一种新型改进免疫层析试纸条及其制备和应用
【技术领域】
[0001 ]本发明属于生物技术领域，具体来说，设及一种新型改进免疫层析试纸条构建及 其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 免疫层析法是二十世纪九十年代兴起的快速诊断技术，其原理是利用抗原抗体反 应，在反应膜上预先固定好特异性抗原（或抗体)和第二抗体两种捕获剂，分别作为检测线 (Test line)和对照线（Con化〇1 line);及固定于胶体微粒结合物释放垫上并标记了抗待 测物抗体的胶体微粒。试纸条插入样品液中，样品液先溶解固定在胶体微粒结合物释放垫 上的胶体微粒，并与之发生特异性反应并形成复合物，当溶液在毛细管作用下到达抗原(或 抗体）区域(检测线)时，检测线上的特异性抗原与待测物和胶体微粒复合物再次发生特异 性结合，而被截留在检测线上，并显示出颜色。因此，可W根据试纸条检测线的颜色深浅或 有无来判断溶液中是否含有待测物。该方法与W往常规诊断方法相比具有W下突出优点：
[0003] 1).快速:全部检测过程仅需3-20分钟；
[0004] 2).简便:不需其它任何仪器设备，操作也极其简单，可随时随地进行；
[0005] 3).灵活:对标本既能成批检测，又可单份检测，患者可立刻拿到结果，不必等待；
[0006] 4).稳定:试剂稳定性好，可长期保存。
[0007] 该技术自发明W来得到了快速的发展，并应用在多个检测领域。被广大基层医疗 机构和家庭个人用户接受。是进行定性或半定量检测的一种有效途径，适用的检测标本种 类广泛。既可用于检查血，又可用于检验尿液或唾液，因而适合各种人群的疾病检查。
[000引传统旧有的免疫层析试纸条构成如图1所示，免疫层析试纸条主要包含五个部分： 加样区(样品垫）1、标记区（标记了抗待测物抗体的胶体微粒结合物释放垫)2、显示区（反应 膜)4、吸水区（吸收垫)6W及背衬7。所述试纸条由样品垫1、标记了抗待测物抗体的胶体微 粒结合物释放垫2、反应膜4、吸收垫6顺次搭接粘贴在背衬7上构成。其中，标记区(标记了抗 待测物抗体的胶体微粒结合物释放垫)2与显示区（反应膜)4是紧密相邻的。采用图1构成传 统旧有的免疫层析试纸条结合了免疫学实验的原理与薄层色谱技术，操作非常简单。
[0009]但是，传统旧有的免疫层析试纸条在设置存在着一个明显的缺陷，即在使用过程 中标记了抗待测物抗体的胶体微粒从结合物释放垫上崩解后就直接到达显示区并迅速地 通过了检测线3(Test line)。在运个过程中，标记了抗待测物抗体的胶体微粒往往无法迅 速均一地复溶在检测样品中，并与对应的目的检测物充分地进行免疫反应。事实上，在许多 传统旧有的免疫层析试纸条的检测中发现，由于传统旧有的免疫层析试纸条设置的局限， 加上抗待测物抗体的胶体微粒制作工艺的不完善W及检测样品在粘度及体积上的差异，使 得许多传统旧有的免疫层析试纸条中抗待测物抗体的胶体微粒崩解后均复溶得很不充分， 致使显示区（反应膜)膜面出现很多成团的不均匀的胶体微粒层析现象，即便有些免疫层析 试纸条表面上看起来较好的解决了标记了抗待测物抗体的胶体微粒从胶体微粒结合物释 放垫上的崩解后与检测样品的溶解问题，在显示区（反应膜)膜面上标记了抗待测物抗体的 胶体微粒裸眼目测也较为均匀，但实际上将崩解后标记了抗待测物抗体的胶体微粒与检测 样品的混溶液放在显微镜下观察，就可W看到标记了抗待测物抗体的胶体微粒并没有充分 均一地溶解在检测样品中因而无法与对应的目的检测物进行充分地免疫反应。致使标记 了抗待测物抗体的胶体微粒结合物释放垫的效率不能得到充分的发挥。运导致了传统旧有 的免疫层析试纸条灵敏度低、假阳性较高及检测线色不匀等质量问题，因此有必要对传统 旧有的免疫层析试纸条设置进行改良W弥补上述不足，W便进一步提高免疫层析试纸条灵 敏度及检测线色不匀等质量问题。
【发明内容】
[0010] 本发明提供了一种新型改进免疫层析试纸条及其制备和应用，本发明提供的试纸 条结构见图2.
[0011] 本发明经过大量研究，意外地发现如果在标记了待测物抗体的胶体微粒结合物释 放垫2与显示区（反应膜)4之间增设一个缓冲垫8,让从胶体微粒结合物释放垫2上崩解下来 的抗待测物抗体的胶体微粒上反应膜之前，能在缓冲垫8内更均一地溶解在检测样品中，并 获得相对充足的反应时间与对应的目的检测物进行更充分地免疫反应。从而达到抗待测物 抗体与样品中目的检测物反应效率的最大化的结果。结构示意图见图2。
[0012] 针对不同的检测样品W及相关免疫层析试纸条质控要求，缓冲垫8可选用的材质 包括有:玻璃纤维、滤纸、无纺布、无尘纸、反应膜、聚醋膜、高分子复合物等;优选无尘纸。
[0013] 针对不同的检测样品W及相关免疫层析试纸条质控要求，缓冲垫8可选用的材质 尺寸：厚度 0.1mm-1mm，长度 3mm-10mm。
[0014] 本发明中，标记待测物抗体的胶体微粒优选为胶体金。
[0015] 针对不同的检测样品W及相关免疫层析试纸条质控要求，缓冲垫8引入缓冲盐体 系W控制体系的PH值促进抗待测物抗体的胶体微粒溶解并充分地进行免疫反应。
[0016] 缓冲垫8(图2)可引入缓冲盐体系包括有:碳酸盐缓冲盐、棚酸盐缓冲盐、憐酸盐缓 冲盐、巧樣酸盐缓冲盐、Tris-HCl缓冲盐等;本发明的优选方案为:检测样本为血液类时，优 选棚酸盐缓冲盐;检测样本为尿液，优选化i S-肥1缓冲盐;检测样本为分泌物时，优选憐酸 盐缓冲盐。
[0017] 针对不同的检测样品W及相关免疫层析试纸条质控要求，缓冲垫8可引入的缓冲 盐体系所控制的PH值范围为6-10，优选PH范围为7.4-8.5。
[0018] 针对不同的检测样品W及相关免疫层析试纸条具体要求，可在胶体微粒结合物缓 冲垫8引入缓冲盐体系的基础上进一步加入表面活性剂。胶体微粒结合物缓冲垫8上可加入 的表面活性剂缓冲盐体系包括有:非离子型表面活性剂；阴离子型表面活性剂及两性离子 型表面活性剂。
[0019] 胶体微粒结合物缓冲垫8上可加入的非离子型表面活性剂优选:吐溫系列、曲通系 列、NP系列、0P乳化剂系列、高级脂肪醇聚氧乙締酸及高级脂肪醇聚氧丙締酸系列中的一种 或几种促进免疫反应。最优选吐溫-20。
[0020] 胶体微粒结合物缓冲垫8上可加入的非离子型表面活性剂的质量百分比浓度浓度 范围优选为0.02%-0.5%:更优选0.05%-0.2%。
[0021] 胶体微粒结合物缓冲垫8上可加入的阴离子型表面活性剂优选:十二烷基硫酸钢、 直链烷基苯横酸钢、a-締控横酸盐、烷基横酸盐、X-横基单簇酸及其衍生物、脂肪酸横烷基 醋和脂肪酸横烷基酷胺、油酷氧基乙横酸钢、二辛基班巧酸横酸钢、胆酸钢、去氧胆酸钢、硫 酸醋盐、憐酸醋盐等及其类似结构的阴离子表面活性剂一种或几种促进促进抗待测物抗体 的胶体微粒溶解并充分地进行免疫反应。最优选十二烷基硫酸钢。
[0022] 胶体微粒结合物缓冲垫8上可加入的阴离子型的表面活性剂的质量百分比浓度浓 度范围优选为0.02%-0.5%:更优选为0.05%-0.2%。
[0023] 针对不同的检测样品W及相关免疫层析试纸条质控要求，可在缓冲垫8进一步引 入无机盐及金属络合剂促进促进抗待测物抗体的胶体微粒溶解并充分地进行免疫反应。无 机盐及金属络合剂包括有:船(：1、船(：03、1(2(：03、邸了4、邸了4-船2等；
[0024] 针对不同的检测样品W及相关免疫层析试纸条具体要求，可在缓冲垫8进一步引 入亲水的高分子促进抗待测物抗体的胶体微粒溶解并充分地进行免疫反应。亲水的高分子 包括有:PVP系列、PEG系列、PVA系列及天然的琼脂、明胶等;优选PVP系列。
[0025] 针对不同的检测样品W及相关免疫层析试纸条具体要求，可在缓冲垫8进一步引 入天然生物大分子促进抗待测物抗体的胶体微粒溶解并充分地进行免疫反应。天然生物大 分子包括有:BSA系列、OVA系列、酪蛋白、奶粉及脱脂奶粉等;优选酪蛋白。
[0026] 针对血液类检测样品，还可在缓冲垫8引入的动物血清用于消除或减少非特异性 反应。动物血清包括有:小鼠血清、山羊血清、羊血清等；
[0027] 可在缓冲垫8引入的其它试剂还包括有:蛋白A、植物凝集素、特异性抗体或抗原、 阻断剂等，去除非特异性，减少假阳的发生率。
[0028] 本发明提供的新型改进免疫层析试纸条，解决了现有技术中的试纸条标记了抗待 测物抗体的胶体微粒无法迅速均一地复溶在检测样品中，并与对应的目的检测物充分地进 行免疫反应的不足，克服或消除了显示区（反应膜)膜面出现很多成团的不均匀的胶体微粒 层析现象、W及标记了抗待测物抗体的胶体微粒金标结合物释放垫的效率不能得到充分的 发挥等质量问题。通过对传统旧有的免疫层析试纸条设置的改进，本发明与现有的免疫层 析试纸条相比，具有灵敏度高、假阳性低及检测线色均匀等优点，而且成本低廉，制作简便， 适用于各种形式的免疫层析法检测试纸。
【附图说明】
[0029] 图1为传统旧有的免疫层析法检测试纸结构示意图。其中，1为加样区（样品垫）、2 为标记区（标记了抗待测物抗体的胶体微粒结合物释放垫）、3为检测线、4为显示区（反应 膜）、5为对照线、6为吸水区（吸收垫）、7为背衬。
[0030] 图2为本发明实施例中新型改进的免疫层析法检测试纸结构示意图。其中，1为加 样区（样品垫）、2为标记区（标记了抗待测物抗体的胶体微粒结合物释放垫）、3为检测线、4 为显示区(反应膜）、5为对照线、6为吸水区（吸收垫）、7为背衬、8为缓冲垫