种，还可w是其他能够发生特异性结合的分子。
[0022] 多种第一分子包括至少两种能特异性结合不同祀物质的单克隆抗体或多克隆抗 体，但不局限于抗体。多种第Ξ分子包括至少两种能特异性结合不同祀物质的单克隆抗体 或多克隆抗体，但不局限于抗体。所述第一分子和第Ξ分子可W相同或不同。
[0023] 连接体可W是蛋白质、核酸、多糖、肤等可W与桥接体发生特异性结合的材料。
[0024] 桥接体可W是能特异性结合偶联体的连接体或第一分子的第二分子，还可W是偶 联有能特异性结合偶联体的连接体或第