一种检测粪便中钙卫蛋白的试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及一种检测粪便中钙卫蛋白的试剂盒及其制备方法。
【背景技术】
[0002]I丐卫蛋白(Calprotectin)是一个分子量为36kD的I丐、锌结合蛋白，由两条分子量为14kD的重链和一个分子量为8kD的轻链以共价键连接的钙结合蛋白质异三聚体组成，每条链可结合两个Ca2+，从而具有耐热性和增强水解性的特性，其蛋白结构是由2个亚单位S-100A8和S-100A9组成的复合物。它分布于人体的粒细胞、单核细胞、上皮细胞、角化细胞和各种组织及体液中，是保护性蛋白。
[0003]钙卫蛋白是一种急性炎症标志物，来源于中性粒细胞和巨噬细胞的含钙蛋白，其表达具有组织或细胞特异性，是一种杂合性的钙结合蛋白，具有抗蛋白酶的活性，并具有螯合锌离子能力而具有抗热性。钙卫蛋白具有抗微生物、调节免疫、抗增殖、传递信号等多种生物学功能，在许多炎症情况下升高。在炎症反应时，中性粒细胞进入组织是一个主动积极的过程，它在趋化因子的作用下，通过消耗能量，呈阿米巴样变性运动，钻出血管壁到达炎症区域，分化成熟为巨噬细胞，这部分巨噬细胞作为炎症的效应细胞，释放各种炎症因子，同时进行吞噬发挥其生物学功能。在中性粒细胞中，钙卫蛋白主要存在于溶菌酶外的细胞质中，大约占中性粒细胞蛋白总量的5%。当中性粒细胞激活时，磷酸化的钙卫蛋白移位到细胞膜上，作为酶的竞争性抑制底物，可抑制对细胞增殖起重要作用的酶(酪蛋白激酶Π和拓扑异构酶等)。钙卫蛋白还可以刺激免疫球蛋白的生成、趋化因子的活化以及中性粒细胞固定因子的活化。
[0004]炎症性肠病(IBD)为累及回肠、直肠、结肠的一种特发性肠道炎症性疾病。临床表现腹泻、腹痛，甚至可有便血。炎症性肠病是一种病因尚不明确的慢性非特异性肠道炎症性疾病，包括溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)。前者是一种慢性非特异性结肠炎症，病变主要累及结肠黏膜和黏膜下层，范围多自远段结肠开始，可逆行向近段发展，甚至累及全结肠及末段回肠，呈连续性分布，临床主要表现为腹泻、腹痛和黏液浓血便。后者为一种慢性肉芽肿性炎症，病变可累及胃肠道各部位，以末段回肠及其邻近结肠为主，呈穿壁性炎症，多呈节段性、非对称性分布，临床主要表现为腹痛、腹泻、瘘管、肛门病变灯。两者均可合并不同程度的全身症状。
[0005]研究发现，在炎症性肠病(IBD)患者的粪便中的钙卫蛋白水平明显高于结肠癌患者及肠易激综合征(IBS)患者，并且与患者病变程度呈正相关。在结肠癌诊断过程中，粪便潜血检查(F0BT)是一种广泛运用的方法，它是通过检测粪便中的血红蛋白、血红素等而判断消化道疾病的，因此不能发现无出血的病变，而结肠癌可以向周边组织浸润，产生炎性细胞，引起一定水平的钙卫蛋白表达，因此粪便中钙卫蛋白含量相比较正常者有所增高。对于肠易激综合征(IBS)患者，临床医师主要根据病史和临床特征作出初步诊断，同时进行相应的辅助检查，如结肠镜和钡灌肠等，除外器质性肠病后才能得出肠易激综合征(IBS)诊断，进行拉网式筛查成为肠易激综合征(IBS)诊断的主要方法，在一定程度上增加了医疗费用和患者的痛苦。而钙卫蛋白主要在炎性细胞如中性粒细胞和活化的巨噬细胞质中表达，故而肠易激综合征(IBS)无炎性反应，钙卫蛋白水平较低。
[0006]因此，检测粪便中的钙卫蛋白可以作为区分炎症性肠病、结肠癌、肠易激综合征，并用来监测炎症性肠病的活动性，对疾病的复发、治疗效果具有重要指导意义。目前用于检测钙卫蛋白的方法主要是酶联免疫吸附试验(ELISA)，ELISA法虽然灵敏度较高，但是操作比较繁琐，检测耗时比较长，并且检测设备较大不便于移动，因此需要一个操作简便、检测快速的方法来检测钙卫蛋白的含量。
【实用新型内容】
[0007]针对现有技术的不足，本实用新型提供了一种操作简单，性能可靠，成本低廉的试剂盒。
[0008]为了实现上述目的，本实用新型采用的技术方案如下:
[0009]一种检测粪便中钙卫蛋白的试剂盒，包括PVC胶板，设置于PVC胶板上表面的硝酸纤维素膜、吸水垫、有色微粒/荧光微粒结合物垫、样本垫，以及设置于硝酸纤维素膜上表面的检测线和质控线。
[0010]具体地，所述硝酸纤维素膜位于PVC胶板中部;所述吸水垫位于PVC胶板的其中一端，且吸水垫的一端搭接于硝酸纤维素膜上表面;所述有色微粒/荧光微粒结合物垫位于PVC胶板的另一端，且有色微粒/荧光微粒结合物垫的一端搭接于硝酸纤维素膜上表面;所述样本垫位于PVC胶板另一端的端部，且样本垫的一端搭接于有色微粒/英冠微粒结合层上表面。
[0011]具体地，所述样本垫、有色微粒/荧光微粒结合物垫、硝酸纤维素膜、吸水垫的宽度与PVC胶板的宽度相等，且所述样本垫、有色微粒/荧光微粒结合物垫、硝酸纤维素膜、吸水垫均是黏附于PVC胶板上表面的。
[0012]具体地，所述检测线为包被有固相化的鼠抗人钙卫蛋白单抗的检测线。
[0013]具体地，所述质控线为包被有羊抗鼠IgG多抗的质控线。
[0014]具体地，所述有色微粒/荧光微粒为胶体金、乳胶微球或荧光微球。
[0015]具体地，所述吸水垫为吸水滤纸。
[0016]另外，本实用新型还包括用于容纳PVC胶板的卡盒，且在卡盒内设有加样孔。
[0017]本实用新型进行检测时，具体是将经过样本处理液处理后的粪便提取液用移液枪吸取looyl加入试剂盒加样孔，常温下反应4分钟，观察反应结果；
[0018]或者将粪便提取液置于大便前处理系统中，由系统自动将提取液加入试剂盒加样孔，常温下反应3?5分钟，再观察反应结果。
[0019]当样本中的钙卫蛋白含量215yg/g时，检测结果将为阳性。
[0020]本实用新型与现有技术相比，具有以下优点及有益效果:
[0021]本实用新型操作简单，性能可靠，成本低廉。
【附图说明】
[0022]图1为本实用新型的结构不意图。
[0023]图2为本实用新型阴阳性判别示意图。
[0024]其中，附图中标记对应的零部件名称为:1-PVC胶板，2-硝酸纤维素膜，3-吸水垫，4-有色微粒/荧光微粒结合物垫，5-样本垫，6-检测线，7-质控线。
【具体实施方式】
[0025]下面结合附图和实施例对本实用新型作进一步说明，本实用新型的实施方式包括但不限于下列实施例。
实施例
[0026]如图1所