一种测定畜禽养殖废水中抗生素的方法
【专利摘要】本发明提供了一种测定畜禽养殖废水中抗生素的方法，属于分析化学领域；其所述的测试方法包括前处理、离心、富集、洗脱、HPLC检测五个步骤，可检测磺胺类、四环素类、大环内酯类三大类抗生素。本发明可以同时检测三大类抗生素，检测效果好，通过对样品的前处理，去除干扰项；本发明操作简单，建立了前处理、提取、测定的分析方法，在短时间内就可以对九大类抗生素进行快速的分离检测，具有可操作性强、高效、快速等优点。
【专利说明】
一种测定畜禽养殖废水中抗生素的方法
技术领域
[0001] 本发明属于分析化学领域，具体涉及一种测定畜禽养殖废水中抗生素的方法。
【背景技术】
[0002] 在国内外的规模化畜禽养殖场中，抗生素被广泛地添加到动物饲料和饮用水中， 用以预防和治疗动物传染病及促进动物生长。抗生素可能在动物体内选择性地培育出耐药 菌株，通过食物链间接传染到人类，而进入环境中的耐药菌株通过直接接触感染人类。此 外，长期饮用含低浓度抗生素的自来水，也可能在人体内选择性地培育出耐药菌株。由于很 多兽用和人用抗生素的化学结构相同或相似(从而其作用机理也相同或相似），在动物和人 体内的细菌中已经发现同样的耐药基因。畜禽养殖业是环境水体中抗生素的主要来源之 〇
[0003] 抗生素的检测对于抗生素的有效去除、在环境中的迀移转化、生物有效性、生态毒 理性等方面具有重大的现实意义。目前，抗生素的检测方法的检测方法主要有微生物法、免 疫分析法、HPLC、毛细管电泳法、薄层色谱法、pH计法等，不同的检测方法适用于不用的领 域。
[0004] 畜禽养殖废水中普遍存在磺胺类、四环素类、大环内酯类抗生素，对于这三类抗生 素的检测已有相关的文献和专利，其中CN201110267859公开了一种测定土壤、污泥及动物 废水中磺胺类及四环素类抗生素的方法，CN201310247043公开了一种同时检测水中四环素 类抗生素的方法。但对于同时检测三大类的抗生素的方法没有相关报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种测定畜禽养殖废水中抗生素的方法，本检测方法可以 同时检测磺胺类、四环素类、大环内酯类抗生素，操作简便，节约时间。
[0006] 本发明中所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现:一种测定畜禽养殖废 水中抗生素的方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0007] (1)前处理:取一定量的畜禽养殖废水，加入柠檬酸和乙二胺四乙酸二钠，调节pH 值至 3.5-4.5。
[0008] (2)离心：将经过步骤（1)处理的水样加入乙腈：乙酸=99-99.9:1的离心试剂，然 后进行离心分离，取离心上清液；
[0009] (3)富集:依次用甲醇、乙腈和超纯水活化HLB小柱，然后通入待富集水样，富集完 毕后用超纯水淋洗，并在真空条件下抽干；
[0010] (4)洗脱:将步骤(3)中的HLB小柱用甲醇：四氢呋喃：乙腈=55:5:40的洗脱液进行 洗脱，收集洗脱液并浓缩，得到浓缩样品；
[0011] (5 )HPLC检测:将浓缩液用乙腈：四氢呋喃=90:10的混合液定容，进行高效液相色 谱检测。
[0012] 进一步地，所述的检测的抗生素包括磺胺类、四环素类、大环内酯类抗生素。
[0013] 进一步地，所述的步骤（1)中柠檬酸的添加量为0.1~1 % (w/w)，乙二胺四乙酸二 钠的添加量为〇. 2-1.5% (w/w)。
[0014] 进一步地，所述的HPLC检测的色谱条件为：色谱柱：C18柱，250mm X 4 ? 6mm，5与m; 流动相：乙腈：四氢呋喃:0.5 %的乙酸溶液(72:18:10);流速：1. OmL/min;柱温:30 °C ;进样 量：20矣L。
[0015] 畜禽养殖废水中的抗生素主要包括磺胺类、四环素类、大环内酯类，其中磺胺类的 抗生素包括磺胺噻唑（STZ)、磺胺甲恶唑（SMX)、磺胺地索辛（SDM)、磺胺二甲嘧啶（SMN)、磺 胺甲二唑（SML)，四环素类的抗生素包括四环霉素(TCN)、土霉素(0TC)、金霉素(CTC)，大环 内酯类的抗生素包括泰妙菌素(TIA)。
[0016] 本发明的有益效果如下：
[0017] 本发明可以同时检测三大类抗生素，检测效果好，通过对样品的前处理，去除干扰 项;本发明操作简单，建立了前处理、提取、测定的分析方法，在短时间内就可以对九大类抗 生素进行快速的分离检测，具有可操作性强、高效、快速等优点。
【具体实施方式】
[0018] 下面详细说明本发明的具体实施，有必要在此指出的是，以下实施只是用于本发 明的进一步说明，不能理解为对发明保护范围的限制，该领域技术熟练人员根据上述本发 明内容对本发明做出的一些非本质的改进和调整，仍然属于本发明的保护范围。
[0019] 实施例1
[0020] -种测定畜禽养殖废水中抗生素的方法，测试步骤：
[0021] (1)前处理:取200g的畜禽养殖废水，加入0 ? 3% (w/w)柠檬酸和0 ? 5% (w/w)乙二胺 四乙酸二钠，调节pH值至4.5。
[0022] (2)离心:将经过步骤（1)处理的水样加入乙腈：乙酸=99:1的离心试剂，然后进行 离心分离，取离心上清液；
[0023] (3)富集:依次用甲醇、乙腈和超纯水活化HLB小柱，然后通入待富集水样，富集完 毕后用超纯水淋洗，并在真空条件下抽干；
[0024] (4)洗脱:将步骤(3)中的HLB小柱用甲醇：四氢呋喃：乙腈=55:5:40的洗脱液进行 洗脱，收集洗脱液并浓缩，得到浓缩样品；
[0025] (5 )HPLC检测：将浓缩液用乙腈：四氢呋喃=90:10的混合液定容，进行高效液相色 谱检测。
[0026] 实施例2
[0027] -种测定畜禽养殖废水中抗生素的方法，测试步骤：
[0028] (1)前处理:取200g的畜禽养殖废水，加入l%(w/w)柠檬酸和1.5%(w/w)乙二胺四 乙酸二钠，调节pH值至3.5。
[0029] (2)离心:将经过步骤（1)处理的水样加入乙腈：乙酸=99.9:1的离心试剂，然后进 行离心分离，取离心上清液；
[0030] (3)富集:依次用甲醇、乙腈和超纯水活化HLB小柱，然后通入待富集水样，富集完 毕后用超纯水淋洗，并在真空条件下抽干；
[0031] (4)洗脱:将步骤(3)中的HLB小柱用甲醇：四氢呋喃：乙腈=55:5:40的洗脱液进行 洗脱，收集洗脱液并浓缩，得到浓缩样品；
[0032] (5 )HPLC检测：将浓缩液用乙腈：四氢呋喃=90:10的混合液定容，进行高效液相色 谱检测。
[0033] 其中，所述的检测的抗生素包括磺胺类、四环素类、大环内酯类抗生素。
[0034] 其中，所述的HPLC检测的色谱条件为：色谱柱：C18柱，250mmX4? 6mm，5 流动 相：乙腈：四氢呋喃：0.5%的乙酸溶液(72:18:10);流速：1. OmL/min;柱温：30°C ;进样量： 20 ^L〇
[0035]对本发明中所公开的实施方式的描述并非为了限制本发明的范围，而是用于描述 本发明。相应地，本发明的范围不受以上实施方式的限制，而是由权利要求或其等同物进行 限定。
【主权项】
1. 一种测定畜禽养殖废水中抗生素的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 前处理：取一定量的畜禽养殖废水，加入柠檬酸和乙二胺四乙酸二钠，调节pH值至 3.5-4.5〇 (2) 离心：将经过步骤（1)处理的水样加入乙腈：乙酸= 99-99.9:1的离心试剂，然后进 行离心分离，取离心上清液； (3) 富集:依次用甲醇、乙腈和超纯水活化HLB小柱，然后通入待富集水样，富集完毕后 用超纯水淋洗，并在真空条件下抽干； (4) 洗脱：将步骤（3)中的HLB小柱用甲醇：四氢呋喃：乙腈= 55: 5:40的洗脱液进行洗 脱，收集洗脱液并浓缩，得到浓缩样品； (5 )HPLC检测:将浓缩液用乙腈：四氢呋喃=90:10的混合液定容，进行高效液相色谱检 测。2. 根据权利要求1所述的测定畜禽养殖废水中抗生素的方法，其特征在于，所述的检测 的抗生素包括磺胺类、四环素类、大环内酯类抗生素。3. 根据权利要求1所述的测定畜禽养殖废水中抗生素的方法，其特征在于，所述的步骤 (1)中柠檬酸的添加量为〇. 1~1 % (w/w)，乙二胺四乙酸二钠的添加量为0.2-1.5% (w/w)。4. 根据权利要求1所述的测定畜禽养殖废水中抗生素的方法，其特征在于，所述的HPLC 检测的色谱条件为:色谱柱:C18柱，250mm X 4.6mm，5与m;流动相：乙腈：四氢呋喃:0.5 %的 乙酸溶液(72:18:10);流速：1. OmL/min;柱温:30°C ;进样量：20今：U
【文档编号】G01N30/02GK105929047SQ201610242511
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年4月19日
【发明人】韩哲, 朱英, 邵艳秋, 田超, 杨凯, 唐厚全
【申请人】山东省科学院新材料研究所